Neonatale beenmergisolatie bij muizen en bereiding van van beenmerg afgeleide macrofagen
24 mei 2024
Dit protocol beschrijft een niet-enzymatische en eenvoudige methode voor het isoleren van 7-9 dagen oude neonatale beenmergcellen van muizen en het genereren van gedifferentieerde macrofagen met behulp van een supernatans van L929-cellen als bron van granulocytkoloniestimulerende factor (M-CSF). De van beenmerg afgeleide macrofagen werden verder geanalyseerd op oppervlakteantigenen F4/80, CD206, CD11b en functionele competentie.
Het doel van deze studie is om enkele van de beperkingen in de immuunrespons van het vroege leven op bacteriële infectie te begrijpen. Om dit te bereiken, moeten we onderzoeksmodellen ontwikkelen en gebruiken die specifiek zijn voor pasgeborenen. Isolatie van beenmerg van een pup van een dag zeven oud is uitdagend en niet goed ingeburgerd.
Neonatale van beenmerg afgeleide macrofagen zijn gevoelig en vatbaar voor stress in vergelijking met andere BMDM's. De techniek die in dit protocol wordt gebruikt, is eenvoudig en reproduceerbaar. Deze methode begeleidt de gebruikers bij het isoleren van beenmerg van zeven tot negen dagen oude neonatale muizen zonder het gebruik van enzymen.
Deze studie biedt een gestandaardiseerde strategie om van beenmerg afgeleide macrofagen van neonatale muizen te genereren die kunnen worden gebruikt om vragen over neonatale immunologie te beantwoorden. Deze reproduceerbare methode biedt een leeftijdsspecifiek model voor het bevorderen van neonataal immuunonderzoek op vele expertisegebieden.
Overzicht
Dit protocol beschrijft een niet-enzymatische methode voor het isoleren van beenmergcellen uit pasgeboren muizen en het genereren van gedifferentieerde macrofagen. De studie richt zich op de uitdagingen bij het werken met pasgeboren muizen van 7-9 dagen oud en de gevoeligheid van hun uit beenmerg afgeleide macrofagen.
Belangrijkste studiecomponenten
Wetenschappelijk gebied
- Neurowetenschappen
- Immunologie
- Celbiologie
Achtergrond
- Inzicht krijgen in vroege immuunresponsen op bacteriële infecties tijdens de vroege levensfase.
- Uitdagingen bij het isoleren van beenmerg uit pasgeboren muizen.
- Beenmerg-afgeleide macrofagen van pasgeboren muizen zijn gevoelig en stressgevoelig.
- Noodzaak van reproduceerbare technieken in onderzoek naar pasgeborenen.
Doel van de studie
- Om een betrouwbare methode te ontwikkelen voor het isoleren van beenmerg uit pasgeboren muizen.
- Om functionele macrofagen te genereren voor studies naar immuunresponsen.
- Om het begrip van immuunresponsen bij pasgeborenen te vergroten.
Gebruikte methoden
- Isolatie van beenmerg van pasgeboren muizen van 7-9 dagen oud.
- Niet-enzymatische techniek voor celisolatie.
- Gebruik van L929-celsupernatant als bron van M-CSF.
- Analyse van oppervlakteantigenen en functionele competentie van macrofagen.
Belangrijkste resultaten
- Succesvolle isolatie van neonatale uit het beenmerg afgeleide macrofagen.
- Karakterisering van macrofagen met behulp van oppervlakteantigenen F4/80, CD206 en CD11b.
- Aantonen van de functionele competentie in de gegenereerde macrofagen.
- Validatie van de methode als eenvoudig en reproduceerbaar.
Conclusies
- Het protocol biedt een betrouwbare methode voor het bestuderen van immuunresponsen bij pasgeborenen.
- Geïsoleerde macrofagen kunnen worden gebruikt voor verder immunologisch onderzoek.
- Deze techniek kan bijdragen aan vorderingen in studies naar de gezondheid van pasgeborenen.
