박테리아 표면 운동성을 시각화하기 위한 군집 분석

JoVE Encyclopedia of Experiments

Microbiology

0 조회수 • 2:46 분 • September 26th, 2025

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녹색 형광 단백질을 발현하는 운동성 박테리아가 들어 있는 튜브로 시작합니다.

바늘을 사용하여 박테리아를 부드러운 영양 한천 플레이트에 배치하여 박테리아 표면 운동성을 연구합니다.

다음으로 한천 표면에 물이 결로되는 것을 방지하기 위해 플레이트를 뒤집습니다.

박테리아가 자랄 수 있도록 플레이트를 배양합니다.

배양이 진행됨에 따라 박테리아는 편모를 사용하여 접종 지점에서 바깥쪽으로 이동을 시작합니다.

배양이 완료되면 뚜껑을 열고 한천 면이 광학 검출기를 향하도록 거꾸로 된 플레이트를 이미징 시스템에 넣어 정확한 이미징을 보장합니다.

물이 채워진 뚜껑을 접시 위에 놓습니다. 습한 환경을 유지하기 위해 밀봉하십시오.

이미징 시스템을 닫고 타임랩스 이미지 획득을 시작합니다.

시간이 지남에 따라 박테리아 이동은 덩굴손이라고 하는 녹색 손가락 모양의 돌출부를 생성합니다. 이러한 박테리아 구조는 중앙 접종 지점에서 바깥쪽으로 확장되어 박테리아 표면 운동성을 확인합니다.

박테리아 균주에 따라 멸균 이쑤시개 또는 와이어 접종 바늘로 한천 표면을 찔러 건조된 군집 한천 플레이트 위에 1-5마이크로리터의 하룻밤 배양물을 접종하고, 군집 분석 플레이트를 섭씨 30도, 섭씨 37도 또는 섭씨 42도로 설정된 인큐베이터로 옮깁니다. 과도한 수분이 한천이 아닌 플레이트 뚜껑에 응축되도록 플레이트를 뒤집고, 타임랩스 이미징 직전에 균주별 온도에서 2시간 또는 4시간 동안 박테리아를 평형화합니다.

다음으로, 한천 표면의 박테리아가 장치의 거꾸로 된 카메라를 향하도록 플레이트를 생체 내 이미징 장치로 옮깁니다. 모든 페트리 접시 뚜껑에 소량의 물을 채웁니다. 그런 다음 거꾸로 된 한천 플레이트 위에 물가가 위를 향하도록 각 뚜껑을 놓습니다.

이미징 장치 내부에서, 이미징 인클로저를 밀봉하여 일정한 습도 수준을 유지하고, 이미징 장치의 이미징 설정을 조정하고, 스워밍 활동의 타임랩스 이미징을 시작합니다. 실시간 이미징 후 박테리아의 군집 역학은 Image J와 같은 표준 이미지 분석을 사용하여 분석할 수 있습니다.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026