카에노르합디티스 엘레간스 관련 박테리아의 분리 및 배양

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Microbiology

0 조회수 • 2:51 분 • February 2nd, 2026

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

각 웰에 멸균 비즈와 완충제가 포함된 다중 웰 플레이트부터 시작하세요.

각 우물에 C. elegans 선충을 추가하여 박테리아 군집을 분리합니다.

균질기를 사용해 선충을 기계적으로 교란시켜 박테리아를 완충 내로 방출합니다.

원심분리기를 이용해 세포 잔해를 분리하고 박테리아가 포함된 상원액을 수집합니다.

희석된 박테리아 용액을 다양한 조성의 선택적 영양소 한천 플레이트에 플레이트하여 다양한 박테리아 유형의 성장을 지원합니다.

박테리아가 증식하고 눈에 띄는 군집을 형성할 수 있도록 배양하세요.

멸균 루프를 사용해 단일 고립된 군락을 골라 같은 배지의 새 접시에 줄무늬를 찍습니다.

플레이트를 배양하여 순수한 박테리아 군락이 성장할 수 있도록 하세요.

각 순수 군집을 해당 액체 배지에 접종하고 배양합니다.

이 박테리아들은 순수 배양으로 성장하며, 각각은 C. elegans와 자연적으로 관련된 박테리아 종을 대표합니다.

박테리아를 분리하기 위해 약 3개의 멸균 1mm 구슬과 각 웰당 20마이크로리터의 M9 버퍼를 넣은 96웰 플레이트를 준비하고, 가능한 한 적은 액체로 각 웰에 세척된 선충 한 개를 피펫으로 주입합니다. 선충을 시연한 대로 분해한 후 비드 균질기를 사용하고, 이후 플레이트를 짧게 원심분리하여 액체를 바닥으로 끌어내립니다. 완료되면 현탁액을 모아 1에서 10 비율로 연속적으로 희석하세요.

희석된 현탁액을 최대 100마이크로리터까지 9센티미터 한천 플레이트에 배판합니다. 그 후 플레이트를 15도에서 20도에서 24시간에서 48시간 동안 부양합니다. 순수 박테리아 배양을 얻으려면, 멸균 루프나 이쑤시개로 배양판에서 단일 군락을 골라, 정제 시 사용한 것과 동일한 한천 배지를 포함한 새로운 한천 배지에 스트릭을 붙입니다. 접시의 3분의 1만 사용하세요.

그 다음, 재사용 가능한 루프를 소독하거나 새로 만든 멸균 루프를 사용해 첫 번째 줄무늬를 통과시켜 샘플 플레이트의 또 다른 3분의 1 부분에 두 번째 줄무늬를 만듭니다. 두 번째 스트릭에 루프를 드래그하고 세 번째 스트릭을 만들어 단일 군체 성장을 이루는 방식으로 반복하세요.

분리에 사용되는 동일한 성장 조건에서 배양하고, 필요하다면 정제 단계를 반복합니다. 순수 군집을 액체 배지에서 동일한 온도와 성장 조건으로 키우세요.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026