Assay Techniques

W tym filmie demonstrujemy test pozwalający ustalić obecność fosfolipazy w surowym ekstrakcie z jadu Anthopleura dowii - morskiego ukwiału. Test wykorzystuje technikę dyfuzji żelu agarozowego, w której enzym fosfolipaza dyfunduje i rozkłada fosfolipidy zawarte w pożywce stałej w sposób promienisty.

W tym filmie opisujemy test chiralności komórek w celu określenia odchylenia wyrównania komórek w ograniczonej granicy geometrycznej, takiej jak mikrowzór pierścieniowy. Chiralność jest nieodłączną właściwością większości typów komórek i jest determinowana przez czynniki genetyczne i środowiskowe. Znajomość chiralności normalnej populacji komórek może pomóc w badaniach przesiewowych komórek leczonych lekami.

Ten film opisuje test kolorymetryczny do pomiaru aktywności syntazy cytrynianu mitochondrialnego obecnego w homogenacie tkankowym Drosophila.

W tym filmie opisujemy opartą na kolorymetrii metodę określania zawartości żelaza niehemowego w tkance wątroby myszy. Sulfonian batofenantroliny jest stosowany jako substrat chromogenny w obecności środka redukującego, który przekształca żelazo żelazowe w chelatowalne żelazo żelaza.

Ten film demonstruje technikę kwantyfikacji CO2 uwalnianego podczas utleniania substratu przy użyciu 14substratów znakowanych radioizotopem C. Uwolnione 14CO2 jest uwięzione w roztworze alkalicznym i oznaczane ilościowo za pomocą licznika scyntylacyjnego. Utlenianie różnych substratów różni się w zależności od tkanki i odzwierciedla stan patofizjologiczny tkanki.

W tym filmie demonstrujemy procedurę badania organizacji septyny na dwuwarstwie lipidowej na podłożu szklanym in vitro przy użyciu mikroskopii fluorescencyjnej z całkowitym wewnętrznym odbiciem.

Ten film opisuje technikę badania składania białek septyny na mikrosferach pokrytych dwuwarstwami lipidowymi. Technika ta pomaga w zrozumieniu zależnych od krzywizny zespołów białek na zakrzywionych powierzchniach.

W tym filmie demonstrujemy test przesiewowy w celu określenia skuteczności małocząsteczkowych nematocydów przeciwko nicieniom. Nematocydy uważa się za skuteczne, jeśli powodują zmniejszenie liczby ruchomych nicieni w próbce po ekspozycji.

W tym filmie opisujemy metodę wykrywania złogów wapnia wydzielanych przez osteoblasty za pomocą barwnika anionowego, Alizarin Red S. Wyhodowane osteoblasty są najpierw barwione, a następnie barwnik jest odzyskiwany w celu kolorymetrycznego oznaczania ilościowego depozytów wapnia lub stopnia mineralizacji osteoblastów.

W tym filmie opisujemy test kontaktu z larwami w celu oceny toksyczności antagonisty receptora dopaminy, amitryptyliny, na larwach komarów w trzecim stadium rozwojowym, znanych wektorach kilku chorób zakaźnych u ludzi. Ocena śmiertelności larw podczas inkubacji z różnymi stężeniami amitryptyliny w różnych odstępach czasu pomaga określić jej stężenie śmiertelne 50.

W tym filmie pokazujemy miejscowy test testowy w celu określenia toksyczności potencjalnego środka owadobójczego na dorosłe samice komarów. Wykorzystując antagonistę receptora dopaminy, który powoduje śmiertelne hamowanie neuroprzekaźnictwa u komarów, metoda ta opisuje sposób oceny toksycznego działania insektycydów po miejscowym stosowaniu.

Ten film demonstruje test odżywiania krwią w celu oceny śmiertelności i płodności badanych związków o nowych sposobach działania na samice komarów. Technika ta pomaga w badaniach przesiewowych nowych klas insektycydów w celu zabicia opornej populacji komarów i kontrolowania rozprzestrzeniania się choroby.

W tym filmie demonstrujemy komórkowy test agregacji białek za pomocą inhibitorów proteasomów, które blokują aktywność proteasomu, zapobiegając nieprawidłowo sfałdowanym, zmutowanym białkom, połączonym z fluorescencyjnym znacznikiem, przed degradacją proteasomalną zależną od ubikwityny, prowadzącą do ich akumulacji w cytoplazmie komórki. Agregaty białkowe są następnie wizualizowane i oznaczane ilościowo za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej.

Ten film demonstruje szybki test biologiczny do badania aktywności endotoksyn w próbce krwi pełnej za pomocą metody opartej na chemiluminescencji. Ten test jest szybkim i czułym testem biomarkerowym do wczesnej diagnozy sepsy zależnej od endotoksyn.

