엘리트 복서의 운동 유발 대사 변화를 액체 크로마토그래피-질량분석법으로 분석하는 표준화된 대사체학 프로토콜

요약

이 프로토콜은 액체 크로마토그래피와 쿼드러폴 비행 시간 탠덤 질량분석(LC-QTOF-MS/MS)과 다변량 데이터 분석을 기반으로 한 표준화된 혈청 대사체학 워크플로우를 설명하며, 엘리트 남성 복서의 급성 및 단기 회복 관련 대사 변화를 프로파일링합니다.

초록

엘리트 복싱은 기존의 생리학적 측정으로는 완전히 포착되지 않는 빠른 대사 변화를 유발합니다. 액체 크로마토그래피-쿼드루폴 비행 시간 탠덤 질량분석법(LC-QTOF-MS/MS)을 기반으로 한 표준화된 비표적 혈청 대사체학 워크플로우가 7명의 엘리트 남성 복서의 스파링 전, 스파링 직후, 24시간 후 샘플에 적용되었습니다. 워크플로우에는 표준화된 샘플 수집, 통합 품질 관리 모니터링, 대사물 프로파일링, 다변량 통계 분석, 경로 해석이 포함되었습니다. 급성 스파링은 당화 및 포도당신생과 관련된 대사산물 변화와 관련이 있었으며, 24시간 시점은 황 대사와 연관되어 있었다.

인산딜리노시톨 PI(16:0/18:2(9Z,12Z))는 대련 직후 상태에서 강한 구별력을 보였으며, 티오설페이트는 24시간 회복 상태와 연관이 있었다. 이 결과들은 이 워크플로우를 활용해 7명의 엘리트 남성 복서 코호트에서 운동 관련 대사 변화의 재현 프로파일링을 뒷받침합니다. 이 프로토콜은 급성 운동과 단기 회복의 통제된 소규모 코호트 연구를 목적으로 하며, 재현 가능한 샘플 취급, 통합 품질 관리 모니터링, 해석 가능한 후속 분석을 강조합니다.

서론

엘리트 복싱은 2분간 3라운드의 고강도 스파링으로 특징지어지며, 무산소 및 유산소 대사의 조합에 의존하여 에너지 기질, 산화 스트레스 매개체, 조직 수리 관련 대사산물의 급격한 변화를 유발합니다. 전통적인 평가(혈중 젖산과 심박수)는 고립된 생리학적 종말만 포착하며, "스파링 전 기초선→ 급성 스트레스 → 24시간 회복에 걸친 전신적이고 상호 연결된 대사 변화를 해결하지 못합니다.

액체 크로마토그래피-쿼드러폴 비행 시간 연속 질량분석법을 통해 가능해진 비표적 대사체학은 생물 샘플 내 소분자 대사산물을 포괄적으로 프로파일링하여 이 한계를 해결합니다. 일반적으로 수천 개의 대사 피크를 감지하고, 엄선된 데이터베이스^{1, 2, 3}과 통합하여 수백에서 수천 개의 대사산물에 주석을 달습니다. 이 접근법은 전통적인 방법들이 놓치는 미묘한 대사 역학을 드러낼 수 있지만, 기존의 권투 중심 대사체 연구들은 표준화가 부족합니다: 통제된 스파링 프로토콜, 엄격한 품질 관리(QC) 단계, 장기 회복 시점을 생략하여 재현 불가능한 결과와 훈련 또는 회복 전략으로의 전환이 제한적이기 때문입니다 ^4,5.

액체 크로마토그래피-쿼드러폴 비행 시간 탠덤 질량분석법을 기반으로 한 표준화된 대사체 워크플로우가 엘리트 복서에게 최적화되어 급성 운동 반응과 지연된 회복을 모두 포착하도록 제시됩니다. 프로토콜은 일시적 스트레스와 지속적 적응을 구분하기 위해 세 가지 주요 시점(대련 전 [T0], 대련 직후 [T1], 대련 후 24시간 [T2])을 포함합니다 ^6,7,8. 중요한 기술적 특징은 다음과 같습니다: (1) 일관된 운동 강도를 보장하기 위한 통제된 스파링(최대 심박수⁸⁰–85%) ^7,9; (2) 저농도 혈청 대사산물의 민감한 검출을 위한 고해상도 LC-QTOF ^2,3,10; (3) 주성분 분석(PCA), 직교 부분 최소제곱-판별 분석(OPLS-DA), 쌍별 통계 검정을 포함한 다변량 및 단변량 분석을 통해 운동 반응성 대사산물 ^6,8,11을 식별; 그리고 (4) 단일 통합 혈청 QC 샘플(연구 샘플의 동량 혼합)을 여러 차례 주입하여 신호 드리프트에 대한 기기 안정성을 평가하는¹².

