스테인레스 스틸 표면의 Uncleanliness 제약 업계에 확인 청소의 실패

본 연구의 전반적인 목표는 저분자 화합물, 치료용 단백질 및 항체에 대한 분석 세척법 개발의 최적 실무 지침을 적용하여, 스테인리스강 쿠폰 표면으로부터 의약품 잔류물을 높고 재현성 있게 회수하는 것입니다. 이 방법은 제약 산업의 세척 밸리데이션 분야에서 제조 장비의 세척 밸리데이션이 실패하는 이유와 같은 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 본 연구의 주요 장점은 분석법 밸리데이션에 사용되는 스테인리스강 쿠폰의 표면을 적절하게 세척하는 절차를 제시한다는 점입니다.

본 실험을 시작하려면, 약물의 세척 한계값을 계산한 후 선택한 희석액에 약물을 녹여 시료 용액을 준비하십시오. 스테인리스 스틸 쿠폰을 물로 헹구고 표면을 10~15초 동안 두 번 닦아 세척합니다. 그다음, 메탄올을 사용하여 이 헹굼 및 닦기 단계를 반복하여 잔류 침전물을 제거하십시오.

제자리 세정(clean in place) 솔루션을 이용한 고급 세척 방법을 수행하려면, 쿠폰을 고성능 액체 크로마토그래피 또는 HPLC 등급의 물에 담그고 2분 동안 초음파 세척하십시오. 쿠폰을 HPLC 등급의 물에 희석한 0.1% 알칼리 세제 용액에 담그고 2분 동안 초음파 세척하십시오. 쿠폰을 다시 HPLC 등급의 물에 담그고 2분 동안 초음파 세척을 반복하십시오.

그 다음, HPLC water에 0.1% 산성 세제 용액을 희석하여 시편을 담그고 2분 동안 초음파 세척합니다. HPLC water에서 2분간 초음파 세척하여 마무리합니다. 이어서, 양면테이프를 사용하여 스테인리스강 쿠폰을 250 milliliter 플라스틱 비커 바닥에 부착합니다.

스파이킹과 스와빙을 용이하게 하고 사고를 방지하기 위해 실험 과정 동안 비커를 잡고 계십시오. 양변위 피펫을 사용하여 원하는 농도와 제형의 정해진 약물 부피를 쿠폰 표면에 회오리 패턴으로 주입하십시오. 쿠폰 표면이 마르면, 2 mL의 희석액이 담긴 바이알에 건조한 면봉을 담그십시오.

바이알 내벽에 스왑을 눌러 과잉 용매를 제거합니다. 젖은 스왑의 한쪽 면을 사용하여 50 cm²의 전체 테스트 영역이 닦일 때까지 쿠폰 표면을 일정하게 겹치며 좌우로 강하게 닦아냅니다. 스왑의 동일한 면을 사용하여 닦기 과정을 반복합니다.

쿠폰의 네 모서리를 각각 두 번씩 스왑합니다. 쿠폰을 90도 회전시킨 후 스왑의 반대쪽 면을 사용하여, 닦아내는 방향을 90도 회전시켜 닦습니다. 스왑의 이 면을 사용하여 동일한 방식으로 세척을 반복하며, 쿠폰의 네 모서리를 모두 두 번씩 닦았는지 확인합니다.

표면 닦아내기가 끝나면 가위를 사용하여 스왑 헤드를 용매 바이알 안으로 잘라 넣습니다. 그 다음, 쿠폰을 이전에 선택한 방향과 동일하게 90도 회전시킨 후 두 번째 스왑을 사용하여 전체 스와빙 절차를 반복합니다. 이어서 두 개의 스왑 헤드가 들어있는 바이알을 5분 동안 초음파 처리합니다.

그런 다음, 바이알을 10초 동안 볼텍싱합니다. 마지막으로, 용액을 HPLC 바이알로 옮기고 작업 용액으로 라벨을 붙입니다. 샘플을 회수하려면, 각 쿠폰 스파이킹 용액 또는 샘플 용액 200 microliters를 희석액 1,800 microliters와 혼합하여 대조군 용액을 준비합니다.

텍스트 프로토콜에 따라 이 용액들을 사용하여 크로마토그래피를 수행하십시오. 작업 용액과 대조 용액의 피크 아래 상대 면적을 기반으로 스왑 작업 용액의 회수율을 계산하십시오. 이 과정을 세 개의 쿠폰에 대해 반복하여 평균 회수율과 상대 표준 편차를 계산하십시오.

쿠폰을 세척하기 전에는 활성 의약품 성분(API)이나 API 부형제 비율, 분석자 간의 차이, 또는 동일한 분석자의 측정 날짜와 관계없이 서로 다른 스파이크 수준에 대한 회수 결과가 일관되지 않았습니다. 회수 결과의 대부분은 상대 표준 편차가 높았습니다. 스와빙 기술, 희석액, 스파이킹 용매, 스파이크 및 희석액의 pH, 스파이킹 기술 및 추출 기술을 포함하여 여러 가지 서로 다른 파라미터를 조정했음에도 불구하고, 관찰된 회수율의 가변성은 제거되지 않았습니다.

각 쿠폰 표면의 개별 회수율과 평균 회수율 간의 차이는 평균 회수율이 쿠폰 표면마다 다르다는 것을 보여주며, 따라서 관찰된 변동성은 쿠폰 표면 간의 차이에서 기인했을 가능성이 매우 높습니다. 본 프로토콜에 기술된 쿠폰 세척 과정을 거친 후, 회수 결과는 실험 간에 재현 가능했으며 쿠폰 간 회수율 차이도 최소화되었습니다. 여기서 수행한 쿠폰 세척 결과, 회수율이 90%보다 높게 나타났습니다. 또한, 각 스파이킹 수준에 대한 상대 표준 편차 값은 허용 가능한 수준이었으며 세척 전의 결과보다 작았습니다.

숙련된 후에는 적절히 수행할 경우 쿠폰 세척을 30분 이내에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도할 때는 분석 대상 물질을 손실하지 않고 적절하게 스파이킹(spike)하고 회수하는 방법을 기억하는 것이 중요합니다. 이 영상을 시청하고 나면, 잔류물의 높고 재현성 있는 회수율을 얻기 위해 스테인리스강 표면을 적절하게 세척하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

이 기술이 개발된 이후, 제약 업계의 연구자들은 제조 공정에 대한 신뢰할 수 있는 세척 데이터를 제공할 수 있는 길을 열게 되었습니다.