Ten film opisuje mętny format testu lizatu amebocytów Limulus (LAL) do oszacowania zanieczyszczenia endotoksynami w pegylowanych liposomalnych nanopreparatach doksorubicyny. Zmętnienie roztworu po reakcji endotoksyny z odczynnikiem LAL pomaga oszacować endotoksynę w próbce.

Ten film opisuje test żelowo-skrzepowy w celu określenia obecności endotoksyn bakteryjnych w nanopreparatach przy użyciu lizatu lizatu lizatu lizatu pochodzącego z komórek krwi krabów podkowiastych. Test pomaga w testowaniu pod kątem zanieczyszczenia endotoksynami produktów farmaceutycznych, w tym preparatów na bazie nano.

W tym filmie demonstrujemy wysokoprzepustowy test do badania przesiewowego enzymów aktywnych węglowodanowo przy użyciu nierozpuszczalnych chromogennych substratów polimerowo-hydrożelowych. Enzym rozkłada te substraty do rozpuszczalnego kolorowego produktu, który można określić ilościowo, mierząc intensywność koloru produktu.

Ten film demonstruje test do badania enzymów skutecznych w degradacji złożonych polisacharydów w biomasie roślinnej przy użyciu nierozpuszczalnej biomasy chromogenicznej lub ICB. Enzymy hydrolizują ICB w celu uwolnienia rozpuszczalnych oligosacharydów związanych z barwnikiem, a aktywność enzymu ocenia się za pomocą analizy kolorymetrycznej produktu reakcji.

Ten film demonstruje metodę barwienia jądrowego w celu wykrycia cytotoksycznego wpływu mitokanu na wrażliwe na leki komórki nowotworowe i zdrowe warianty. Podwójne barwienie barwnikami wiążącymi DNA, takimi jak jodek propidyny i barwnik Hoechsta, zapewnia wyraźne rozróżnienie między martwymi i żywymi komórkami, pomagając w ten sposób ocenić cytotoksyczność leku.

W tym filmie przeprowadzamy test ruchliwości in vitro, aby przeanalizować interakcje aktyna-miozyna. Ślizgający się ruch włókien aktynowych na unieruchomionych cząsteczkach miozyny jest wizualizowany za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej.

W tym filmie przeprowadzamy test ruchliwości in vitro, aby przeanalizować interakcje aktyna-miozyna. Ślizgający się ruch włókien aktynowych na unieruchomionych cząsteczkach miozyny jest wizualizowany za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej.

Ten film demonstruje różnicowe promieniste działanie kapilarne testu ligandowego - techniki systematycznego, wysokoprzepustowego badania przesiewowego białek wiążących drugi przekaźnik nukleotydów wewnątrzkomórkowych. Technika ta pozwala na bezpośrednie wiązanie przekaźników z nadekspresyjnym białkiem docelowym w lizacie komórkowym - z pominięciem konieczności oczyszczania białka.

Ten film opisuje test degradacji dla nieprawidłowo sfałdowanych białek za pomocą leczenia cykloheksymidem wraz z frakcjonowaniem detergentem. Metoda ta pomaga w badaniu dynamiki nieprawidłowo sfałdowanych białek i odkrywaniu dogłębnych mechanizmów obrotu białkami.

Ten film opisuje test mikropłytek in vitro oparty na fluorescencji w celu zbadania kinetyki degradacji znakowanego fluorescencyjnie, nieprawidłowo sfałdowanego zmutowanego białka lucyferazy, ulegającego ekspresji w jądrach transfekowanych komórek ssaków. Test polega na traktowaniu komórek eksprymujących zmutowane białko fluorescencyjne za pomocą inhibitora translacji i inhibitora proteasomu w celu oceny degradacji nieprawidłowo sfałdowanego białka za pośrednictwem proteasomu.

Film demonstruje test lucyferazy używany do ilościowego oznaczania białek znakowanych lucyferazy. W teście wykorzystuje zmodyfikowany enzym lucyferazy składający się z dużego fragmentu, który wiąże się z małym fragmentem, który jest sprzężony z interesującym białkiem. Związane podjednostki tworzą aktywny enzym, który w obecności substratu uwalnia sygnał luminescencyjny. Sygnał ten jest następnie oznaczany ilościowo za pomocą luminometru.

Ten film demonstruje test oparty na obrazowaniu in vivo, który pozwala określić spadek proteostazy spowodowany starzeniem się. W teście wykorzystuje Caenorhabditis elegans eksprymujące białko fuzyjne poliglutaminy YFP w mięśniach ścian ciała w celu zmierzenia związanej z wiekiem agregacji poliglutaminy i indukcji proteotoksyczności, co prowadzi do paraliżu.

W tym filmie pokazujemy test jednorodności zbliżeniowej ze wzmocnioną luminescencją - test zbliżeniowy oparty na koralikach. Wykorzystuje kulki akceptora i dawcy o jednorodnej wielkości, unieruchomione dwoma białkami, które mają tendencję do oddziaływania w celu przesiewania potencjalnych małych cząsteczek hamujących interakcje białek.