이 프로토콜은 다른 고강도, 단기 스포츠(예: 단거리 경주, 레슬링)에도 적용 가능할 수 있으나, 이러한 전환 가능성은 특정 스포츠 집단에서의 검증이 필요합니다. 본 연구에서는 이 워크플로우가 엘리트 남성 복서에서 스트레스와 회복의 대사 지표를 식별하는 예비 틀을 제공합니다. 이 워크플로우는 혈청 기반 비표적 대사체학을 사용하여 소규모 잘 특성화된 운동 집단에서 급성 운동과 단기 회복을 통제하는 연구에 가장 적합합니다. 다른 스포츠, 여성 운동선수, 더 큰 이질적 인구, 또는 추가 검증 없이 장기 적응 연구로 직접 외삽하는 데는 덜 적합할 수 있습니다.

이 연구는 엘리트 복싱 스파링으로 유발된 혈청 대사 변화를 특성화하고, 급성 스파링 후 반응과 24시간 회복 관련 변화를 구분하는 것을 목표로 했습니다. 급성 스파링은 주로 에너지 대사에 영향을 미치고, 24시간 회복은 산화환원 균형과 조직 수리와 관련된 대사산물과 관련이 있을 것이라고 가설이 세워졌다. 전체 워크플로우는 그림 1에 나와 있습니다.

프로토콜

모든 절차를 수도 체육 및 스포츠 대학 인간 연구 기관 윤리 위원회(승인 번호 2025A005)의 승인에 따라 수행하십시오.

주의: 모든 인간 혈액 샘플은 잠재적으로 감염될 수 있는 것으로 간주하세요. 장갑, 실험실 가운, 그리고 눈 보호구를 착용하세요. 기관 생물안전 절차에 따라 정맥 혈액 채취, 혈청 처리 및 폐기물 처리를 수행합니다. 샘플 취급 후 작업면을 오염 제거하세요.

주의: 메탄올, 아세토니트릴, 개미산은 유해 화학물질입니다. 인증된 화학 훈후드에서 용매 준비, 추출, 재구성 과정을 처리하세요. 피부 접촉과 흡입은 피하세요. 승인된 용기에 용매 폐기물을 수집하세요.

1. 연구 참가자 모집 및 준비

1. 20세에서 28세 사이의 엘리트 남성 복서 7명을 영입해 60-75kg 체급에서 경쟁합니다.
2. 각 참가자가 최소 5년의 전문 교육 경험과 대사 질환 병력이 없음을 확인하세요.
3. 최근 6개월 내에 근골격계 손상을 입은 참가자는 제외합니다.
4. 참가자들에게 3일 동안 탄수화물 55%, 단백질 25%, 지방 20%를 포함한 표준화된 식단을 따르도록 지시합니다.
5. 참가자들에게 최대 심박수의 60% 이상에서 격렬한 운동을 피할 것을 시험 전 48시간 동안 지시합니다.
6. 참가자들에게 혈액 채취 전 12시간 금식을 지시합니다. 금식 기간 동안 물 섭취를 허용하세요.
7. 스파링 1주 전 단계별 운동 테스트를 통해 최대 심박수를 측정하세요.
8. 탈진할 때까지 3분마다 러닝머신 속도를 1km/h씩 올리세요. 측정된 최대 심박수를 사용해 스파링 목표 강도를 정의하세요.

