A. mesenterica samentrekking en ontspanning Studies met behulp van geautomatiseerde Wire Myography

Deze procedure maakt gebruik van zoutgevoelige en zoutresistente ratten om de reactiviteit van mesenteriale weerstandsslagaders onder phenylephrine-spanning ten opzichte van extracellulair calcium te vergelijken. Dit wordt bereikt door eerst de mesenteriële arcade uit de dieren te isoleren en de vertakkingen van de weerstandsslagader te dissekeren. Vervolgens wordt één van de twee roestvrijstalen draden door een kort segment van de gedisseceerde slagader geregen en wordt het vat in de grafiekkamer gemonteerd.

Vervolgens wordt de tweede roestvrijstalen draad parallel aan de eerste draad door het lumen van het vat geregen. Daarna wordt het gemonteerde vat uitgerekt tot een genormaliseerde interne omtrek. De laatste stap van de procedure is het reactiveren van het vat door het bloot te stellen aan herhaalde toedieningen van fenylefrine en het te laten ontspannen met cumulatieve toedieningen van calcium.

Uiteindelijk tonen de resultaten veranderingen in de spanning van het vat aan, die kunnen worden omgezet in een calciumresponscurve en gebruikt kunnen worden om EC 50-waarden te bepalen. Ter vergelijking: we kregen oorspronkelijk het idee om deze methode te gebruiken toen we ontdekten dat het zenuwnetwerk van ratten Masonary-batterijen een gpro-koper-calciumsensorreceptor tot expressie bracht.

Dit kan op dezelfde wijze worden bestudeerd als bitter AIC-receptoren, die door een agonist worden geactiveerd. Over het algemeen kunnen personen die nieuw zijn met deze methode problemen ondervinden omdat de endotheellaag en de gladde spierlaag klein zijn. Vaten raken gemakkelijk beschadigd.

Als dit gebeurt, kunnen de mechanische eigenschappen van deze vaten worden aangetast. Begin met het voorbereiden van de werkruimte en de chirurgische instrumenten. Plaats een geanestheseerd dier op de rug en veeg de buik af met alcohol.

Voer een middenlijn laparotomie uit en gebruik een schaar om ongeveer 85 centimeter darm te verwijderen, inclusief de arteria mesenterica superior. Snijd het proximale uiteinde dicht bij de pylorus en het distale uiteinde nabij de ileocecale overgang. Plaats het uitgesneden segment in een gecoate Petrischaal met fysiologische zoutoplossing of PSS bij kamertemperatuur.

Zet het proximale uiteinde van de darm aan de rechterkant vast met een pin en zet vervolgens de rest van de darm in tegenwijzerzin vast. Dissecteer daarna een segment van de arteria mesenterica weg dat vertakking twee en drie bevat, samen met een stuk darm vanaf het proximale uiteinde. Identificeer het V-vormige vertakkingspunt van de arteria mesenterica en dissecteer dit weg van de vene.

Gebruik een pincet om vet- en bindweefsel voorzichtig weg te trekken om direct contact met de arterie te vermijden. Om te beginnen met het monteren van het vat, snij twee arteriesegmenten van ongeveer twee millimeter lang. De punt van een vier centimeter lange, 40 micrometer wolfraamvrije roestvrijstalen draad kan worden gebruikt om het lumen van de arterie te openen.

Gebruik vervolgens een fijne pincet om de draad in het lumen van elke slagader in te brengen. Vul de kamer van het myograft met PSS bij 37 °C, waarbij u er zorg voor draagt dat het endotheel niet wordt beschadigd. Gebruik een pincet om het segment van het vat met de draad naar de kamer over te brengen.

Breng vervolgens het uitgesneden proximale vatsegment over naar de myografiekamer en trek het uiteinde langs de draad om het in het vat te voeren. Voorkom dat het vat wordt uitgerekt. Bevestig het nabije uiteinde van de draad tegen de klok in onder de nabije bevestigingsschroef op de rechterkaak die verbonden is met de micrometer.