Ten film demonstruje test do monitorowania zakwaszenia jelit u muszek Drosophila. Po spożyciu pokarmu uzupełnionego barwnikiem wskaźnikowym pH, zakwaszenie światła jelita powoduje zmianę koloru barwnika. Oględziny przewodu pokarmowego much w celu zbadania zmiany koloru dostarczają dowodów na zakwaszenie.

Ten film opisuje test oparty na czytniku płytek do pomiaru mitochondrialnego wychwytu wapnia w izolowanych mitochondriach. Test analizuje sygnał fluorescencyjny wrażliwego na wapń barwnika fluorescencyjnego w celu zbadania kinetyki mitochondrialnego wychwytu wapnia i przeciążenia wapniem.

Ten film opisuje metodę kolorymetryczną do ilościowego określania zawartości rozpuszczalnego białka w tkankach roślinnych. W metodzie wykorzystuje się barwnik Coomassie Brilliant Blue G-250, który oddziałuje z rozpuszczalnym białkiem, tworząc stabilny kompleks białko-barwnik o niebieskim kolorze, proporcjonalny do zawartości rozpuszczalnego białka w tkance.

Ten film opisuje metodę ilościowego oznaczania strawnych węglowodanów obecnych w tkankach roślinnych. Pomaga to zbierać dane z różnych tkanek roślinnych w celu badania ekologii żywieniowej, interakcji między roślinami a roślinożercami oraz dynamiki sieci pokarmowej.

W tym filmie pokazujemy test lucyferazy do ilościowego określenia wzrostu wewnątrzkomórkowego patogenu Toxoplasma gondii. Wykorzystując szczep Toxoplasma, który eksprymuje enzym lucyferazy po zakażeniu komórek gospodarza, aktywność lucyferazy jest wykrywana w zakażonej kulturze komórkowej w celu określenia pomyślnego rozmnażania pasożyta.

Wideo demonstruje test lucyferazy używany do określenia skuteczności chemicznego inhibitora przeciwpasożytniczego przeciwko wewnątrzkomórkowemu patogenowi Toxoplasma gondii. Badanie obejmuje pasożyty wykazujące ekspresję lucyferazy, które atakują komórki gospodarza w celu replikacji i przetrwania. Inhibitor chemiczny wiąże się z proteazami cysteinowymi pasożyta i hamuje replikację. Wykryta aktywność lucyferazy jest proporcjonalna do zmian w pofałdowaniu wzrostu pasożyta, decydując o...

Ten film demonstruje protokół in vitro do badania za pośrednictwem Msp1 usuwania błędnie zlokalizowanych białek TA zintegrowanych z dwuwarstwą lipidową liposomów. Białka Msp1 i TA są odtwarzane w liposomach, a zależna od ATP translokacja białek TA jest potwierdzana poprzez oczyszczanie powinowactwa.

W tym filmie opisujemy prostą i solidną metodę określania potencjału cytotoksycznego leku trypanobójczego przeciwko pasożytowi, Trypanosoma cruzi, wyrażającemu enzym β-galaktozydazy. β-galaktozydaza służy jako wskaźnik lizy komórek, a jej aktywność może być wykorzystana do oceny efektów działania leku.

W tym filmie demonstrujemy test, który bada mechanizmy uwalniania monoamin z neuronów metabolicznie aktywnych wycinków mózgu szczura ex vivo, podczas leczenia testowymi lekami. Test pokazuje, że leki neurostymulujące indukują uwalnianie monoamin przez komórkowe transportery monoamin, podczas gdy wysokie stężenie KCl indukuje pęcherzykowe uwalnianie monoamin za pośrednictwem egzocytozy pęcherzyków synaptycznych.

Ten film opisuje metodę in vivo do badania potencjału ochronnego neuroprotekcyjnych związków testowych w zmniejszaniu agregacji polyQ w komórkach mięśniowych ścian ciała nicieni i łagodzeniu proteotoksyczności związanej z agregacją.

W tym filmie opisujemy metodę oceny neuroprotekcyjnego wpływu badanego związku, astragananu, na przeżycie neuronów u Caenorhabditis elegans z powodu neurotoksyczności za pośrednictwem polyQ. W teście wykorzystuje się Caenorhabditis elegans wykazujące ekspresję nieprawidłowo ekspandowanych powtórzeń polyQ połączonych z GFP w ich neuronach ASH w celu pomiaru przeżycia neuronów po leczeniu badanym związkiem.

Ten film opisuje test unikania osmotycznego w celu zbadania zachowania chemounikania w modelu transgenicznego robaka. Zachowanie unikania jest testowane na płytce w obecności bariery o wysokiej zawartości osmotycznej i chemoatraktantu. Robaki z funkcjonalną utratą neuronów zostają przyciągnięte przez chemoatraktant, przekraczają barierę wysokoosmotyczną i zostają sparaliżowane w strefie pułapki z powodu roztworu znieczulającego.