2. 스파링 프로토콜과 혈청 샘플 채취

1. 표준 6× 6m 복싱 링, 16온스 장갑, 가슴 스트랩 심박수 측정기를 준비하세요.
2. 표준화된 10분 워밍업을 실시하며, 8 km/h 속도로 5분간 조깅, 3분간 동적 스트레칭, 2분 섀도우복싱으로 구성됩니다.
3. 스파링 프로토콜은 다음과 같이 수행하세요.
   1. 각각 2분씩 세 라운드의 스파링을 진행합니다.
   2. 상대를 체급과 기술 수준별로 매치하세요.
   3. 라운드 사이에 1분간의 휴식 시간을 두세요.
   4. 세션 중 30초마다 심박수를 모니터링하세요.
   5. 심박수를 MHR의 80%–85%로 유지하기 위해 스파링 강도를 조정하세요.
   6. 심박수가 MHR의 90%를 넘으면 스파링을 일시정지하세요. 심박수가 목표 범위로 돌아온 후에만 스파링을 재개하세요.
4. 세 시점에 혈청 샘플을 채취하세요.
   1. T0 예열기 30분 후 8mL 혈청 분리관(SST) 1개를 사용해 주위정맥 전부에서 5mL의 정맥혈을 채취합니다.
   2. 새로운 SST를 사용해 T1 최종 검사 후 5분 이내에 5mL의 정맥혈을 채취하세요.
   3. 새로운 SST를 사용해 T0와 같은 시간에 5mL의 정맥혈을 채취하세요. 참가자들이 T0과 동일한 단식 및 활동 제한을 따르도록 하세요.
5. 혈액 샘플을 다음과 같이 처리하세요.
   1. 수집 후 1시간 이내에 각 SST를 11000 g × 4°C에서 15분간 원심분리합니다.
   2. 상부 혈청층 2–3 mL를 1.5 mL 크라이오비알에 옮깁니다.
   3. 냉동병은 즉시 -80 °C에 보관하세요.
   4. 각 샘플은 최대 두 번의 냉동-해동 사이클로 제한하세요.
6. 풀린 QC 샘플을 준비하세요.
   1. 21개의 연구 혈청 샘플(7명의 참가자의 T0, T1, T2)을 모두 얼음 위에서 해동한 후 양성 조제 합량을 진행합니다.
   2. 각 연구 샘플에서 동일한 알리코트를 1.5 mL 튜브 하나에 옮깁니다.
   3. 각 샘플에서 20 μL을 옮기면 최종 420 μL의 통합 QC 부피가 됩니다.
   4. 모인 QC 샘플을 10초 동안 소용돌이로 돌립니다.
   5. LC-QTOF-MS 분석 중 반복 주입에 pooled QC 샘플을 사용하여 기기 안정성과 신호 드리프트를 모니터링합니다.

3. 혈청 샘플에서 대사물 추출

1. -80 °C에서 냉동 혈청 샘플(T0, T1, T2, QC)을 제거하세요. 샘플을 얼음 위에 30분간 해동한 후 각 샘플을 10초간 소용돌이 상태로 해동하세요.
2. 혈청 100 μL을 1.5 mL 저단백 결합 미세원심분리관에 피펫 흡입합니다. 메탄올:아세토니트릴(1:1, v/v)으로 구성된 얼음 냉각 추출 용매 500 μL를 추가합니다. 30초 동안 소용돌이.
   1. 추출 중에는 내부 스탠다드를 추가하지 마세요. 최종 워크플로우에서 내부 표준 기반 추출 보정이나 하위 정규화를 적용하지 마십시오.
3. 튜브를 4°C의 얼음물 목욕에서 300W, 40kHz에서 10분간 소닉에이팅하세요. -20°C에서 1시간 배양하여 단백질을 침전시키세요.
4. 튜브를 13200 g × 4°C에서 20분간 원심분리합니다. 약 450μL의 상원액을 새로운 미세원심분리관으로 옮기고, 이 펠릿은 유해 생물학적 폐기물로 폐기합니다.
5. 상청액을 37°C, -0.09 MPa의 진공 농축기에서 45분 또는 완전히 건조될 때까지 건조합니다.
6. 건조 추출물을 100 μL 아세토니트릴: 물(1:1, v/v)에 재구성합니다. 30초 동안 소용돌이.
   참고: 아세토니트릴:워터(1:1, v/v)는 이 작업 흐름에서 사용된 역상 크로마토그래피 컬럼과 호환되었고 예비 시험에서 눈에 띄는 침전을 발생시키지 않았기 때문에 사용되었습니다.
7. 재구성된 용액을 13200g에서 4°C× 15분간 원심분리합니다. 약 90 μL의 상상액을 200 μL 인서트가 장착된 LC-MS 유리 바이알에 옮기고 바이알을 밀봉합니다.

