짝짓기와 난자 발굴: 배아를 생성하고 발달 단계별로 분류하는 방법

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biology

0 조회수 • 2:52 분 • April 30th, 2023

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- 짝짓기 탱크, 알이 떨어질 수 있는 탈착식 인서트가 있는 탱크로 시작하십시오. 배아 채취 전 저녁에 두 마리의 수컷과 세 마리의 암컷 성어를 나누어진 짝짓기 수조에 넣어 하룻밤 동안 서로 적응하도록 합니다.

다음날 아침, 물고기를 시스템 물이 들어있는 새로운 짝짓기 탱크로 옮기고 분배기를 제거하십시오. 물고기가 짝짓기를 하고 산란할 시간을 주기 위해 15-30분 동안 기다립니다.

이제 배아를 모아 행크의 배아 배지가 들어 있는 페트리 접시에 보관합니다. 프로토콜 전체에서 섭씨 28.5도에서 재배합니다. 해부 현미경으로 배아의 형태를 조사합니다.

몇 가지 발달 기능을 관찰하게 됩니다. 배반구의 분열은 여러 세포를 발생시킵니다. 배배엽은 난황 세포 위에 거꾸로 된 컵 모양을 취합니다. 근축 중배엽 분절은 배아의 등쪽 부분 등에서 발달합니다.

수정 후 24시간이 지나면 전체 몸 길이에 따라 배아를 분류하기만 하면 됩니다. 예제 프로토콜에서는 형질전환 mCherry 리포터 물고기의 짝짓기를 설정하고 결과 배아를 분류합니다.

- 먼저, 배아를 생후 3개월까지 배양하는데, 이것이 바로 생식 성숙기입니다. 배아 채취 전날 저녁에 원하는 균주에서 성인 수컷 물고기 2마리와 암컷 물고기 3마리를 담수 수조의 분할된 짝짓기 탱크로 분리합니다. 다음 날 아침 불이 켜진 후 칸막이를 제거하고 수조 바닥에서 배아가 관찰될 때까지 물고기가 자연스럽게 짝짓기를 하도록 합니다.

30분 간격으로 배아를 수집하고 원하는 수가 수집될 때까지 배아 배지의 페트리 접시를 분리합니다. 배아를 단계화하기 위해 10cm 페트리 접시당 50-75마리의 그룹으로 배양하여 모든 배아의 일관된 발달 시기를 촉진합니다. 그런 다음 접시를 섭씨 28.5도로 유지하십시오.

분할 후 수정 후 약 24시간(HPF)까지 솜 수(somite number)를 사용하여 배아 나이를 측정하고 발달 연령에 따라 배아를 분리합니다.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026