Ten film opisuje test kolorymetryczny do pomiaru mleczanu w lizatach komórkowych przy użyciu enzymu dehydrogenazy mleczanowej. Enzym ten przekształca mleczan w pirogronian, wraz z konwersją NAD do NADH, który reaguje z barwnikami tetrazolowymi i daje kolorowy produkt, który można zmierzyć spektrofotometrycznie w celu ilościowego określenia mleczanu.

Ten film opisuje test kolorymetryczny do ilościowego pomiaru pirogronianu we frakcjach komórkowych Caenorhabditis elegans. Wykorzystując nadtlenek wodoru wytwarzany w reakcji enzymatycznej oksydazy pirogronianowej z pirogronianem komórkowym, barwnik chromogenny jest utleniany w celu wytworzenia kolorowego produktu, mierzonego za pomocą kolorymetrii w celu określenia stężenia pirogronianu.

Ten film opisuje test spektrofotometryczny do szacowania aktywności syntazy glikogenu. Metoda polega na zmniejszaniu się absorbancji NADH w czasie i wskazuje na aktywność syntazy glikogenu.

W tym filmie opisujemy jakościowy test spektrofotometryczny, aby określić zakres rozgałęzień w próbce glikogenu o niescharakteryzowanej strukturze. Porównanie maksimów absorbancji próbki niescharakteryzowanej z maksimum polisacharydów o znanych strukturach rozgałęzionych wskazuje na obecność rozgałęzień w próbce niescharakteryzowanej.

Ten film demonstruje test substancji reaktywnych kwasu tiobarbiturowego (TBARS) do oceny stresu oksydacyjnego w próbkach biologicznych.

Ten film demonstruje test komplementacji rozszczepionej lucyferazy w celu wykrycia interakcji białko-białko. W tym teście interesujące białka są oznaczane do małych i dużych fragmentów enzymu lucyferazy. Kiedy białka wchodzą w interakcję, duże i małe fragmenty łączą się, tworząc aktywny kompleks enzymatyczny, który w obecności określonego substratu uwalnia jasną luminescencję, którą można zmierzyć.

Ten film przedstawia technikę pobierania próbki gruntu do analizy właściwości hydraulicznych. Obszar pobierania próbek jest oczyszczany, a górna skorupa jest opróżniana. Pierścień do pobierania próbek jest następnie umieszczany w glebie w celu pobrania próbki. Pierścień z próbką jest następnie czyszczony, znakowany, pakowany i przenoszony w nienaruszonym stanie do analizy.

Źródło:Léa Rubira1, Hélène Sturer1, Louise Combette1, Sandra Santini1, Stéphane Renaud1, Cyril Fersing1,21Zakład medycyny nuklearnej, Institut régional du Cancer de Montpellier (ICM), Univ Montpellier, 2IBMM, Univ Montpellier, CNRS, ENSCMFilm ten przedstawia bezpieczną, kontrolowaną infuzję radiofarmaceutyku przy użyciu pompy perystaltycznej z dwuliniowym systemem kasetowym. Konfiguracja obejmuje podłączenie przewodów soli fizjologicznej i infuzyjnej, ustawienie osłoniętej fiolki i...

Source:Anthony J. Yosick1,2, Christine Massie1, Emma Knapp2, Hani A. Awad1,2,31Department of Biomedical Engineering, University of Rochester, US2Center for Musculoskeletal Research, Department of Orthopedics, University of Rochester Medical Center, USA3Department of Orthopedics, University of Rochester Medical Center, USAThe video demonstrates fall-related wrist fractures using human cadaver forearms with varying bone densities. Specimens are standardized by removing upper soft tissue,...

W tym filmie demonstrujemy test do wizualizacji i ilościowego określenia poboru komórkowego przez pęcherzyki zewnątrzkomórkowe lub EV. Test ten wykorzystuje obrazowanie fluorescencyjne 3D za pomocą mikroskopu konfokalnego i pozwala na odróżnienie zinternalizowanych EV od tych przyklejonych do powierzchni komórki.

Ten film opisuje test inwazji przy użyciu trzykomorowej matrycy opartej na impedancji elektrycznej. Technika ta mierzy potencjał inwazyjny komórek nowotworowych pod wpływem rozpuszczalnych czynników wydzielanych przez rezydentne komórki zrębu w mikrośrodowiskach guza.

W tym filmie demonstrujemy test ochrony enzymatycznej in vitro oparty na lizostafinach, aby określić ilościowo internalizację Staphylococcus aureus w komórkach A549. Test pomaga w badaniach jakościowych, ilościowych i charakteryzacyjnych wewnątrzkomórkowego obciążenia bakteryjnego w komórkach gospodarza.

W tym filmie opisujemy test resorpcji osteoklastycznej in vitro na płytkach hodowlanych pokrytych fosforanem wapnia, hodowanych z ludzkimi osteoklastami pochodzącymi z komórek jednojądrzastych krwi obwodowej. Osteoklasty tworzą charakterystyczny pierścień aktynowy na pokrytej fosforanem wapnia matrycy płytki hodowli komórkowej i degradują macierz w regionie pierścienia aktynowego, uwalniając jony wapnia i fosforanu, co powoduje powstawanie wyraźnych wgłębień resorpcyjnych w zdegradowanej...