4. 액체 크로마토그래피-질량 분석법 검출

1. 액체 크로마토그래피 시스템에 혈청 대사체학에 적합한 역상 크로마토그래피 컬럼을 설치합니다(재료표 참조). 컬럼 오븐을 40°C로 설정하세요.
2. 이동상 A를 0.1%(v/v) 형태로 초순수수에 준비합니다. 이동상 B를 아세토니트릴에 0.1%(v/v) 형태로 준비합니다.
3. 두 이동상을 0.22 μm 막을 통해 필터링합니다.
4. 유량을 400 μL/min, 주입 부피를 5 μL로 설정하세요.
5. 다음 구배를 적용하세요: 0.0–0.5분, 95% A, 5% B; 0.5–5.5분, 50% A와 50% B로 선형 구배; 5.5–9.0분, 5% A와 95% B에 대한 선형 구배; 9.0–10.5분, 5% A와 95% B; 10.5–12.0분, 95% A와 5% B 상태로 복귀 후 재평형
6. 액체 크로마토그래피 시스템을 전기분무 이온화원이 장착된 고해상도 질량분석기에 결합합니다.
7. 양 및 음 이온 모드로 데이터를 별도로 획득하세요.
8. 양의 이온 모드에서는 모세관 전압을 2500 V, 콘 전압을 30 V로 설정합니다.
9. 음의 이온 모드에서는 모세관 전압을 -2000 V, 원뿔 전압을 25 V로 설정합니다.
10. 해독 가스 온도를 500 °C, 용해 가스 흐름을 800 L/h, 원뿔 가스 흐름을 50 L/h로 설정합니다.
11. m/z 50–1200 구간의 데이터를 0.2초 스캔 시간에 획득하세요.
12. 0 V에서 낮은 충돌 에너지와 10–40 V에서 높은 충돌 에너지를 사용하여 탠덤 질량 분석법 데이터를 획득합니다.
13. 샘플을 다음 순서로 검사합니다: 재구성 용매 빈 주입 1회; 풀린 QC 샘플을 세 번 연속으로 주입; 모든 연구 샘플은 5개 연구 샘플마다 1회 빈 주입과 1회 QC 주입을 포함; 마지막 QC 주입; 그리고 마지막 빈 주입
14. 양자 양자 모드에서 데이터 품질과 분석 안정성을 통합-QC 상관분석과 주성분 분석(PCA) 클러스터링을 통해 평가합니다.
15. 0.8보다 큰 풀드 QC 상관계수를 해석하여 분석 시퀀스 전반에 걸쳐 허용 가능한 분석 안정성을 나타낸다고 해석합니다.

