zebrafish의 시각 기능을 연구하기 위해 optokinetic 응답을 사용하여

안녕하세요. 저는 USTC의 Mean Jing입니다. 잘 알려진 바와 같이, 시각운동 반응(Opto kinetic response), 줄여서 OKR은 동물이 등급화된 패턴을 따라 눈을 움직이는 행동 테스트입니다.

그 주위를 움직이는 것입니다. 이러한 행동은 널리 사용되어 왔습니다. 제브라피시 유어의 시각 기능을 평가하십시오.

하지만 표준 프로디갈(prodigal)을 사용하여 자어의 상태를 고정하는 방법은 성어에게는 쉽게 적용할 수 없습니다. 따라서 이 영상에서는 성어의 OKR을 기록할 수 있게 해주는 새로운 프로디갈을 소개하겠습니다. 또한 비교를 위해 자어의 OKR 테스트와 성어의 OMR 테스트를 시연하겠습니다.

여기서 OMR은 운동 반응(motor response)을 의미합니다. 이제 저희가 맞춤 제작한 OKR 앱의 화면을 보여드리겠습니다. 보기 좋지 않나요?

이 장치에는 모터로 구동되는 회절 격자 베이스가 있습니다. 회절 격자 튜브는 이 회절 격자 베이스 위에 놓여 함께 회전합니다. 챔버 플레이트가 회절 격자 베이스 위에 배치되지만 회전하지는 않으며, 회절 격자를 비추기 위해 원형 램프가 사용됩니다.

이제 다 되었습니다. 어항 챔버를 챔버 플레이트 위에 올리면 준비가 완료됩니다. 안녕하세요, 저는 Sui입니다.

안녕하세요, W입니다. 저희는 USPC의 신경 발달 및 ELL 연구팀에서 근무하고 있습니다. 오늘은 제브라피쉬의 고해상도 테스트 스윕 방법을 보여드리겠습니다. 그럼 시작하겠습니다.

먼저, 성체 제브라피시를 대상으로 OKR 테스트를 수행하는 방법을 보여드리겠습니다. 이제 스펀지를 피쉬 챔버에 넣고 물을 붓습니다. 공기 방울을 제거하기 위해 스펀지를 살짝 짜줍니다.

이제 핀을 사용하여 물고기를 고정하는 방법을 단계별로 보여드리겠습니다. 먼저 물고기를 약간 움직여 등지느러미가 위를 향하게 하고, 꼬리를 펴서 몸통을 직선으로 만듭니다. 동맥 집게(artery clamp)를 사용하여 꼬리지느러미를 고정한 다음, 모델링 클레이를 이용해 집게를 챔버에 부착합니다.

고정이 완료되면, 챔버에 물을 더 붓고 물고기를 향해 물을 불어넣어 깨웁니다. 이제 준비 과정이 모두 끝났으며, 본격적인 실험인 OKR 테스트를 진행할 준비가 되었습니다.

화면 상단에 보이는 두 물체는 단순히 핀헤드에 반사된 회절격자임을 유의하십시오. 이제 유충 OKR 테스트를 어떻게 수행했는지 살펴보겠습니다. 수컷과 암컷 물고기를 교배 탱크에 넣고 알을 낳게 합니다.

그 후 알을 수집하여 유리 접시로 옮깁니다. 치어를 고정하기 위해 meth cellose 용액을 사용합니다. 이 용액은 가열 후 빠르게 냉각시켜야 합니다.

이를 얼음물에 넣고 투명해질 때까지 부드럽게 흔들어 줍니다. 이제 20 milliliter의 methylcellulose를 디시에 넣습니다. 용액에 기포가 없는지 확인하십시오.

용액 속에 유충들을 일렬로 배치합니다. 격자의 반사 모습을 확인할 수 있도록 시야 내에 1 µL의 아주 작은 공기 방울을 추가합니다. 이것으로 야생형 제브라피쉬 유충의 OKR 행동 시연을 마칩니다.

마지막으로 성체 제브라피시의 OMR 테스트 수행 방법을 보여드리겠습니다. 우선, 물고기를 잡아 피쉬 챔버에 넣습니다. 이제 피쉬 챔버를 제자리에 설치하십시오.

그 다음, 테스트 전까지 물고기가 중앙을 통과할 수 없도록 챔버 중앙에 흰색 실린더를 설치합니다. 물고기가 이러한 조명 조건에 1분 동안 적응하도록 하는 것이 좋습니다. 이상으로 성체 제브라피쉬를 이용한 OMR 테스트 시연을 마치겠습니다.

지금까지 성체 제브라피시를 대상으로 OKR 테스트를 수행하는 방법을 살펴보았습니다. 본 테스트에서는 메틸셀룰로오스 대신 핀을 사용하여 제브라피시를 고정하는 방법을 시도하였습니다. 이 방법을 통해 4시간 이상 지속되는 강력한 반응을 기록할 수 있었습니다.

이렇게 하면 실험자들에게 충분한 시간이 주어질 것입니다.