2023년 4월 21일
이 프로토콜은 야생형 마우스에서 피질을 그대로 유지하면서 이광자 현미경으로 단일 뉴런 활동을 이미징하고 부분 피질 돌연변이 마우스에서 광시야 현미경으로 전체 SC를 이미징하는 것을 포함하여 깨어 있는 마우스의 상구(SC)에서 칼슘 반응을 이미징하는 절차를 자세히 설명합니다.
제 연구는 신경 코딩과 시각 처리 메커니즘에 중점을 두고 있습니다. 우리는 다양한 정보가 뇌, 특히 근본적인 신경 메커니즘 아래의 상구에서 어떻게 암호화되는지에 대한 답을 찾으려고 노력하고 있습니다. 시각 처리를 이해하기 위해 과학자들은 신경 형태학, 전행 및 역행 추적, IL 시퀀싱, 신경 모델링, 기계 학습을 포함한 다양한 접근 방식을 결합합니다.
문제는 SSA 위의 두개골을 제거하고 뼈를 잘라 하나의 큰 조각으로 남겨두는 것인데, 뼈가 경막에 부착되어 있기 때문에 실패할 가능성이 높습니다. 광시야 칼슘 이미지에 두 장의 사진을 결합함으로써 우리의 최근 연구는 단일 세포 분해능과 글로벌 규모 모두에서 마우스 SC의 운동 방향의 기능 구조를 밝혔습니다. 우리는 비슷한 선호도를 가진 뉴런이 코운동에서 위쪽으로 500마이크로미터 아래까지 패치를 형성한다는 것을 발견했습니다.
우리의 프로토콜을 통해 우리는 두 가지 연구 격차를 해결하고 있습니다. 첫째, 연구원들은 피질을 손상시키지 않고 단일 세포 해상도에서 마우스 SC에서 장기 캐스트 이미징을 수행할 수 있습니다. 둘째, 연구자들은 광시야 현미경 검사를 사용하여 전체 SC의 신경 활성을 기록할 수 있습니다.
당사의 프로토콜은 마우스의 온전한 피질을 사용하여 단일 세포 해상도에서 후방 내측 SC를 이미지화하는 측정값을 제공합니다. 또한 생체 적합성 플러그를 사용하여 SC를 노출시켜 만성 영상의 감염을 줄입니다. 우리의 결과는 넓은 시각 분야에서 시각 정보의 신경 코딩을 연구하는 방법을 제공합니다.
광유전학과 결합하면 SC의 신경 활성을 조절하는 다른 뇌 영역의 절반 입력을 연구할 수 있습니다.
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본 연구는 깨어 있는 생쥐의 상구(superior colliculus, SC)에서 칼슘 반응을 이미징하는 프로토콜을 제공하며, 야생형 생쥐에서는 피질을 보존한 상태에서 이광자 현미경을 이용해 단일 뉴런 활동을 포착하고, 부분 피질 돌연변이 생쥐에서는 광시야 현미경을 이용하여 SC 전체를 관찰하는 방법을 설명합니다.
마우스 상구(superior colliculus, SC)의 고해상도 칼슘 이미징은 시각 처리를 뒷받침하는 신경 코딩의 직접적인 조사를 가능하게 하여, 타겟 검증 단계에서 기전적 리스크 감소(de-risking)를 지원합니다. 각성 상태의 동물에서 단일 세포와 구조 전체의 활성을 모두 포착할 수 있는 능력은 중개 신경과학 및 신경 제약 포트폴리오에 예측 신뢰도를 제공합니다. 이러한 이중 규모 접근 방식은 초기 발견 단계의 의사결정을 강화하고, 시각 시스템 타겟을 위한 후속 분석법 개발의 근거가 됩니다.
이 이미징 프로토콜은 SC에서의 가설 검증, 경로 규명 및 정량적 분석을 가능하게 함으로써 초기 발견과 전임상 연구를 연결합니다. 이는 타겟 검증부터 리드 물질 발굴 및 중개 연구까지의 단계에 통합될 수 있도록 설계되었습니다.