W tym filmie opisujemy test separacji faz, w którym wewnątrzkomórkowe białka zawierające wewnętrznie nieuporządkowane regiony połączone z światłoczułą domeną oligomeryzacji są indukowane przez ekspozycję na niebieskie światło, aby same się asocjować w pozbawione błony płynne kondensaty.

Ten film przedstawia zmodyfikowany test oparty na kulkach mikronośnika, obejmujący perycyty w celu zbadania kiełkowania śródbłonka we wczesnych stadiach angiogenezy. Test zapewnia eksperymentalny model in vitro w celu zrozumienia molekularnych mechanizmów angiogenezy i wpływu terapii antyangiogenetycznej.

Ten film opisuje test in vitro mający na celu określenie hemolizy lub lizy czerwonych krwinek w ludzkiej próbce wywołanej jonoforem wapnia. Test mierzy procent hemolizy poprzez ilościowe określenie hemoglobiny uwalnianej z pękniętych erytrocytów.

W tym filmie pokazujemy test wiązania Aneksyny V do pomiaru stopnia eryptozy, zaprogramowanej śmierci komórki erytrocytów, za pomocą barwienia fluorescencyjnego Aneksyny V. Erytrocyty apoptotyczne wykazują translokację fosfatydyloseryny z wewnętrznej do zewnętrznej płatki błony komórkowej, powodując wiązanie się znakowanej fluoroforem aneksyny V z translokowaną fosfatydyloseryną, emitując w ten sposób sygnał fluorescencyjny.

Ten film demonstruje technikę in vitro do oceny biodostępności żelaza w złożonych źródłach żywności. Technika ta łączy symulację trawienia człowieka wraz z wychwytem żelaza przez zróżnicowane komórki Caco-2. Wewnątrzkomórkowe tworzenie ferrytyny działa jako marker komórkowego wychwytu żelaza.

Ten film demonstruje test in vitro do pośredniego pomiaru wewnątrzkomórkowego wychwytu glukozy. Test wykorzystuje znakowany fluorescencyjnie analog glukozy w celu ustalenia korelacji między zewnątrzkomórkowym zubożeniem glukozy a wewnątrzkomórkowym wychwytem glukozy.

W tym filmie demonstrujemy technikę ex vivo do pomiaru wyczerpania zewnątrzkomórkowego analogu glukozy w pobranych narządach myszy. Polega na inkubacji tkanki myszy w roztworze zawierającym znakowaną fluorescencyjnie deoksyglukozę, która jest pobierana przez komórki. Wychwyt analogu glukozy można pośrednio określić, mierząc fluorescencję inkubowanej pożywki.

Ten film opisuje pomiar skurczu komórek mięśni gładkich aorty (SMC) za pomocą wykrywania impedancji elektrycznej komórki-substratu (ECIS). ECIS mierzy lokomocję komórek i jest wiarygodną metodą pomiaru skurczów.

W tym filmie opisujemy metodę in vitro do oceny potencjału alergicznego antygenu do wywołania degranulacji bazofilów. β-heksosaminidaza jest używana jako wskaźnik uwalniania chemicznego mediatora, a aktywność enzymatyczna β-heksosaminidazy jest mierzona za pomocą substratu fluorogenicznego.

W tym filmie demonstrujemy szybki, jednorazowy test do oceny żywotności komórek w organoidach pochodzących od pacjenta po leczeniu czynnikiem testowym wykorzystującym wewnątrzkomórkowe poziomy ATP jako marker komórkowej aktywności metabolicznej. Wewnątrzkomórkowe poziomy ATP mierzy się za pomocą reakcji lucyferazy/lucyferyny, gdzie natężenie emitowanego światła wskazuje na żywotność komórki, a co za tym idzie, na siłę hamującą wzrost badanego czynnika.

Ten film opisuje technikę wizualizacji stresu oksydacyjnego w hodowanych organoidach. Praca ta pomaga w zrozumieniu poziomu stresu oksydacyjnego spowodowanego akumulacją ROS w różnych typach komórek obecnych w organoidzie po leczeniu różnymi modulatorami ROS.

Ten film demonstruje test cytometrii przepływowej do ilościowego określenia poziomów ROS w organoidach jelitowych 3D uzyskanych od transgenicznych myszy wykazujących ekspresję GFP. Metoda ta zapewnia eksperymentalny model in vitro do zbadania skuteczności badanych związków w produkcji ROS.

W tym filmie pokazujemy metodę oceny wpływu osmolitów na powstawanie trwałych bakterii. Komórki bakteryjne są najpierw wystawiane na działanie osmolitów w celu wywołania stresu osmotycznego, wywołując tworzenie się uporczywych bakterii, a następnie leczone antybiotykami w celu wyliczenia przetrwałych.

