Measurement of Multiple Mitochondrial Parameters in Neurons using Flow Cytometry

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 weergaven • 2:09 min • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Take fixed and permeabilized neurons in a tube.

Add a blocking buffer to prevent non-specific antibody binding.

Centrifuge the suspension and remove the supernatant. Then, resuspend the neurons in buffer.

Transfer the suspension equally into tubes containing untagged and fluorophore-tagged primary antibodies.

Incubate, allowing the antibodies to specifically bind to mitochondrial respiratory chain or MRC complex subunits, a mitochondrial DNA-associated protein, and a mitochondrial outer membrane protein within the neurons.

Remove any unbound antibodies.

Incubate with fluorophore-tagged secondary antibodies that bind to the untagged primary antibodies.

Centrifuge the mixture and discard the supernatant.

Resuspend the neurons in buffer and transfer them to microcentrifuge tubes.

Perform flow cytometry to detect the fluorescent signals on the labeled neurons, corresponding to the expression levels of MRC complex subunits and the measurement of relative mitochondrial DNA levels.

Block the samples in 1 milliliter of blocking buffer, and wash the cells by centrifugation with PBS as demonstrated. To detect different mitochondrial complexes and subunits, incubate the cells for 30 minutes with the respective primary antibodies described in the text manuscript. After washing the cells once with PBS, incubate the cells with secondary antibody for 30 minutes.

At the end of the incubation, wash and resuspend the cells in PBS as demonstrated. Transfer the cell suspension into a 1.5-milliliter microcentrifuge tube, kept in the dark, on ice. Next, analyze the cells on the flow cytometer and detect signals and filter one using a 530/30 bandpass filter.

12:14

Isolatie en Flow cytometrische analyse van de immuuncellen van de ischemische hersenen van muizen

Gerelateerde video's

0 Bekeken

09:44

Flow cytometrische analyse van mitochondriale reactieve zuurstof soorten in Muriene hematopoietische stam en voorlopercellen en MLL-AF9 gedreven leukemie

Gerelateerde video's

0 Bekeken

13:53

Flowcytometrische analyse van apoptotische biomarkers in actinomycine D-behandelde SiHa baarmoederhalskankercellen

Gerelateerde video's

0 Bekeken

15:09

Het gebruik van primaire menselijke fibroblasten voor de monitoring van Mitochondriale fenotypes op het gebied van de ziekte van Parkinson

Gerelateerde video's

0 Bekeken

11:53

Immunodetectie van Outer membraaneiwitten door flowcytometrie van Geïsoleerde Mitochondriën

Gerelateerde video's

0 Bekeken

06:22

Multicolor Stroom Cytometry gebaseerde kwantificering van Mitochondria en lysosomen in T cellen

Gerelateerde video's

0 Bekeken

07:17

Verbetering van de nauwkeurigheid van de flowcytometrische beoordeling van het mitochondriale membraan potentieel in hematopoietische stam en voorlopercellen door remming van effluxpompen

Gerelateerde video's

0 Bekeken

10:24

Gelijktijdige stroming cytometrische karakterisering van meerdere celtypen opgehaald uit muis hersenen/ruggenmerg via verschillende homogenisatie methoden

Gerelateerde video's

0 Bekeken

07:57

Meting van het mitochondriale massa-en membraanpotentiaal in hematopoietische stamcellen en T-cellen doorstroming Cytometrie

Gerelateerde video's

0 Bekeken

07:32

Analyseren van mitochondrial transport en morfologie in de mens geïnduceerde pluripotente stamcel-afgeleide neuronen in erfelijke Spastische dwarslaesie

Gerelateerde video's

0 Bekeken

Laatst bijgewerkt: 22 augustus 2026