全層骨軟骨欠損の羊モデルの確立と評価

軟骨は、骨格系の機械的能力を維持する上で重要な役割を果たし、下顎関節に滑らかで潤滑された表面を提供し、関節面の侵食を防ぎます。関節における物理的・機械的荷重を支え分散する驚くべき能力があるにもかかわらず、損傷の場合、関節軟骨は内在的な治癒や修復能力に限界を持っています。関節軟骨に蓄積する緊張は、変形性関節症と呼ばれる病的状態を引き起こすことがあります。これは世界で最も一般的な変性性関節疾患の形態であり、世界中の成人人口の約10〜12%に影響を及ぼします。

軟骨再生と関節炎関節の機能回復は再生医療における重要な進歩を示しています。有望なアプローチとしては、自己軟骨細胞と幹細胞を生体材料と組み合わせて利用することが含まれます。これらの戦略を検証するためには、適切な動物モデルが不可欠であり、ラットやウサギのような小型動物は予備研究に有用ですが、羊のような大型動物は解剖学的および生体力学的に人間の関節に似ているためより適しています。

次に、大型動物における骨軟骨欠損を誘発する効率的なプロトコルを提示し、再生医療研究の理想的なモデルを提供します。手術室で剃った膝を消毒した後、動物を背側デキュビタス姿勢に置きます。手術切除の正確な位置を特定するには、動物の膝に触れて関節腔を見つけます。

およそ3〜5センチメートルの大きさで外科的切断を行います。切開が動物の顆頭の周辺に行われていることを確認しましょう。軟臼にアクセスするために、皮膚の下にある組織層を取り除きます。

切開部を清潔に保ち、汚染を防ぎ、手術の視認性を確保しましょう。注射器と針を使って滑液の採取を行います。リトラクターを位置づけて、顆頭表面を完全に露出させてください。

顆頭が露出しているほど、次の段階で損傷を誘発しやすくなります。8ミリのトレフィンドリルに整形外科用ドリルを取り付けて、動物の顆頭の損傷を促進します。ドリルを始める前に、望ましくない損傷を防ぐために、トレフィンが顆頭の中心に適切に位置していることを確認してください。

整形外科用ハンマーとオステオトームを使って、骨軟骨プラグの外科的摘出を行います。傷口の延長部分を滅菌ガーゼで洗浄し、病変の内部に血液や組織の破片が残っていないことを確認します。液体のgelMA製剤を200マイクロリットルを傷の内側に慎重に塗り、表面に達するまで続けます。

約5センチ離れた場所で3分間、傷部に紫外線を照射し、gelMAの架橋を可能にします。リトラクターを慎重に外してください。各組織層ごとに独立した縫合糸で病変を閉じ、血清腫の形成を防ぎます。

縫合する回数は手術切除の大きさによって異なります。感染を防ぐために縫合部に包帯を巻いてください。手術を7日間行った後も、羊は移動に困難を抱え続けます。

これらの困難は、動物の歩行評価時に観察された回転運動によっても明らかです。この観察により、私たちのプロトコルが動物の関節における骨軟骨損傷を誘発するのに効果的であったことが明らかになりました。4日間かけて、病変への治療に応じて動物の歩行が回復し、正しい歩行が始まります。

手術後6か月でヘマトキシリンおよびエオシン染色による組織学的評価が行われました。病変は完全な垂直裂け目として現れ、変形性関節症研究学会の国際評価尺度でスコア4に相当しました。一部の標本では軽度の滑膜過形成と軟骨の線維結合組織への置換が観察されました。

組織学的スコアでは自然進行群とgelMA治療群の両方で有意なばらつきが認められ、統計解析では治療間で有意差は認められませんでした。これは侵襲的な外科手術と組み合わせた動物実験であるため、動物は行動や回復にばらつきを示すことがあります。私たちの研究は、長期的な細菌感染を発症せずに大型動物の骨軟骨損傷を誘導するための効率的なプロトコルを示しました。