Ten film demonstruje metodę opartą na mikroskopii fluorescencyjnej do badania konkurencji bakterii na poziomie pojedynczej komórki. Metoda ta dostarcza informacji na temat struktury i funkcji społeczności bakteryjnych.

Ten film opisuje test płytki wirusowej zakaźnego wirusa opryszczki pospolitej lub HSV. Rozcieńczone cząsteczki wirusa są inokulowane do monowarstwy komórek nabłonka. Podczas inkubacji wirus tworzy blaszki i jest liczony wizualnie w celu określenia miana wirusa zakaźnego.

W tym filmie test TUNEL jest wykonywany w celu wykrycia obecności komórek apoptotycznych w próbce. Badanie polega na użyciu specjalnej polimerazy DNA - końcowej deoksynukleotydylotransferazy - która katalizuje dodawanie znakowanych dUTP do końca 3' fragmentowanego DNA, który można obserwować i identyfikować pod mikroskopem fluorescencyjnym.

Ten film opisuje test luminescencyjny in vitro kaspazy-3/7 do ilościowego określenia śmierci komórki lub apoptozy. Test mierzy luminescencję wytwarzaną po rozszczepieniu kaspazy-3/7 proluminescencyjnego substratu DEVD. Generowana luminescencja jest proporcjonalna do aktywności kaspazy-3/7.

Ten film demonstruje technikę barwienia immunologicznego, aby uwidocznić pochłanianie komórek apoptotycznych w homogenizowanych komórkach embrionalnych Drosophila melanogaster. Metoda ta zapewnia wgląd w fizjologię komórkową poprzez określenie zakresu apoptotycznego pochłaniania komórek.

W tym filmie demonstrujemy test efferocytozy do badania klirensu komórek apoptotycznych za pomocą mikroskopii konfokalnej. Efferocytoza to wieloetapowy proces, w którym komórki apoptotyczne są pochłaniane przez fagocyty i degradowane w pęcherzykach zwanych efferosomami. Protokół ten zapewnia metodę wizualizacji zinternalizowanych i niezinternalizowanych części poszczególnych komórek apoptotycznych oraz ilościowego określenia efferocytozy.

W tym filmie pokazujemy, że w obecności inhibitora fosfodiestru, cykl komórkowy oocytów zostaje zatrzymany w profazie-I, podczas której transkrybowane mRNA są przechowywane w przypadku braku translacji. Po uwolnieniu inhibitora dojrzewanie oocytów zostaje wznowione, a komórki wchodzą w metafazę. Sygnał reporterowego mRNA połączonego z docelowym genem w metafazie-I wskazuje na aktywację maszynerii translacyjnej i ekspresji białka.

Ten film opisuje test fluorometryczny in vitro, który ma na celu ocenę wpływu preparatów sztucznych łez na komórkową aktywność metaboliczną komórek nabłonka rogówki przy użyciu roztworu niebieskiego Alamar na bazie resazuryny. Nietoksyczny preparat utrzymuje komórki w zdrowym, metabolicznie aktywnym stanie, ułatwiając redukcję rezazuryny do wysoce fluorescencyjnej rezorufiny.

Ten film opisuje test oparty na obrazowaniu opartym na mikroskopii konfokalnej, mierzący pobieranie wapnia przez mitochondria w hodowanych komórkach. Test wykorzystuje wrażliwy na wapń barwnik fluorescencyjny Rhod-2/AM do pomiaru mitochondrialnego wapnia w permeabilizowanych komórkach hodowlanych.

Ten film omawia test wycieku fluorescencji w celu zbadania interakcji peptydów penetrujących komórki z błonami komórkowymi za pomocą mimiki błony komórkowej - dużych pęcherzyków jednopłytkowych lub LUV, otoczonych barwnikiem fluorescencyjnym i gaszącym.

Ten film demonstruje technikę oceny zwapnienia komórek śródmiąższowych zastawki aortalnej in vitro. Test pomaga określić ilościowo stężenie wapnia za pomocą odczynnika arsenazo III, barwnika wrażliwego na wapń, który reaguje z jonami wapnia, tworząc fioletowy kompleks wapniowo-arsenazowy.

Ten film opisuje technikę rejestrowania aktywności padaczkowej wycinków organotypowych kory nosa i hipokampa ex vivo za pomocą elektrofizjologii lub ustawień EEG. Pomaga to w badaniu dynamiki i progresji epileptogenezy oraz w badaniach przesiewowych potencjalnych celów terapeutycznych w leczeniu padaczki.

Ten film opisuje bezkontaktowy test gojenia ran w kokulturze, aby ocenić zdolność migracyjną mysich mioblastów. Pomaga to zrozumieć komponenty wysyłania i odbierania sygnałów parakrynnych niekanonicznych interakcji sygnalizacyjnych Wnt in vitro.