5. 데이터 전처리 및 통계 분석

1. 원시 액체 크로마토그래피-질량분석법 파일을 데이터 처리 소프트웨어에 가져오고, 보존-시간 정렬, 디컨볼루션, 피크 정렬, 특징 추출을 수행합니다(재료표 참조).
   1. 첫 번째 풀드 QC 주입을 정렬 기준으로 선택하세요.
   2. 선택한 소프트웨어의 기본 워크플로우를 사용하여 보존 시간 정렬, 디컨볼루션, 피크 정렬을 수행합니다. 보존 시간 내오± 0.1분, 질량 내오 ± 5 ppm을 사용하세요.
   3. 피크 피킹을 수행하고, 최소 한 그룹의 샘플 80% 이상에서 1000개 이상의 개체 수가 존재하는 강도의 특징을 유지합니다.
   4. 어느 이온 모드에서도 추가적인 후처리 정규화를 적용하지 마십시오.
   5. m/z, 보존 시간, 피크 영역 값을 포함한 처리된 특징 표를 내보내세요.
   6. Log2-변환 모두 최고 강도를 유지합니다.
   7. 각 특징에 대해 최소 양의 값의 5분의 1로 누락값을 임계합니다.
   8. 각 특징을 평균 중심에 두고 표준편차로 나누어 다변량 분석을 합니다.
   9. 변환 및 척도 행렬을 사용하여 주성분 분석(PCA), 부분 최소제곱-판별 분석(PLS-DA), 직교 부분 최소제곱-판별 분석(OPLS-DA), 군집화, 상관관계 분석을 수행하세요. 풍부도 플롯에는 원래 처리된 특징 강도를 사용하세요.
2. 인간 대사체 데이터베이스(HMDB), 교토 유전자 및 유전체 백과사전(KEGG), 그리고 해당되는 경우 LIPID MAPS 등 공개 대사체 데이터베이스와 특징을 대조하여 대사산물을 주석을 달아줍니다.
   1. 각 주석은 전구체 이온 질량 오류, 동위원소 분포, 그리고 연합 질량분석법 조각 일치로 점수를 부여합니다. 각 기준에 최대 20점을 부여하세요.
   2. 전구체 이온 질량 오차 창을 100 ppm, 조각 이온 질량 오차 창을 50 ppm로 적용합니다. 고정된 보존 시간 창을 적용하지 마세요.
   3. 60점 만점에 40점 이상의 주석을 기록하세요. 점수가 낮은 주석은 제외합니다.
3. 비교 그룹을 명확히 다음과 같이 정의하라: A = T0 (대련 전 대련), B = T1 (대련 직후), C = T2 (대련 후 24시간).
4. 통계 컴퓨팅 소프트웨어와 관련 분석 패키지를 사용하여 하위 통계 분석을 수행합니다(재료 표 참조).
   1. 단위 분산 스케일링 후 주성분 분석(PCA)을 실행하고 점수 그래프를 시각화하세요.
   2. A 대 B, B 대 C, A 대 C 모델에 대해 편소 최소제차-판별 분석(PLS-DA) 및 직교 편소제곱-판별 해석(OPLS-DA) 모델을 구축합니다.
   3. 표본 수가 최소 7일 때는 7배 교차 검증을 사용하세요. 표본 수가 7보다 작다면, 접힘의 수를 표본 수와 같게 설정한다.
   4. 모델 타당성을 평가하기 위해 200개의 순열 검정을 수행하세요.
   5. 다음 임계값을 적용하여 차등 대사산물을 스크리닝합니다: 폴드 변화(FC) ≥ 2 또는 FC ≤ 0.5, 투영 중 가변 중요도(VIP) ≥ 1, t-검정 P. < 0.05.
   6. 화산 플롯과 관련 통계 그래픽을 생성하여 쌍별 비교를 할 수 있습니다.
   7. log2 변환 및 단위 분산 척도 행렬을 사용하여 히트맵을 생성합니다.
   8. 유의성 임계값 P ≤ 0.05인 상관 열맵을 생성하고 최대 20개의 대사산물을 표시합니다.
   9. k-평균 집집화 전에 최적의 클러스터 수를 결정하세요. 단위 분산 스케일링 후 k-평균 군집화를 수행한다.
   10. 원본 처리된 특징 강도에서 풍부도 막대 플롯을 생성합니다.
   11. 쌍별 비교 간 겹침을 요약하기 위해 벤 다이어그램을 생성하세요.
   12. 선택된 대사산물에 대해 수신기 작동 특성(ROC) 분석을 수행합니다. 진단 성능을 곡선 아래 면적(AUC)으로 평가합니다.
5. 적절한 생물정보학 패키지 내 경로 농축 함수를 사용하여 차등 대사산물을 KEGG 경로로 매핑합니다(재료표 참조).
   1. P. < 0.05로 경로를 해석합니다. 최종 분석 기록에는 다중 검사 보정이 보고되지 않았습니다.

결과

LC-QTOF-MS/MS 데이터의 품질 관리(QC) 검증

신호 안정성과 재현성을 평가하기 위해 양자 양자 샘플을 두 이온 모드에서 반복 주입하였습니다. 양성 강 주입 간 스피어먼 상관계수는 두 이온 모드 모두에서 0.8을 초과하여 분석 시퀀스 전반에 걸쳐 기기 성능이 안정적임을 나타냈다. 모든 연구 샘플과 QC 주입의 PCA는 QC 주입이 밀접하게 군집화되어 명확한 이상치가 없어 분석 안정성을 허용하였다(그림 2). QC 분산 확대나 주요 공백 이월은 관찰되지 않았으며; 어느 쪽이든 분석 성능이 최적이 아니었음을 나타내며, 재주입이나 배치 제외가 필요했을 것입니다. 이 관찰들은 분석 워크플로우가 두 이온 모드 모두에서 양호하게 작동함을 확인시켜 주었습니다.

시간대에 따른 전...

