종양세포 침입의 3차원 스페로이드 모델 생성

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 조회수 • 3:18 분 • April 28th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

인간 뇌종양 세포의 배양을 취하십시오.

해리 효소로 처리하여 세포 접합부를 방해하고 응집된 세포를 분리합니다.

효소 활성을 멈추기 위해 완충액으로 세척한 다음 세포 생존력을 유지하기 위해 배양 배지를 추가합니다.

현탁제인 메틸셀룰로오스를 소개합니다.

현탁액을 둥근 바닥 마이크로플레이트로 옮기고 배양합니다.

점성 메틸셀룰로오스는 세포를 부유 상태로 유지하여 스페로이드로 응집하기 위한 세포-세포 상호 작용을 촉진합니다.

생리적 세포외 환경을 모방하는 콜라겐 매트릭스와 스페로이드를 혼합합니다.

현탁액을 마이크로플레이트에 옮기고 배양하여 매트릭스가 스페로이드를 포획하는 젤을 형성하도록 합니다.

젤 위에 성장 배지를 추가합니다.

스페로이드 주변에서 종양 세포는 세포-세포 접착을 잃고 침습성 표현형을 채택합니다.

이 세포는 프로테아제를 분비하여 매트릭스를 분해하고, 돌출부를 확장하여 스스로를 고정하고, 앞으로 이동하여 매트릭스를 침범합니다.

종양 침범을 나타내는 스페로이드 모델을 분석할 준비가 되었습니다.

균일한 크기의 종양 스페로이드를 생성하기 위해서는, 먼저 관심 있는 종양 세포 배양물을 5 밀리리터의 PBS로 세척하고, 0.5 내지 1 밀리리터의 해리 효소로 세포를 처리한다. 섭씨 37도에서 5분 후, 4 내지 4.5밀리리터의 PBS로 반응을 멈추고, 분리된 세포를 10밀리리터의 완전 성장 배지가 들어 있는 15밀리리터의 원뿔형 튜브로 옮긴다.

계수한 후, 2% 메틸셀룰로오스 농도의 2밀리리터를 보충한 완전 성장 배지 8밀리리터당 10 내지 6세포로 세포를 재현탁하고, 현탁액을 멸균 시스템 용기로 옮긴다. 그런 다음 96웰 둥근 바닥 플레이트의 각 웰에 100마이크로리터의 세포를 추가하고 플레이트를 섭씨 37도, 5% 이산화탄소 인큐베이터에 3-4일 동안 넣습니다.

침윤 분석을 수행하기 위해 종양 세포가 균일한 크기의 스페로이드를 형성하면 각 세포 구조를 500마이크로리터 튜브로 옮기고 스페로이드를 200마이크로리터의 PBS로 한 번 세척합니다. 두 번째 세척 후, 스페로이드를 새로 준비된 콜라겐 매트릭스 100마이크로리터에 조심스럽게 옮기고 각 스페로이드 현탁액을 바닥이 평평한 96웰 플레이트의 각 웰 중앙에 추가합니다.

섭씨 37도에서 30분 동안 배양한 후, 각 웰의 겔 위에 100마이크로리터의 완전 성장 배지를 첨가합니다.

종양 세포 침범의 최상의 이미징을 위해 모든 스페로이드를 각 웰의 중앙에 배치해야 합니다.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026