조직 절편의 크레실 바이올렛 염색: 냉동 마우스 배아 절편에서 연골과 뼈를 시각화하기 위한 염색 절차

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Biological Techniques

0 조회수 • 3:32 분 • July 8th, 2025

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조직 절편에서 연골과 뼈 영역을 시각화하려면 관심 있는 얇은 냉동 마우스 배아 조직 절편을 운반하는 유리 슬라이드로 시작합니다.

냉동절개를 잠시 해동하고 적절한 에탄올 농도에 담가 극저온 포매 배지를 제거합니다. 제거 단계는 염색 중 조직 시각화에 영향을 미칠 수 있는 배지의 느슨함을 방지하는 데 도움이 됩니다. 또한 에탄올은 조직을 고정하여 조직 형태와 무결성을 유지합니다.

다음으로, 크레실 바이올렛 용액을 조직에 피펫팅합니다. 양전하를 띤 염기성 염료인 크레실 바이올렛은 연골 조직 기질의 프로테오글리칸과 같은 폴리음이온 부분에 결합합니다. 반면, 뼈와 같은 광물화된 조직에서는 뼈 기질의 인산염 그룹과 같은 음전하를 띤 그룹과 반응합니다.

이색성 염료인 크레실 바이올렛은 해당 영역 내의 다양한 화학 성분과의 상호 작용을 기반으로 천연 염료와 다른 색상으로 조직의 다른 영역을 염색합니다.

이제 과도한 얼룩을 제거하기 위해 적절한 에탄올 농도로 조직을 세척하십시오. 조직에서 물을 대체하기 위해 증가하는 에탄올 농도에 조직을 담그고 조직을 탈수시킵니다. 조직을 자일렌으로 세척하여 에탄올을 대체하여 현미경 검사를 위해 조직을 투명하게 만듭니다.

광학 현미경으로 보면 연골 조직은 자홍색으로 보이고 뼈 조직은 갈색으로 나타나 주변 조직뿐만 아니라 서로 쉽게 구별

할 수 있습니다.

라벨이 붙은 50밀리리터 원심분리기 튜브 3개를 준비합니다. 각 튜브에 45 밀리리터의 80 % 에탄올을 첨가하십시오. 얼음 위에 세 개의 튜브를 놓습니다. 45 밀리리터의 95 % 에탄올이 들어 있는 튜브와 100 % 에탄올이 들어 있는 튜브를 얼음 위에 놓습니다. 다음으로, 실온에서 45밀리리터 원심분리기 튜브에 50밀리리터의 자일렌을 첨가합니다.

PEN 멤브레인 슬라이드를 장갑을 낀 손에 대고 잠시 해동하고 80% 에탄올이 들어 있는 각 튜브에서 교반하면서 30초 동안 두 번 세척하여 최적의 절단 온도 화합물을 제거합니다. 그런 다음 알루미늄 호일 시트 위에 슬라이드를 놓습니다. 50% 에탄올에 0.1% 크레실바이올렛 0.8밀리리터를 슬라이드에 피펫팅하고 30초 동안 염색합니다.

80% 에탄올이 들어 있는 세 번째 튜브에서 슬라이드를 30초 동안 세척합니다. 슬라이드를 95% 에탄올이 들어 있는 튜브에 30초 동안 통과시키고, 100% 에탄올이 들어 있는 튜브를 30초 동안 통과시키고, 마지막으로 자일렌이 들어 있는 튜브를 30초 동안 통과시켜 슬라이드를 탈수합니다. 그런 다음 슬라이드를 섬세한 작업 와이퍼 위에 5분 동안 놓아 자일렌이 배출되고 섹션이 건조되도록 합니다.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026