2023년 12월 1일
초저온 전자 현미경(CryoEM) 다중 그리드 스크리닝은 종종 몇 시간의 주의가 필요한 지루한 프로세스입니다. 이 프로토콜은 이 프로세스를 자동화하기 위해 표준 Leginon 컬렉션 및 Smart Leginon Autoscreen을 설정하는 방법을 보여줍니다. 이 프로토콜은 대부분의 CryoEM 홀리 포일 그리드에 적용할 수 있습니다.
Simons Electron Microscopy Center는 지역 및 국가 연구자들에게 우수한 전자 현미경 서비스, 전문 지식 및 교육을 제공하고 워크플로우를 최적화하기 위한 혁신적인 방법을 개발하는 것을 목표로 합니다. 당사의 범위는 서비스, 개발, 기계 학습 및 생물 의학 연구를 포함합니다. 우리는 어떻게 하면 서비스를 더 잘 최적화할 수 있는지에 대한 답을 찾으려고 노력하고 있습니다.
기계 학습은 전자 현미경 분야를 변화시키고 있습니다. 데이터 수집이 자동화되고 있습니다. 데이터 분석 도구는 빠르게 효율성이 높아지고 있습니다.
여기에는 이미지 노이즈 제거, 입자 피킹, 3G 유연성 분석 및 모델 구축이 포함됩니다. 우리는 프로덕션 환경에서 다양한 그리드 구멍, 기울어진 컬렉션 또는 베타 테스트 소프트웨어를 통해 식별된 버그와 같은 다양한 상황을 설명하기 위해 정기적으로 소프트웨어를 업데이트합니다. 또한 사용자의 피드백을 통합하여 사용자에게 유용한 기능을 지속적으로 제공하고 있습니다.
Smart Leginon은 cryoTEM에서 하나 이상의 그리드를 스크리닝하는 노동 집약적이고 시간 소모적인 작업을 해결합니다. 이를 통해 작업자와 연구원은 그리드를 보다 신속하게 스크리닝하고 분석할 수 있으며, 그리드와 시료 조건을 동시에 최적화할 수 있는 시간을 확보할 수 있습니다. 또한 현미경 시간과 비용도 절감됩니다.
Smart Leginon 자동 스크린은 12개의 그리드에 대한 스크리닝을 설정하는 데 약 10분이 소요되는 완전 무인 멀티그리드 스크리닝을 제공합니다. 수동 스크리닝과 비교했을 때, 당사의 프로토콜은 하루에 몇 시간을 절약합니다. Smart Leginon이 도입된 이후 유사한 자동화를 위해 다른 무료 및 상용 소프트웨어가 개발되었습니다.
본 프로토콜은 Smart Leginon Autoscreen을 이용한 초저온 전자 현미경(cryoEM) 멀티 그리드 스크리닝의 자동화 방법을 설명합니다. 설정 과정을 간소화함으로써 연구자는 그리드 스크리닝에 소요되는 시간을 크게 단축할 수 있으며, 이를 통해 시료 조건의 분석 및 최적화를 더욱 효율적으로 수행할 수 있습니다.
Smart Leginon을 이용한 자동화된 저온 전자 현미경(cryoEM) 그리드 스크리닝은 구조 생물학 및 바이오 제약 발견 워크플로우의 결정적인 병목 현상을 해결합니다. 작업자 시간을 단축하고 처리량을 높임으로써, 이러한 자동화는 초기 단계의 구조 기반 약물 발견 및 표적 검증의 효율성을 향상시킵니다. 이 접근 방식은 여러 그리드에 걸쳐 확장 가능하고 재현 가능한 스크리닝을 가능하게 하여, 발견 파이프라인의 주요 변곡점에서 강력한 의사 결정을 지원합니다.
Smart Leginon Autoscreen은 초기 시료 최적화부터 리드 화합물 확인 및 전임상 구조 검증에 이르는 발견 연속체에 통합됩니다.