Murine Oppervlakkige lymfkliertest Chirurgie

Het algemene doel van deze procedure is om chirurgisch lymfeklieren te verwijderen bij een geanestheseerde muis. Dit wordt bereikt door eerst de lymfeklieren te lokaliseren. De lymfeklieren worden geoogst, waarna de incisie wordt gesloten.

Ten slotte kan een suspensie van enkelvoudige cellen worden verkregen voor experimentele analyse. Uiteindelijk kunnen levensvatbare lymfocytenpopulaties worden geëvalueerd via flowcytometrie. Een visuele demonstratie van deze techniek is essentieel, aangezien de lokalisatie en verwijdering van lymfeklieren bekeken moeten worden om deze procedure te beheersen.

Nadat de muis is geanestheseerd, brengt u oogsalf aan, injecteert u buprenorfine en bevestigt u de sedatie via een teenknijptest, waarna u de muis op zijn zij legt. Lokaliseer eerst de brachiale lymfeknoop en scheer vervolgens het te dissekeren gebied. Nadat eventuele losse haren zijn weggeborsteld, brengt u een desinfectiemiddel aan op het gebied en maakt u vervolgens een kleine incisie van ongeveer vijf millimeter op de achterzijde van het voorbeen.

Gebruik twee sets pincetten om de incisie open te trekken totdat de brachiale lymfeklier, die grijsachtig of donkerder kan zijn dan het omliggende vet, zichtbaar is. Knijp vervolgens met één set pincetten in het fascia die de lymfeklier bedekt. Plaats de tweede set pincetten zo ver mogelijk onder de lymfeklier en trek voorzichtig aan het membraan zonder het omringende weefsel te beschadigen.

Gebruik vervolgens het eerste paar pincetten om het fascia te doorbreken en de lymfeknoop te verwijderen. Als de lymfeknoop succesvol is geoogst, verschijnt er een bloedvlek op de plek waar de lymfeknoop zich eerder bevond. Plaats de uitgenomen lymfeknoop in een isotone oplossing; als deze zinkt, bevestigt dit dat het geoogste weefsel een lymfeknoop is en geen vet.

Verifieer vervolgens of er geen haren in de wond zitten en sluit de incisie door de twee binnenkanten van de huid tegen elkaar aan te drukken en ze met één tot twee klemmetjes te stapelen, afhankelijk van de grootte van de incisie. Lokaliseer nu een inguinale lymfeknoop en scheer het gebied dat gedissekeerd moet worden. Na het wegborstelen van eventuele losse haren, brengt u een desinfectiemiddel aan op het gebied en maakt u vervolgens een kleine incisie van ongeveer vijf millimeter boven de achterpoot nabij de buik.

Nadat de incisie is geopend met twee sets pincetten, zoals zojuist is aangetoond voor de lymfeknoop in de armokselstreek, identificeert u de inguinale lymfeknoop die genesteld is in het omringende vetweefsel. Verwijder vervolgens de lymfeknoop met de twee sets pincetten zoals zojuist gedemonstreerd. Bevestig opnieuw de succesvolle winning van de lymfeknoop door te letten op de bloedverkleuring die verschijnt op de plek waar de lymfeknoop zich eerder bevond, en plaats de inguinale lymfeknoop vervolgens in een aparte container met isotonische oplossing.

Nadat alle lymfeklieren zijn geoogst, plaatst u de muis in een kooi en voegt u natvoer toe, zodat de muis gemakkelijk kan eten. Ongeveer zes tot acht uur na de operatie controleert u de muis om er zeker van te zijn dat deze geen pijn ervaart. Observeer zorgvuldig of de houding, het gangpad, de interactie met soortgenoten en het uiterlijk van de vacht vergelijkbaar zijn met die van een normale, gezonde muis.

Ontbind tot slot de lymfeklier door deze in een Petrischaal tegen gematteerde objectglazen te drukken en breng het vervolgens over in een buisje om een enkelcel-suspensie te verkrijgen. Nadat de cellen zijn gekleurd voor de relevante celoppervlakte-antigenen, worden de cellen geanalyseerd via flowcytometrie. Hier worden representatieve forward- en side-scatterplots getoond voor lymfeklieren die zijn geoogst van respectievelijk genarceerde of geofferde dieren.

De profielen en percentages van cellen in de live lymfocyt-gates van de twee scatterplots zijn identiek. Dit demonstreert dat chirurgie van de lymfeklieren een geschikte techniek is om cellen te oogsten. Zodra de techniek onder de knie is, kan de chirurgie van de lymfeklieren in vijf tot 10 minuten per muis worden uitgevoerd, mits dit correct wordt gedaan.