소뇌 절제 및 절편 준비: 마우스 소뇌에서 조직 절편을 생성하는 방법

생쥐에서 소뇌는 전뇌의 기저부에 위치하며 정중선인 지충으로 연결된 두 개의 측면 반구로 구성됩니다. 뇌 뉴런의 대부분을 포함하는 소뇌는 신경학적 연구에 필수적입니다.

뇌 조각을 생성하려면 목이 잘린 쥐 머리부터 시작하십시오. 두개골 기저부의 개구부 인 매그넘 구멍에 가위를 삽입합니다. 두개골을 부드럽게 절개하고 제거합니다. 다음으로 뇌를 빼내고 시신경과 삼차신경을 절단합니다. 뇌를 등쪽이 위로 향하게 하여 차갑게 식힌 해부 배지에 풀어줍니다. 후뇌를 다른 뇌 부분과 분리합니다.

그런 다음 소뇌와 뇌간 사이의 연결인 밑에 있는 소뇌 꽃자루를 잘라 소뇌를 분리합니다. 소뇌에서 수막을 제거합니다. 소뇌를 다지기 날에 수직인 조직 다지기 플랫폼에 조심스럽게 놓습니다. 이제 적절한 두께의 조직 조각을 해부합니다. 즉시 슬라이스를 적시고 해부 배지가 들어 있는 페트리 접시에 다시 옮깁니다.

지렁이에서 조각을 분리하고 식별하십시오. 선택한 슬라이스를 적절한 성장 배지가 들어 있는 배양 플레이트의 웰 삽입물로 옮깁니다. 추가 실험을 위해 해부된 소뇌 절편의 구조적 및 기능적 무결성을 유지하기 위해 배양물을 배양합니다.

시작하려면 작은 가위를 대구멍에 부드럽게 삽입하고 측면으로 측면 절개를 한 다음 두개골 주위를 모두 자릅니다. 두개골의 등쪽 부분을 회수하려면 가늘고 곧은 집게를 사용하여 두개골의 등쪽 부분을 조심스럽게 들어 올립니다.

그런 다음 복부 두개골과 뇌 사이에 집게를 조심스럽게 삽입합니다. 뇌를 부드럽게 빼내고 작은 가위로 시신경과 삼차신경을 자릅니다. 다음으로, 뇌가 중력에 의해 떨어지는 것을 돕기 위해 얼음처럼 차가운 해부 배지가 들어 있는 60mm 세포 배양 접시 바로 위에 두개골의 머리나 등쪽 부분을 거꾸로 뒤집습니다.

미세한 집게를 사용하여 등쪽이 위를 향하고 복쪽이 누워 뇌의 방향을 잡습니다. 양안 현미경 아래에서 미세한 직선 겸자를 사용하여 전뇌 쪽의 뇌를 고정합니다. 그런 다음 후뇌를 뇌의 나머지 부분과 분리합니다. 소뇌 아래의 소뇌 꽃자루를 잘라 소뇌를 나머지 후뇌와 분리합니다.

뇌가 분리되면 가는 직선 겸자를 사용하여 수막을 조심스럽게 떼어냅니다. 미세하게 구부러진 겸자로 소뇌를 부드럽게 잡고 등쪽이 위로 향하도록 다지기 면도날에 수직인 플라스틱 플랫폼에 놓습니다. 다음으로, 멸균된 얇은 끝 피펫 팁을 1밀리리터 피펫에 부착하여 소뇌 주변의 과도한 해부 배지를 흡인합니다. 그런 다음 조직 다지기로 소뇌의 300마이크로미터 두께의 시상 부분을 슬라이

다음으로, 얇게 썬 소뇌에 해부 배지 한 방울을 부드럽게 추가합니다. 그런 다음 1밀리리터 피펫에 부착된 와이드 보어 피펫 팁을 사용하여 얇게 썬 소뇌를 천천히 흡인하고 얼음처럼 차가운 해부 배지가 들어 있는 60mm 세포 배양 접시로 다시 옮깁니다.

다음으로, 두 개의 미세한 직선 집게를 사용하여 개별 조각을 분리합니다. 그런 다음 1밀리리터 피펫에 부착된 와이드 보어 피펫 팁을 사용하여 일부 해부 배지와 함께 지충에서 최대 4개의 선택된 슬라이스를 6웰 플레이트의 배양 인서트 1개로 옮깁니다. 얇은 끝의 피펫 팁을 사용하여 슬라이스 주변의 과도한 해부 배지를 제거합니다.