Mouse Eye Enucleatie voor Remote High-throughput Fenotypering
19 november 2011
De dissectie techniek illustreert enucleatie van de muis oog voor weefsel fixatie te fenotypering presteren in high-throughput-schermen.
Deze video illustreert het oog van de muis en de enucleatie, oftewel het verwijderen van de oogbol uit de oogkas. De oogbol wordt begrensd door de rand van het onderste ooglid. Hier is de mediale of nasale canthus.
Achteraan bevindt zich de temporale of laterale canthus. Bovenaan is de bovenste ooglidrand zichtbaar. Hier is een chirurgisch preparaat.
De naald wijst naar het heldere hoornvlies. We kunnen een klein stukje van de lens zien die voorbij de iris steekt. De iris bevindt zich hier in het bruin en bedekt de lens.
Het belangrijkste chirurgische referentiepunt is deze witte lijn, of de limbus; de punctiewond wordt vlak daarachter gemaakt. De achterste helft van de oogbol bevindt zich achter de limbus en we wijzen hier naar een spieraanhechting. U kunt de spier hier tegen de oogbol zien liggen, en vervolgens het bindweefsel dat de orbit vult en de glanda Harder bevat.
En tot slot is dit de witte, lange strook van de oogzenuw na een botte dissectie. Gebruik een gebogen pincet, aangepast met een scherpe punt, om de oogleden uit elkaar te trekken. Dit helpt doorgaans om het oog naar buiten en weg te drukken.
Gebruik de pincet voorzichtig om in de oogkas en achter de oogbol te gaan, knijp deze zachtjes achter de oogbol samen zonder deze plat te drukken en trek naar voren. U zou het bindweefsel moeten hebben gegrepen en niet de oogbol. Als u de oogbol naar de zijkant draait, kunt u het orbitale weefsel samen met de witte oogzenuw zien.
Dit is een tweede dissectie om opnieuw te laten zien dat u bij de canthus naar binnen gaat, de pincet achter de oogbol duwt, het bindweefsel pakt en dit naar voren trekt zonder op de oogbol zelf te drukken. Opnieuw ziet u het bindweefsel in de lange witte strip van de oogzenuw. Om een punctiewond te maken, grijpt u de oogbol vast bij een spieraanhechting en steekt u een naald achter de limbus, direct naast de plek waar u het oog vasthoudt om het te stabiliseren.
Hierdoor kan het fixatief het oog binnendringen. Als u de punctie ver verwijderd maakt van de plek waar u het oog vasthoudt, zal de oogbol zeer onstabiel zijn en zal het moeilijk zijn om die wond te maken zonder het oog samen te drukken of overmatige druk uit te oefenen. U kunt ook al het bindweefsel direct achter de oogbol zelf vastpakken.
Sommige fixatievloeistoffen vereisen geen punctiewond. In het algemeen plaatsen we het oog in een scintillation vial van 5 cc met ten minste 3 cc fixatievloeistof om er zeker van te zijn dat het oog volledig is ondergedompeld. Voor via perfusie gefixeerde dieren is een nauwkeurige dissectie noodzakelijk.
We gebruiken een gebogen calibri-pincet en een gebogen wescott-schaar. Pak het onderste ooglid vast met het calibri-pincet. Plaats de schaar tegen het orbitale bot en begin met het doorsnijden van het bindweefsel.
We maken gebruik van de kromming weg van de oogbol en vermijden het inkllemmen bij het bepalen van de grootte. Elk deel van het oog is bruikbaar langs de gehele rand van het onderste ooglid, van de ene canthus naar de andere. Op een bepaald punt zal het grootste deel van het bindweefsel zijn verwijderd, waarna u de schaar achter de oogbol kunt schuiven en deze weg kunt trekken.
Hier is nogmaals een voorbeeld waarbij de schaar in de oogkas wordt ingebracht, maar tegen het oogkashout in plaats van tegen de oogbol, om het bindweefsel weg te knippen. Hiermee wordt de oogbol, die als een basketbal in een mandje ligt, begin vrij te maken. Gebruik de pincet om de oogleden weg te trekken en maak voorzichtig korte inkepingen rondom de oogbol.
Hierbij vatten we het bindweefsel of een spieraanhechting vast met de Collibra en maken we de oogbol volledig los van het orbitale bindweefsel. Nadat de oogbollen adequaat zijn gefixeerd, brengen we, indien ze getransporteerd moeten worden, wat parafilm aan rond het bewaarflesje.
De verpakking moet in overeenstemming zijn met de regelgeving van uw universiteit en de overheid. Gewoonlijk plaatsen we deze in een container met wat watten om eventueel vrijkomend vocht op te vangen; deze container moet zeer goed worden afgesloten. Deze verzendcontainer wordt vervolgens in een zak met noppenfolie geplaatst.
Dit wordt samen met de bijbehorende documentatie in een verzendpakket voor vloeistoffen uit het laboratorium geplaatst.
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's
Overzicht
Deze video illustreert de techniek voor de enucleatie van het muis-oog, wat cruciaal is voor weefselfixatie in high-throughput fenotyperingsscreenings. De procedure omvat het verwijderen van de oogbol uit de oogkas, waarbij anatomische oriëntatiepunten worden benadrukt voor de duidelijkheid.
Belangrijkste componenten van de studie
Wetenschapsgebied
- Neurowetenschap
- Biologie
Achtergrond
- Enucleatie is een kritische techniek in diverse biologische studies.