토론

이 표준화된 워크플로우는 소규모 통제된 집단에서 엘리트 복싱, 스파링, 스파링, 단기 회복과 관련된 대사물 변화를 특징으로 했습니다. 풀드 QC 주입, QC 기반 상관분석, PCA 클러스터링, 다변량 분석을 모두 합쳐 적절한 분석 안정성을 지원하였습니다. 프로토콜의 성공은 주로 네 가지 요인에 달려 있었습니다: 최대 심박수의 80%–85% 내에서 스파링 강도를 유지하고, 채취 후 1시간 이내에 혈액 샘플을 처리하며, 각 샘플을 최대 두 번의 동결-해동 사이클로 제한하고, 반복적인 통합 QC 주입으로 분석 서열을 모니터링하는 것. 본 데이터셋에서는 수용 가능한 QC 상관계수 >0.8, PCA 점수 플롯에서의 엄격한 QC 군집화, 그리고 주요 공백 이월 요소가 없다는 점이 허용 가능한 성능을 지원했습니다. 풀링된 QC 샘플에서 확장된 PCA 분산이 나타나거나, 풀링된 QC 상관관계가 0.8 이하로 감소하거나, 빈 캐리오버가 명확해지면 분석 서열을 검토하고 영향을 받은 샘플...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
시약	아세토니트릴	머크	LC-MS 등급, CAS 75-05-8
시약	메탄올	머크	LC-MS 등급, CAS 67-56-1
시약	개미산	TCI	LC-MS 등급, CAS 64-18-6
소모품	진공관 고양이 혈청 혈전 활성화제	그레이너 바이오-원	8mL 혈전 활성화관
소모품	날겐 극저온 바이알	써모피셔 사이언티브	1.5 mL, 외부 나사산
소모품	단백질 로바인드 튜브	에펜도르프	캣. 번호 0030108442, 1.5 mL
유리 제품	나사식 뚜껑 유리 바이알 삽입물	애질런트	200 & μ 2mL 바이알; L 유리 인서트; 고양이 삽입. 번호 5183-2090
소모품	밀렉스-GP 필터	머크	캣. 아니. SLGP033RS, 0.22 & mu; M 막
악기	맞춤형 복싱 링 6x6 m	무에타이 스포츠	6 & times; 6m 훈련 링
소모품	프로 스타일 2 복싱 글러브	에버라스트	16온스
악기	폴라 H10	폴라	가슴 스트랩 심박수 센서
악기	퀘이사	H/P/코스모스	모터 러닝머신
악기	원심분리기 5425 R	에펜도르프	냉장 마이크로 원심분리기
악기	브랜소닉 CPX2800	에머슨 / 브랜슨	40 kHz 디지털 초음파 배스
악기	사반트 스피드백 SPD1030	써모피셔 사이언티브	통합 진공 집축기
악기	VWR 미니 보텍스 믹서	아반토르 / VWR	캣. 번호 10153-688
악기	TSX ULT 냉동고	써모피셔 사이언티브	모델 TSX50086A
악기	액퀴티 UPLC I-클래스 플러스	수역	UHPLC 시스템
악기	Xevo G2-XS QTof	수역	QTOF 질량분석기
악기	액퀴티 UPLC HSS T3 컬럼	수역	주장/주176001132, 1.8 & μ; m, 2.1 & times; 100mm
소프트웨어	매스링크스	수역	버전 4.2
소프트웨어	생성 QI	수역	버전 2.3
소프트웨어	R	R 통계 컴퓨팅 재단	버전 3.6.1
소프트웨어	PRCOMP	기본 R	기본 R 함수
소프트웨어	롤플스	생체도체	R 패키지
소프트웨어	히트맵	크랜	R 패키지
소프트웨어	코르플롯	크랜	R 패키지
소프트웨어	민스	기본 R	기본 R 함수
소프트웨어	NbClust	크랜	R 패키지
소프트웨어	벤	크랜	R 패키지
소프트웨어	메타보분석가	CRAN / 샤 랩	버전 1.0
소프트웨어	pROC	크랜	버전 1.15.0
소프트웨어	clusterProfiler	생체도체	바이오컨덕터 패키지
데이터베이스	인간 대사체 데이터베이스(HMDB)	HMDB	온라인 데이터베이스
데이터베이스	교토 유전자 및 유전체 백과사전 (KEGG)	케그	온라인 데이터베이스
데이터베이스	지질 지도	지질 지도	온라인 데이터베이스