Pak het vrije uiteinde van de draad met een pincet en zet deze met een draai in klokrichting vast onder de verre bevestigingsschroef op de rechterbek; zorg ervoor dat het vaatsegment langs de draad in de opening tussen de bekken is geplaatst zonder contact te maken met de bek zelf. Draai de bekken uit elkaar. Lijn de tweede draad parallel aan het vat uit en voer deze in het verre uiteinde van het lumen in.

Voer de draad in één vloeiende beweging voorzichtig door het lumen van het vaatsegment, waarbij de reeds gemonteerde draad als geleider dient. Houd de draad ongeveer één centimeter van het vat vandaan om te voorkomen dat deze tijdens de manoeuvre wordt uitgerekt en vermijd contact met het endotheel. Draai de kaken in elkaar en zorg ervoor dat de tweede monteerdraad onder de eerste draad door beweegt, die aan de rechterzijde is vastgezet.

Bevestig het nabije uiteinde van de tweede draad in klokrichting onder de nabije bevestigingsschroef van de linkerbek die is verbonden met de transducer. Bevestig het verre uiteinde van de draad onder de bevestigingsschroef op de linkerbek en draai deze vast om de draad te spannen. Zodra de montage is voltooid, laat u het geheel 30 minuten equilibreren bij 37 °C.

Na de equilibratie wordt de motor gereset via het montagemenu en wordt de normalisatieprocedure gestart, waarbij het vat wordt uitgerekt tot een genormaliseerde interne omtrek. Open om te beginnen het normalisatiemenu en stel de doelmurale druk in op 13.3 kilopascals. Stel vervolgens de duur van elke normalisatiestap in op 60 seconden.

De ratio tussen IC 1 en IC 100 moet 0,9 bedragen en de IP-kalibratie moet worden ingesteld op "two star delta". Meet de lengte van de gemonteerde mesenterische arterie met behulp van de aflezingen van het microscoopoculair wanneer de haarlijnen zich over de verre en nabije uiteinden van het vaatsegment bevinden. Na normalisatie worden de vaten opnieuw geactiveerd door een standaard start uit te voeren, bestaande uit een reeks stimulaties en uitwasperioden.

Vervang eerst de afdekking van de myo-kamer en start de beluchting met 95% lucht en 5% kooldioxide. Vul de kamer met verse PSS die 100 micromolar ascorbinezuur bevat. Laat het vat vijf minuten contraheren met vijf micromolar fenylefrine (PE) en was dit vier keer met PSS-buffer. Vul de kamer na de laatste wasbeurt opnieuw met PSS en wacht drie minuten voordat u de kamer opnieuw met PSS vult en laat contraheren met PE. Zoals eerder aangetoond, is de arterie nu klaar voor het experiment.

Meet de relaxatie van gecontracteerde vaten door cumulatief toenemende concentraties calciumchloride toe te voegen. Deze tabel laat zien dat de basale spanningen na toediening van fenylefrine varieerden tussen Wistar DS (Doll salt sensitive) en DR (Doll salt resistant) ratten. Deze trace van een Wistar-rat toont de relaxatie van door PE gecontracteerde arteriën door cumulatieve toevoegingen van calcium; de relaxatie is ernstig aangetast in weefsels van DS-ratten vergeleken met Wistar-ratten en vergeleken met DR-ratten. Zoals hier te zien is, zijn de verschillen in calciumsensitiviteit zichtbaar in de calciumrespons-curves en opnieuw bij het berekenen van de EC 50-waarden.

Ten slotte vertonen DS-ratten een verminderde expressie van de calciumsensingreceptor in de slagaders in vergelijking met Dr.Rats. Zodra deze techniek onder de knie is, kan deze in twee uur worden uitgevoerd indien correct uitgevoerd. Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe de vasculaire reactiviteit van kleine enterische slagaders op exogene verbindingen onder isometrische omstandigheden kan worden vergeleken.