- Kennis van de anatomie van het oog helpt bij nauwkeurige chirurgische procedures.
- Deze methode is essentieel voor high-throughput screening-toepassingen.
- Een juiste fixatie van het weefsel is noodzakelijk voor een accurate fenotypering.
Doel van de studie
- Om de enucleatietechniek voor educatieve doeleinden te demonstreren.
- Om een visuele gids te bieden voor onderzoekers die soortgelijke procedures uitvoeren.
- Om het begrip van anatomische oriëntatiepunten tijdens de chirurgie te verbeteren.
Gebruikte methoden
- Videodemonstratie van het enucleatieproces.
- Identificatie van belangrijke anatomische kenmerken van het muizenoog.
- Stapsgewijze begeleiding voor het uitvoeren van de procedure.
- Visuele hulpmiddelen ter ondersteuning van het leren en de toepassing.
Belangrijkste resultaten
- Duidelijke visualisatie van de enucleatietechniek.
- Identificatie van de mediale en laterale canthus.
- Demonstratie van het chirurgische preparaat na de enucleatie.
- Verbeterd begrip van de procedure voor high-throughput screening.
Conclusies
- De video dient als een effectief educatief hulpmiddel voor onderzoekers.
- Een goed begrip van het enucleatieproces is essentieel voor een succesvolle weefselfixatie.
- Een juiste techniek kan de resultaten in fenotyperingsstudies verbeteren.
Veelgestelde vragen
Industriële relevantie voor leidinggevenden
Op afstand uitgevoerde high-throughput fenotypering van muizenogen maakt gedistribueerd gebruik van genetische bronnen mogelijk en versnelt de ontdekking van genotype-fenotype-correlaties in oogheelkundige ziektemodellen. Gestandaardiseerde protocollen voor enucleatie en weefseloverdracht verminderen geografische en operationele barrières, wat schaalbaar, multicentrisch preklinisch onderzoek ondersteunt. Deze aanpak verbetert de portfoliobrede toegang tot zeldzame of geografisch verspreide transgene lijnen voor vroege targetvalidatie en fenotypische screening.
Strategische toepassingen in biofarmaceutisch R&D
Vroege Ontdekking & Targetvalidatie
- Faciliteert de systematische verzameling van oogweefsels uit diverse genetische achtergronden voor hypothese-gestuurde studies.
- Maakt functionele validatie mogelijk van kandidaatgenen die betrokken zijn bij de ontwikkeling en pathologie van het oog.
- Ondersteunt de voorspellende betrouwbaarheid bij het koppelen van genetische perturbaties aan fenotypische uitkomsten.
Screening & assayontwikkeling
- Biedt gestandaardiseerde, gefixeerde weefselmonsters die geschikt zijn voor downstream moleculaire en morfologische analyses.
- Verbetert de reproduceerbaarheid en vergelijkbaarheid bij fenotyperingsonderzoeken op meerdere locaties.
- Maakt schaalbare preparatie van monsters mogelijk voor high-throughput screeningplatforms.
Translationeel & Preklinisch Onderzoek
- Lijnt muis-fenotypering uit met de translationele biomarker-ontdekking voor humane oogziekten.
- Ondersteunt de continuïteit van genetische ontdekking tot preklinische validatie van ziektemechanismen.
- Vermindert logistieke barrières bij de toegang tot zeldzame of geografisch verspreide muismodellen.
Integratie van Pipeline & Workflow
Dit protocol voor remote enucleatie en weefseloverdracht is geïntegreerd in het vroege discovery- en preklinische continuüm, waarmee de generatie van genetische modellen wordt verbonden met gecentraliseerde fenotypering en analyse.
- Discovery Biology: Maakt hypothesetoetsing en mechanische risicoreductie mogelijk door toegang te bieden tot diverse genetische modellen.
- Screening: Standardiseert de monstervoorbereiding voor reproduceerbare, kwantitatieve fenotyperingsassays.
- Analytics: Ondersteunt de acquisitie van morfologische en moleculaire read-outs voor vergelijkende analyse.
- Translationeel onderzoek: Faciliteert de afstemming van muis-fenotypes met biomarkers van menselijke ziekten.
- Enterprise-hergebruik: Stelt een herbruikbaar protocol vast voor gedistribueerde weefselacquisitie binnen onderzoeksnetwerken.
Operationele & Bedrijfsmatige Impact
- Wetenschappelijke waarde: Verhoogt het voorspellende vertrouwen in genotype-fenotype associaties en targetvalidatie.
- Operationele waarde: Stroomlijnt de logistiek, standaardiseert procedures en maakt schaalbaarheid over meerdere locaties mogelijk.
- Strategische waarde: Verbetert de go/no-go besluitvorming door de toegang tot fenotypische gegevens van zeldzame modellen te verbreden.
- Impact op portfolio: Ondersteunt de risico-gecorrigeerde prioritering van genetische targets en ziektemodellen.
Overwegingen voor de implementatie
- Vereist chirurgische vaardigheid in het enucleeren van het muisoog en het hanteren van weefsel.
- Toegang tot fixatiereagentia en gevalideerde transportcontainers is noodzakelijk, evenals naleving van de transportvoorschriften.
- Vereist cross-site standaardisatie van verzamel- en documentatieprotocollen.
- Aanpasbaar aan zowel workflows voor niet-gefixeerd als perfusie-gefixeerd weefsel, zoals ondersteund door het protocol.
- Afhankelijk van institutionele en overheidsrichtlijnen voor het transport van biologische monsters.