Veelgestelde vragen
Relevantie voor de Industrie
Betrouwbare isolatie en differentiatie van neonatale muismacrofagen afgeleid van beenmerg vult een kritiek gat in het modelleren van immuunresponsen in de vroege levensfase voor immunologie in de ontdekkingsfase. Dit gestandaardiseerde, enzymvrije protocol maakt leeftijdspecifieke mechanistische studies mogelijk, wat bijdraagt aan de voorspellende betrouwbaarheid in neonatale ziekte-modellen en translationeel onderzoek. De methode vergroot de relevantie van het portfolio door functionele immuuncelassays mogelijk te maken die zijn afgestemd op de neonatale biologie.
Strategische toepassingen in biopharma R&D
Vroege Ontdekking & Targetvalidatie
- Maakt onderzoek mogelijk naar neonatale immuunmechanismen die verschillen van systemen bij volwassenen.
- Ondersteunt functionele validatie van targets in leeftijdspecifieke ontstekings- en infectiemodellen.
- Faciliteert biologische risicoreductie voor hypothesen over neonatale immunologie.
- Verbetert het voorspellende vertrouwen voor therapeutische targets in de vroege levensfase.
Screening & Assayontwikkeling
- Biedt een gestandaardiseerde, reproduceerbare preparatie van neonatale macrofagen voor vervolganalyses.
- Maakt kwantitatieve beoordeling van de fagocytische functie mogelijk met behulp van pH-gevoelige, met kleurstof geconjugeerde bacteriën.
- Ondersteunt flowcytometrische analyse van oppervlaktemarkers voor validatie van de assay.
- Bereidt gevalideerde cellsystemen voor op compound-screening in neonatale contexten.
Translationeel & Preklinisch Onderzoek
- Stemt in vitro-macrofaagmodellen af op ziekterelevante neonatale immuunresponsen.
- Maakt continuïteit mogelijk van ontdekking tot preklinische validatie in leeftijdsspecifieke modellen.
- Ondersteunt risico-gecorrigeerde voortgang van neonatale immunologieprogramma's.
- Biedt mechanistische risicoreductie voor studies naar infectie en inflammatie in de vroege levensfase.
Integratie van Pipeline & Workflow
Dit protocol integreert in het continuüm van ontdekking naar preklinisch onderzoek door hypothesetesten, functionele validatie en kwantitatieve read-outs in neonatale immuunmodellen mogelijk te maken.
- Discovery Biology: Ondersteunt mechanistische studies naar de functie van neonatale immuuncellen en padanalyse.
- Screening: Levert reproduceerbare, assay-klare macrofagen voor functionele en fenotypische screening.
- Analytics: Biedt kwantitatieve output via flowcytometrie en fagocytose-assays voor het vergelijken van condities.
- Translationeel onderzoek: Slaat een brug tussen discovery en preklinisch werk met leeftijdsspecifieke immuuncelmodellen.
- Enterprise Reuse: Vestigt een herbruikbare, gestandaardiseerde workflow voor de preparatie van neonatale immuuncellen over verschillende programma's heen.
Operationele en bedrijfsmatige impact
- Wetenschappelijke waarde: Verhoogt het voorspellend vertrouwen en vermindert mechanistische ambiguïteit in neonataal immuunonderzoek.
- Operationele waarde: Levert gestandaardiseerde, reproduceerbare en schaalbare celpreparatie voor vergelijkbaarheid tussen studies.
- Strategische waarde: Maakt betere go/no-go-beslissingen en kapitaalefficiëntie mogelijk in neonatale immunologieportfolio's.
- Impact op portfolio: Ondersteunt risico-gecorrigeerde prioritering en ontwikkeling van immuuntargets in de vroege levensfase.
Overwegingen voor implementatie
- Vereist expertise in het hanteren van pasgeboren muizen en steriele technieken.
- Toegang tot flowcytometrie en fluorescentiemicroscopie is nodig voor functionele en fenotypische analyse.
- Standaardisatie tussen teams is vereist voor reproduceerbaarheid in multi-site studies.
- Aanpassing kan nodig zijn voor verschillende muizenstammen of leeftijdswindow's.
- Celopbrengst en stressgevoeligheid kunnen de schaalbaarheid beperken in vergelijking met volwassen modellen.
Biopharma Veelgestelde Vragen
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:10
Non‐Enzymatic Method for Isolating Neonatal Mouse Bone Marrow Cells
2:42
Differentiation of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Supernatant of L929 Cells
4:37
Assessing Phagocytic Function of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Fluorescent Bacterial Uptake Assay