Film demonstruje test komety do wykrywania uszkodzeń DNA po ekspozycji na szkodliwe czynniki. W warunkach zasadowych DNA rozwija się i denaturuje, a po elektroforezie nieuszkodzone i uszkodzone DNA migruje inaczej w żelu agarozowym, tworząc strukturę w kształcie komety. Wolno migrujące, nieuszkodzone DNA tworzy okrągłą głowę komety, podczas gdy szybko migrujące uszkodzone fragmenty DNA tworzą wydłużony warkocz komety.

Ten film demonstruje technikę in vitro do szacowania absorpcji aminokwasów przez komórki zrębu pochodzące ze szpiku kostnego. Transportery aminokwasów zależne od Na+ pośredniczą w wychwytywaniu aminokwasów znakowanych radioaktywnie wewnątrz komórek, a wychwyt komórkowy szacuje się poprzez pomiar radioaktywności.

W tym filmie pokazujemy proces monitorowania zdarzeń komórkowych w czasie rzeczywistym, w tym proliferację przylegających komórek, za pomocą testu impedancji komórkowej. W tym przypadku przylegające ogniwa działają jak izolatory, ograniczając przepływ prądu między elektrodami i zwiększając impedancję.

W tym filmie omawiamy korelację między CIT50 a mnogością infekcji wirusowych. Komórki zakażone wirusem wykazują działanie cytopatyczne, powodując ich śmierć i oderwanie od złotej mikroelektrody, co z kolei zmniejsza impedancję.

Ten film opisuje technikę opartą na impedancji komórkowej do badania kinetyki przetrwania wirusów wywołujących efekty cytopatyczne. Metoda mierzy impedancję elektryczną zakażonych wirusem przylegających komórek wstępnie potraktowanych solą fizjologiczną.

Ten film demonstruje rozwój modelu kiełkowania naczyniówki ex vivo do badania angiogenezy mikronaczyniowej oka. Test polega na hodowli eksplantatów oka myszy zawierających tkankę naczyniówki przyczepioną do twardówki i nabłonka barwnikowego siatkówki w określonych warunkach, które sprzyjają kiełkowaniu mikronaczyniówki przez naczyniówkę.

Ten film opisuje test reporterowy oparty na komórkach w celu określenia aktywności estrogenowej związków pochodzenia roślinnego. Związek o aktywności podobnej do estrogenu naśladuje jego wiązanie z receptorami estrogenowymi i napędza transkrypcję genów enzymu reporterowego. Enzym reporterowy generuje bioluminescencję w reakcji, co wskazuje na aktywność estrogenową związku.

Ten film opisuje czasowo-rozdzielczy transfer energii rezonansu Förstera lub test TR-FRET w celu określenia endogennej fosforylacji białek za pomocą fluoroforów donorowych i akceptorowych oznaczonych na przeciwciałach specyficznych dla badanego białka. Technika ta ma na celu pomiar fosforylacji badanych białek w lizatach komórkowych.

W tym filmie opisujemy metodę opartą na luminescencji, która pozwala ocenić neurotoksyczność związków małocząsteczkowych sprzyjających wzrostowi neurytów na żywotność neuronów pochodzących z hNPC. Test mierzy wewnątrzkomórkowy poziom ATP, wskaźnik żywotności komórek, w celu oceny neurotoksyczności po poddaniu działaniu badanego związku.

Ten film przedstawia technikę wielospektrometrii echograficznej o częstotliwości radiowej (REMS) do oceny gęstości mineralnej kości (BMD). Pacjent jest ustawiany na wznak, a żel ultradźwiękowy jest nakładany na szyjkę kości udowej, miejsce podatne na złamania w kości udowej. Następnie sonda emituje fale ultradźwiękowe, które odbijają się od tkanki kostnej z prędkością, na którą wpływa BMD. Sonda wychwytuje te odbite fale, umożliwiając ilościowe określenie BMD.

Ten film pokazuje przezskórne aspirację plemników najądrza od pacjenta z azoospermią, stanem charakteryzującym się brakiem plemników w nasieniu. Zabieg polega na dezynfekcji okolicy moszny, odessaniu płynu najądrza za pomocą strzykawki ze specjalistycznym roztworem hodowlanym i przetworzeniu pobranej próbki w celu wyizolowania żywotnych plemników. Przygotowane plemniki są następnie gotowe do wykorzystania w zaawansowanych procedurach leczenia niepłodności.

Źródło:Elettra Leo1, Luiza H.D. Cardoso1, Sabine Schmitt1, Erich Gnaiger11Instrumenty OroborosTen film wyjaśnia, w jaki sposób strumień tlenu jest wykorzystywany do oceny oddychania mitochondrialnego w żywych i przepuszczalnych komórkach ssaków. Demonstruje sekwencyjne zastosowanie digitoniny, substratów metabolicznych, ADP, rozprzęgacza i inhibitora w celu scharakteryzowania różnych stanów oddechowych. Uzyskany w ten sposób profil strumienia tlenu ujawnia funkcję mitochondriów i wydajność...

