Waarom is het toetsen van de nulhypothese belangrijk voor metabolietextractie op basis van SPME?

Toetsing van de nulhypothese waarborgt dat waargenomen metabole verschillen in transplantaatweefsels statistisch significant zijn, wat bijdraagt aan een robuuste validatie van targets en het aantal fout-positieven bij de beoordeling van de orgaankwaliteit vermindert.

Hoe past de isolatie van de onafhankelijke variabele bij SPME-probe-bemonstering bij transplantatie?

Het isoleren van variabelen zoals bewaarduur of weefselregio tijdens SPME-bemonstering maakt een duidelijke toeschrijving van metabole veranderingen mogelijk, wat mechanistische inzichten en besluitvorming in de ontdekkingsfase versterkt.

Wat maken kwantitatieve LC-MS-metingen van geëxtraheerde metabolieten mogelijk?

Kwantitatieve LC-MS-analyse van met SPME geëxtraheerde metabolieten biedt objectieve metrieken voor het vergelijken van de orgaankwaliteit, wat datagestuurde triage en prioritering in transplantatieworkflows ondersteunt.

Waarom zijn replicatie-eisen cruciaal voor cross-functionele SPME-studies?

Replicatie waarborgt de reproduceerbaarheid en betrouwbaarheid van metabole profielen over verschillende weefsels en tijdstippen, wat samenwerking tussen teams en standaardisatie in transplantatieonderzoek op meerdere locaties vergemakkelijkt.

Welke statistische analysemogelijkheden zijn vereist vóór de implementatie van weefselprofilering op basis van SPME?

Robuuste statistische instrumenten zijn nodig om metabolomische en lipidomische gegevens te analyseren, significantiedrempels te valideren en een betrouwbare interpretatie van kwaliteitsmetrieken voor organen te ondersteunen voorafgaand aan klinische translatie.

Solid Phase Microextraction Sampling: A Probe-based Technique for Sample Extraction from Graft Tissues

JoVE Encyclopedia of Experiments

Cancer Research

0 weergaven • 3:42 min • April 30th, 2023

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Long-term storage of an organ graft affects its metabolic profile, which is an indicator of organ function and early-stage organ rejection.

To isolate these metabolites, begin by taking a thin solid-phase microextraction or SPME probe coated with a biocompatible sorbent. Immerse the probe in a hydroalcoholic cleaning solution to hydrate the coated sorbent and loosen up any bound impurities.

Agitate the probe to remove the impurities. Next, place the probe in an activation solution and agitate again. Chemicals in the activation solution modify the probe surface, enhancing its adsorption potential. Rinse the probe with water and sterilize it to remove microbial contaminants.

Now, insert the sterile and activated probe into the organ graft such that the tissue matrix covers the entire sorbent surface. The sorbent material attracts free polar and non-polar metabolites from the graft, enabling adsorption onto its surface. Retract the probe and rinse it with water to remove any residual tissue.

Then, place the probe into a desorption solution, which interacts with the adsorbed metabolites. Agitate the probe to separate and solubilize the captured metabolites into the desorption solution. Finally, remove the probe and process the resultant metabolite mixture for subsequent analysis.

Start by preparing a preconditioning mixture composed of 1 to 1 methanol and water. Pipette 1 milliliter of the solution into each 2-milliliter glass vial and place one probe in each vial. Agitate the vials on a vortex agitator at 1,200 rpm for 1 hour. Then, rinse the probes with LC-MS grade water and sterilize them according to the standard surgical sterilization protocol or in sterile processing department.

When ready to extract the sample, open the sterile packaging and insert two probes directly into the kidney cortex for 10 minutes per time point, making sure that the entire length of the coating is covered by the tissue matrix. Make sure to keep track of the time of sampling for each probe. Retract the probe by pulling it out from the tissue and immediately rinse the coating with LC-MS grade water to remove any remaining blood, making sure to rinse away from the surgical site.

Gerelateerde video's

0 Bekeken

Laatst bijgewerkt: 22 augustus 2026

Solid Phase Microextraction Sampling: A Probe-based Technique for Sample Extraction from Graft Tissues

Overzicht

Belangrijkste studiecomponenten

Wetenschapsgebied

Achtergrond

Doel van de studie

Gebruikte methoden

Belangrijkste resultaten

Conclusies

Veelgestelde vragen

Industriële Relevantie

Strategische Toepassingen in Biofarmaceutische R&D

Vroege ontdekking & targetvalidatie

Screening & Assayontwikkeling

Translationeel & Preklinisch Onderzoek

Integratie van Pipeline & Workflow

Operationele & Bedrijfsimpact

Overwegingen voor implementatie

Biopharma Veelgestelde Vragen

Normotherme Ex Vivo Nier Perfusie voor het Behoud van de Nier transplantaten voorafgaand aan de transplantatie

Een handige methode voor de extractie en analyse met hogedruk-vloeistofchromatografie Catecholamine Neurotransmitters en hun metabolieten

On-Site bemonstering en extractie van hersentumoren voor metabolomics en lipidomics analyse

Proteomics Monstervoorbereiding van formaline gefixeerde en in paraffine ingebed weefsel

Weefsel karakterisering na een New Uitsplitsing Methode voor de huid Micro-Enten Generation

Toepassingen van de single-probe: massaspectrometrie Imaging en Single Cell Analysis onder omgevingsomstandigheden

Verkennen van de wortel Microbiome: extraheren van gegevens van de bacteriële Gemeenschap uit de bodem, de rhizosfeer, en de wortel Endosphere

Toestellen voor het oogsten van weefsel Microcolumns

Absorberend Microbiopsy bemonsterings- en RNA extractie voor minimaal invasieve, gelijktijdige bloed en huid analyse

Geïntegreerde cel manipulatie platform in combinatie met de single-probe voor massaspectrometrie analyse van drugs en metabolieten in enkele schorsing cellen