Orthotopic 대동맥 이식 : 만성 Vasculopathy의 개발 연구에 생쥐 모델

이 절차의 전반적인 목표는 이식 혈관병증의 발달을 조사하기 위해 정확한 모델과 쉽게 실행 가능한 방법을 구축하는 것입니다. 이는 PVG와 CI 계통의 조합을 사용하여 달성됩니다. 이 절차의 두 번째 단계는 공여자의 대동맥을 채취하는 것입니다.

절차의 세 번째 단계는 수혜물을 준비하는 것입니다. 절차의 마지막 단계는 공여자의 대동맥과 수혜자의 대동맥을 문합하는 것입니다. 최종적으로, 병리 조직학을 통해 신내막 형성을 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.

안녕하세요, 저는 독일 함부르크 대학교 심장 센터(University Heart Center)의 T S Eye Lab에서 이식 면역학 교수로 재직 중인 Sonya Schwefel입니다. 그리고 저는 같은 T S Eye Lab의 Manish Duboff입니다.

저희 연구실은 이식 면역학에 관심을 두고 있습니다. 이 영상에서는 쥐(Wes)에서 이식 혈관병증의 발달을 연구하기 위한 쉽고 유효한 모델인 정위 대동맥 이식 모델을 소개하겠습니다. 저희 연구실에서는 심혈관 이식의 만성 거부 반응을 조사하기 위해 이 절차를 사용합니다.

동소성 대동맥 이식 모델에서는 대동맥을 조직학적으로 쉽게 평가할 수 있습니다. 또한, CI 모델로의 PVG 이식은 이식 혈관병증 연구에 특히 유용합니다. 급성 혈관 거부 반응이 주요 혼란 변수가 아니며, 혈관병증의 발생 양상이 임상 결과와 유사하기 때문입니다.

그럼 시작하겠습니다. 이번 정위(ORTHOTOPIC) 대동맥 이식에 사용되는 공여체는 무게가 약 250에서 300g인 PVG 랫입니다. 동물을 마취시킨 후 복부와 흉부의 털을 제거하십시오.

쥐를 등 쪽으로 눕히고 코와 입 부분에 페이스 마스크를 씌웁니다. 마취 상태를 유지하면서, Provo 아이오딘을 사용하여 복부와 흉부 영역을 넓게 소독한 후 80% ethanol로 다시 소독합니다. 그다음, 쥐의 뒷발을 꼬집어 동물의 반사 반응을 확인합니다.

충분히 마취되었는지 확인합니다. 복부를 절개하고 복부 대동맥에 구멍을 내어 쥐의 혈액을 제거합니다. 흉강을 조심스럽게 열어 하행 흉부 대동맥을 찾습니다.

지방, 신경 및 식도와 같은 주변 조직으로부터 흉대동맥을 박리합니다. 대동맥 조직에 손상이 없도록 acuta를 사용하여 1.5 centimeter 길이의 대동맥 조각을 채취합니다. 대동맥 이식편을 차가운 식염수로 충분히 세척한 후, 4 °C에서 보관합니다.

본 정위 대동맥 이식의 수혜 동물은 체중 약 250~300g의 A CI 쥐입니다. 이 절차를 시작하려면 마취된 쥐의 복부 부위를 제모하고, 마취 중에 눈이 건조해지는 것을 방지하기 위해 안연고를 도포합니다. 쥐를 등 쪽이 바닥에 닿게 눕히고 코와 입 위에 페이스 마스크를 씌워 마취 상태를 유지합니다.

다음으로, 포비돈 아이오딘을 사용하여 복부 영역을 소독한 후 80% ethanol로 다시 소독합니다. 뒷발을 집어 쥐어 쥐가 충분히 마취되었는지 확인한 다음, 복부 정중선 절개를 수행하고 피부와 근육을 분리하여 복부를 엽니다. 두 단계입니다.

복부를 절개한 후, 장을 식염수가 담긴 장갑 안에 넣습니다. 수분 손실을 방지하기 위해 장갑을 장 주변으로 감쌉니다. 복부 대동맥을 덮고 있는 지방 조직을 제거합니다.

신장 하부 영역부터 분지점까지 대동맥을 박리하되, 혈관 분지들이 손상되지 않도록 주의하십시오. 필요한 경우, 대동맥 박리 후 대동맥 분지들을 결찰하십시오. 먼저, 대동맥의 신장 하부 부위에 미세수술용 클램프를 사용하여 혈류를 차단하십시오.

다음으로 대동맥 분지점 근처에 두 번째 클램프를 설치합니다. 혈류가 차단되면 대동맥의 짧은 분절을 제거합니다. 그런 다음 얼음 위 0.9% saline에 보관해 둔 공여 대동맥 이식편을 준비합니다.

적절한 길이로 자른 후 대동맥의 결손 부위에 위치시킵니다. 두경측 단단 문합부터 시작하여 8-0 prolene 봉합사로 연속 봉합함으로써 공여 대동맥과 수혜 대동맥을 연결합니다. 원위측 단단 문합이 완료되면 원위측 클램프를 조심스럽게 제거합니다.

다음으로, 두개골 클램프를 조심스럽게 엽니다. 대동맥의 원위단에서 맥박이 확인되어야 합니다. 이제 장을 다시 복강 내로 옮기고, 미리 데워둔 멸균 생리식염수로 복강을 세척합니다.

6-0 proline 봉합사로 연속 봉합하여 복벽의 근육층을 닫습니다. 그 후 쥐가 여전히 마취 상태일 때 5-0 proline 봉합사를 사용하여 피부를 연속 봉합합니다. carprofen 4~5 mg/kg을 피하 주사합니다.

동물을 케이지로 돌려보냅니다. 통증 완화를 위해 3일 동안 음용수에 메티마졸(methimazole)을 첨가합니다. 이식 후 단계입니다.

120일 후의 조직병리 결과는 조직 현미경을 통해 보여드릴 것입니다. 사진을 통해 이식 혈관병증의 진행 과정을 명확하게 확인할 수 있습니다. 발생한 내강 협착 부위는 컴퓨터 애니메이션으로 강조하여 표시됩니다.

지금까지 쥐를 이용한 자가 부위 대동맥 이식 수행 방법을 살펴보았습니다. 또한 조직 병리 검사를 통해 120일 후 이식 혈관병증이 성공적으로 유발되었음을 입증하였습니다. 이 방법은 만성 동종이식 혈관병증에 대한 약물의 초기 효과를 연구하는 데 유용합니다.