Ten film opisuje technikę testu immunologicznego wykorzystującą fluorescencyjne kulki magnetyczne lub mikrosfery w połączeniu z różnymi antygenami do jednoczesnego wykrywania różnych izotypów przeciwciał w próbce surowicy. Test jest pomocny w zrozumieniu serokonwersji podczas infekcji lub po szczepieniu.

W tym filmie pokazujemy test immunoprecypitacyjny, zwany testem wychwytywania VLP, w celu wyizolowania z próbki cząstek wirusopodobnych wyświetlających antygen lub VLP. Antygen wiąże się ze specyficznymi przeciwciałami związanymi z kulkami magnetycznymi, tworząc unieruchomiony kompleks antygen-przeciwciało, który jest następnie oddzielany i przechowywany do dalszej analizy.

Ten film demonstruje czułą technikę fosforylacji białek za pomocą testu ściągania pojedynczej cząsteczki. Funkcjonalizacja glikolu polietylenowego-biotyny i zastosowanie znakowanych przeciwciał zwiększa wykrywalność fosforylowanej tyrozyny ze swoistością.

Ten film demonstruje metodę in vitro do SUMOylacji białek substratowych przy użyciu sekwencyjnej kaskady enzymatycznej. Ponadto status SUMOylacji białka jest identyfikowany za pomocą techniki elektroforezy i immunoblottingu.

W tym filmie pokazujemy test oparty na systemie bioreporterowym HiBit-RBD do wykrywania przeciwciał neutralizujących SARS-CoV-2. System ten celuje w domenę RBD wirusa za pomocą bioluminescencyjnego systemu reporterowego zawierającego HiBiT połączony z domeną RBD.

W tym filmie demonstrujemy test kolorymetryczny in vitro do wykrywania obecności przeciwciał neutralizujących przeciwko wektorom rekombinowanego wirusa związanego z adenowirusem serotypu 6 (rAAV6) w próbkach surowicy owczej. Test wykorzystuje reakcję między AAV kodującym ludzki gen fosfatazy alkalicznej łożyska a jego substratem w celu wytworzenia nierozpuszczalnego fioletowego produktu.

Ten film demonstruje bardzo czuły test oparty na immunofluorescencji do wykrywania uszkodzeń oksydacyjnych wywołanych PM2.5 w sercach zarodków danio pręgowanego poprzez pomiar poziomów 8-OHdG i γH2AX, które wskazują odpowiednio na uszkodzenie DNA i pęknięcia dwuniciowego DNA.

Ten film demonstruje technikę oceny śmierci neuronów w wycinkach organotypowych kory nosowej i hipokampa. Śmierć neuronów następuje w wyniku ewoluujących napadów padaczkowych – przypominających padaczkę in vivo – i jest wykrywana poprzez podwójne barwienie martwych komórek za pomocą jodku propidyny i immunofluorescencji.

Ten film demonstruje wykrywanie chemicznie sprzężonych kompleksów przeciwciało-antygen za pomocą testu immunoenzymatycznego typu sandwich, czyli ELISA. Przechwycone przeciwciało wiąże się ze specyficznym epitopem antygenu koniugatu przeciwciało-antygen, który można później uwidocznić za pomocą przeciwciała drugorzędowego sprzężonego z enzymem.

W tym filmie demonstrujemy test immunofluorescencyjny oparty na EGFP, aby zidentyfikować skuteczność docelowych białek na rozrost neurytów pierwotnych neuronów korowych. Pierwotne neurony są transfekowane białkiem fluorescencyjnym, EGFP i białkiem docelowym, a następnie przeprowadza się test immunologiczny w celu zbadania wpływu białka docelowego na wzrost neurytów.

W tym filmie demonstrujemy test immunologiczny elektrochemiluminescencji do ilościowego oznaczania docelowych poziomów białka w różnych próbkach. Test ten opiera się na luminescencji wytwarzanej w reakcji elektrochemicznej. Natężenie emitowanego światła jest proporcjonalne do ilości białka docelowego w próbce.

Film opisuje przygotowanie próbki tkanki do obrazowania cytometrii masowej. Tkanka jest najpierw przetwarzana w celu zdemaskowania epitopów antygenu, przepuszczalności komórek i zablokowania niespecyficznych miejsc wiązania przeciwciał. Następnie tkanka jest inkubowana z koktajlem przeciwciał sprzężonych z metalem i barwieniem jądrowym. Na koniec próbka tkanki poddanej działaniu środka jest obrazowana za pomocą skanera optycznego.

Ten film przedstawia przygotowanie wysokiej jakości osocza bogatopłytkowego (PRP) poprzez badanie przesiewowe liczby płytek krwi, pobieranie i odwirowywanie krwi oraz izolowanie płytek krwi. Ten PRP jest stosowany w zastosowaniach terapeutycznych do regeneracji i gojenia tkanek.