2015년 7월 21일
미세 투석은 신경 과학 연구에 일반적으로 사용되는 기술이다. 따라서 상업 프로브는 큰 demand.In에 프로브 어셈블리가 $ 10 미만의 신뢰성, 동심, 맞춤형 미세 투석 프로브를 구축 상세하게 설명이 작품이다.
이 절차의 전반적인 목표는 맞춤형 미세투석 프로브의 제조업체를 설명하는 것입니다. 이는 먼저 폴리테트라플루오로에틸렌 튜브와 용융 실리카를 올바른 치수로 절단하여 수행됩니다. 두 번째 단계는 캐뉼라를 지침으로 사용하여 용융 실리카를 튜브에 삽입하는 것입니다.
다음으로, 투석막을 융합된 실리카 위에 놓습니다. 마지막 단계는 금속 슬리브를 용융 실리카의 나머지 부분으로 당기고 에폭시를 사용하여 조인트를 닫고 2mm의 교환 길이를 보장하는 것입니다. 궁극적으로 이 비디오의 지침은 뉴로펩티드 및 소분자의 체외 회수율을 정확하게 측정할 수 있는 상용 프로브의 대안으로 견고하고 신뢰할 수 있는 맞춤형 미세투석 프로브를 구축하는 방법을 보여줍니다.
이 기술의 주요 장점은 자세히 제시된 이 미세 투석 프로브 어셈블리를 모든 응용 분야에 적용할 수 있으며 10개 미만으로 제조할 수 있다는 것입니다. 먼저 내경이 350미크론인 1.6mm 두께의 폴리테트라플루오로에틸렌 튜브 조각을 2.5cm 길이의 섹션으로 자릅니다. 출구 튜브를 쉽게 연결할 수 있도록 섹션의 한쪽 끝을 45도 각도로 자릅니다.
다음으로, 사포를 사용하여 PTFE 튜브의 외부 표면을 거칠게 하여 에폭시 접착제의 접착력을 높입니다. 용융 실리카 부분을 2.25cm 길이의 조각으로 자릅니다. 평평한 끝에서 1cm 떨어진 속이 빈 PTFE 섬유에 30게이지 바늘을 삽입합니다.
PTFE를 구부리고 구부러진 곳에서 덮개를 뚫습니다. 바늘 캐뉼러를 지침으로 사용하여 용융 실리카를 PTFE 튜브에 삽입합니다. 그런 다음 바늘 캐뉼러를 부드럽게 제거하고 용융 실리카를 배치하여 PTFE 튜브의 평평한 끝이 5mm 돌출되도록 합니다.
시아노아크릴레이트 접착제 한 방울을 사용하여 용융 실리카를 천공 부위에 고정하고 밤새 굳히도록 합니다. 검은색 에폭시 접착제 30부에 노란색 경화제 70부를 넣고 부드럽게 혼합하여 에폭시 접착제를 준비합니다. 그런 다음 내경이 210미크론이고 외경이 245미크론인 30킬로달톤 컷오프 폴리설폰 투석막을 당깁니다.
융합된 실리카 위에 조심스럽게 올려줍니다. 멤브레인을 PTFE 튜브로 당기고 날카로운 메스를 사용하여 멤브레인을 5.5mm로 조정합니다. 가는 펜으로 멤브레인의 한 점을 표시하여 멤브레인 끝에서 2mm의 교환 길이를 정의합니다.
그런 다음 가는 바늘을 사용하여 소량의 에폭시 접착제를 바르고 멤브레인 끝을 덮습니다. 다음으로, 에폭시 접착제를 사용하여 투석막과 PTFE 섬유 사이의 접합부를 닫습니다. 이제 돌아가서 마킹 지점까지 멤브레인에 충분한 에폭시 접착제를 추가합니다.
확산 교환 길이가 2mm에 불과하도록 하려면 에폭시 접착제가 밤새 굳어지도록 하십시오. 금속 슬리브를 만들기 위해 펜치를 사용하여 25게이지 바늘의 1cm 조각을 조심스럽게 끊습니다. 그런 다음 금속 슬리브를 용융 실리카의 나머지 부분으로 당기고 나머지 에폭시 접착제를 사용하여 금속 슬리브와 PTFE 튜브 사이의 조인트를 밀봉합니다.
나중에 금속 슬리브를 통해 주입 튜브를 미세 투석 프로브와 연결할 수 있습니다. 마지막으로, 장치의 추가 고정 및 안정화를 위해 프로브의 분기점 주위에 뜨거운 접착제를 바르십시오. 이 회로도는 미세 투석 프로브의 내부 작동을 클로즈업한 것입니다.
2mm의 폴리설폰 투석막이 프로브 끝에 노출되어 포도당 A, TP 및 아세틸콜린과 같은 저분자량 대사 산물을 회수할 수 있습니다. 포도당, 젖산염, 아세틸콜린 및 시험관 내 TP와 같은 작고 저분자량 분자를 회수하는 프로브의 능력이 여기에 나와 있습니다. 회수율은 약 500 Dalton인 이 분자가 1000 Dalton 이상인 안지오텐신 2, 물질 p 및 소마토스타틴과 같은 더 큰 분자보다 훨씬 높습니다.
이 비디오를 시청한 후에는 상용 프로브의 대안으로 견고하고 신뢰할 수 있는 미세 투석 프로브를 구축하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.
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본 논문은 상용 프로브의 비용 효율적인 대안인 맞춤형 마이크로투석 프로브의 제작 과정을 설명합니다. 이 절차는 in vitro에서 뉴로펩타이드와 소분자를 측정할 수 있는 신뢰성 있는 프로브를 제작하는 데 필요한 단계들을 상세히 기술합니다.
맞춤형 미세투석 프로브 제작은 뇌척수액 내 신경화학적 역동성의 정밀한 모니터링을 가능하게 하여 신경과학 연구를 위한 비용 효율적인 솔루션을 제공합니다. 프로브 비용을 $10 미만으로 낮춤으로써, 이 방법은 공공 기관의 접근성을 높이고 전임상 연구 전반에 걸쳐 확장 가능한 배치를 지원합니다. 또한, 이 접근 방식은 소분자와 신경펩타이드에 대한 신뢰할 수 있는 회수 데이터를 제공하여 표적 검증 및 메커니즘적 리스크 감소를 용이하게 하며, 초기 발견 파이프라인에서 진행 여부(go/no-go)를 결정하는 근거를 제시합니다.
이 방법은 가설 검증부터 리드 화합물 발굴까지의 발견 연속체에 통합되어, 기전적 이해와 화합물 우선순위 설정을 지원하는 정량적 신경화학적 판독값을 제공합니다.