마우스 피질 뉴런에서 축삭 분지의 실시간 체외 이미징

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Neuroscience

0 조회수 • 3:21 분 • June 17th, 2025

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마우스 배아 피질 뉴런이 들어 있는 유리 바닥 이미징 접시를 가져 가십시오.

이미징

중 세포 생존력을 유지하기 위해 미분 간섭 대비(DIC) 현미경의 환경 챔버 내부에 접시를 놓습니다.

DIC 현미경은 편광을 표본을 가로지르는 두 개의 빔으로 분할합니다.

시편 전체의 굴절률 변화는 이러한 빔 사이에 위상 변이를 도입합니다.

빔이 재결합하면 간섭으로 인해 고대비 이미지가 생성되어 더 미세한 세포 구조가 보입니다.

분지되지 않은 축삭이 있는 뉴런을 식별하고 타임랩스 이미징을 사용하여 축삭 분지를 시각화합니다.

축삭 수용체에 결합하고 국소 엑소 세포 증가증을 유발하는 세포외 유도 신호인 netrin-1로 치료합니다.

엑소사이틱 소포는 막 성분을 부위에 전달하는 반면 세포골격은 막 확장을 지원하기 위해 재구성됩니다.

현미경으로 보면 이러한 변화는 축삭 분지의 시작을 나타내는 작은 돌출부로 나타납니다.

시간이 지남에 따라 이러한 돌출부는 성숙한 축삭 가지로 발달하여 신경 발달의 역동적인 과정을 보여줍니다.

시험관 내에서 2일 후, 형질감염되지 않은 뉴런이 들어 있는 유리 바닥 이미징 접시를 미리 예열된 습한 환경 챔버에 넣습니다. 최고의 화질과 해상도를 위해 60x 계획 아포크로마트, 1.4 NA, DIC 오브젝티브 렌즈 및 높은 수치 조리개 콘덴서가 장착 된 현미경을 활용하십시오. 다음으로, 투과광 조명으로 초점면을 조정하여 안경을 통해 뉴런을 찾습니다.

축삭 분기의 DIC 이미징의 경우 더 차가운 조명의 적절한 설정은 이미지 최적화에 필수적이며 분석 가능한 결과를 생성하는 데 중요합니다. 그런 다음 시야 내에 관심 있는 뉴런을 사용하여 이미징 소프트웨어의 다중 영역 획득 기능을 사용하여 최소 6개 세포의 XYZ 위치를 찾아 저장합니다. 이제 세포를 자극하기 위해 netrin-1 또는 기타 관심 인자의 밀리리터당 250나노그램의 최종 농도에 추가하고 Start Multi-Area Acquisition을 누릅니다.

순

차적으로 24시간 동안 20초마다 각 위치에서 이미지를 획득하고 필요에 따라 획득을 일시 중지하고 다시 초점을 맞춥니다. 이미징 소프트웨어 내에서 App(앱), Review Multi-Dimensional Data(다차원 데이터 검토)를 선택하여 이미지를 검토하고 원하는 파일을 엽니다. 이미징 세션 중에 형성되는 안정적인 축삭 가지를 식별합니다. 추적 영역 도구를 사용하여 축삭 기저부에서 팁까지 안정적인 축삭 분기를 측정합니다.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026