Artykuł metodologiczny

Izolacja i charakterystyka egzosomów pochodzących od komórek macierzystych z tkanki łącznej zęba w różnych przebiegach komórkowych

DOI:

10.3791/70977

⸱

10 kwietnia 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Savaid Stomatology School, Hangzhou Medical College, 2Engineering Laboratory for Biomaterials and Tissue Regeneration, Ningbo Stomatology Hospital, 3Ningbo Savaid Stomatology and Otolaryngology Medical Institute, Ningbo ENT Hospital

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ten protokół opisuje standaryzowany przepływ pracy do izolowania i charakteryzowania egzosomów pochodzących od komórek macierzystych z tkanki zęba (DPSC) w różnych przebiegach, umożliwiający powtarzalną ocenę jakości egzosomów i ich aktywności funkcjonalnej w zastosowaniach regeneracyjnych.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Komórki macierzyste z rdzenia zęba (DPSC) stanowią dostępne i klinicznie istotne źródło komórek macierzystych mezenchymalnych, a pochodzące z nich egzosom wyodrębnionych prezentują się jako obiecujące bioaktywne wezykuły do zastosowań wolnych od komórek w inżynierii tkankowej i medycynie regeneracyjnej. Jednakże, powtarzalne i zstandaryzowane metody izolacji i funkcjonalnej walidacji egzosom pochodzących z DPSC pozostają ograniczone, szczególnie w odniesieniu do zmienności wprowadzanej podczas ekspansji komórek w różnych przebiegach. Tutaj opisujemy kompleksowy, zstandaryzowany, oparty na zestawie przepływ pracy do izolacji i czyszczenia egzosom z warunkowanego pośrednictwa DPSC, który jest zgodny z rutynową praktyką laboratoryjną. Ta metoda umożliwia spójne odzyskiwanie nieszkodzących wezykuł odpowiednich do morfologicznej, molekularnej i funkcjonalnej charakteryzacji przy użyciu powszechnie dostępnych technik. Tożsamość egzosom jest oceniana na podstawie morfologii, rozkładu wielkości i ekspresji markerów, podczas gdy aktywność biologiczna jest oceniane za pomocą zdefiniowanego in vitro testu przeciwzapalnego. Aby zbadać efekty związane z przebiegiem, egzosome pochodzące z różnych przebiegów DPSC są porównywane przy użyciu tego funkcjonalnego wyjścia, zapewniając praktyczną ramę dla oceny spójności podczas ekspansji komórek. Integrując izolację, czyszczenie, charakteryzację i walidację funkcjonalną w jednym przepływie pracy, ten protokół oferuje powtarzalne i skalowalne podejście do generowania funkcjonalnie zweryfikowanych egzosom pochodzących z DPSC dla badań nad materiałami bioaktywnymi i zastosowań regeneracyjnych.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ekzosome pochodzące od komórek mezenchymalnych służą jako kluczowe mediatory komunikacji międzykomórkowej i wykazują znaczący potencjał terapeutyczny w dziedzinie inżynierii tkankowej i medycyny regeneracyjnej. Ekzosome są wezykułami o średnicy 30–150 nm, zdolnymi do dostarczania bioaktywnych cząsteczek i regulacji różnych funkcji w komórkach odbiorców, takich jak proliferacja, różnicowanie i odpowiedź immunologiczna1,2. Wśród różnych źródeł komórek mezenchymalnych (MSC), komórki mezenchymalne z miazgi zębowej (DPSC) wzbudzają szczególne zainteresowanie ze względu na ich łatwość dostępu, mocną zdolność proliferacyjną, niskie ryzyko nowotworowe i minimalne zastrzeżenia etyczne3,4,5. Ekzosome pochodzące od DPSC (DPSC-Exos) zawierają zróżnicowaną kolekcję funkcjonalnego ładunku, w tym białka, mRNA i mikroRNA, co umożliwia im zachowanie wielu biologicznych właściwości komórek macierzystych. Poprzednie badania wykazały, że DPSC-Exos mogą promować angiogeneszę, naprawę neuronów, regenerację kości i reakcje przeciwzapalne. Poza ich rolą w inżynierii tkankowej, ekzosome są coraz częściej uznane za ważne regulatory w onkogenezie i terapii raka, gdzie przyczyniają się do remodelowania mikrośrodowiska nowotworowego, odporności na leki i uniknięcia odpowiedzi immunologicznej6. Ekzosome pochodzące od MSC, w tym od DPSC, posiadają wrodzone zdolności homeowania do nowotworów i właściwości immunomodulacyjne, co czyni je obiecującymi następcami dla dostarczania leków przeciwnowotworowych lub jako bezkomórkowe środki immunoterapeutyczne. Omijając kilka ograniczeń związanych z terapiami komórkowymi, DPSC-Exos wyłoniły się jako obiecujący, bezpośredni składnik bioaktywny do zastosowań regeneracyjnych7,8,9,10,11,12.

Mimo tych zalet, przełożenie badań nad DPSC-Exo na powtarzalne zastosowanie eksperymentalne lub kliniczne pozostaje wyzwaniem. Głównym ograniczeniem jest brak ujednoliconego i standaryzowanego protokołu do izolacji i czyszczenia egzosomów. Obecnie stosowane podejścia obejmują ultrawirowanie13, ultrafiltrację, osadzanie, chromatografię wykluczającą rozmiar i immunoafinitarną izolację14,15. Wśród tych metod, osadzanie oparte na polimerach oferuje praktyczne zalety, w tym wysoką wydajność, kompatybilność z szerokim zakresem objętości próbek oraz prostotę operacyjną, co sprawia, że jest odpowiednie dla badań obejmujących duże liczby próbek lub wymagania skalowania16,17,18. Analizy porównawcze różnych metod izolacji, szczególnie jeśli chodzi o wydajność białka i stosunek cząsteczki do białka, zostały szeroko udokumentowane w literaturze19. Jednak wpływ liczby przelewów DPSC na cechy i aktywność biologiczną pochodzących egzosomów nie został wystarczająco uwzględniony, co stanowi istotną lukę w standaryzacji i kontroli jakości produkcji DPSC-Exo.

Aby przeciwdziałać tym ograniczeniom technicznym, niniejsze badanie przedstawia standaryzowany, zestawowy protokół do izolacji i czyszczenia egzosomów z pośredniego medium DPSC. Oprócz fizycznej i molekularnej charakterystyki, protokół obejmuje funkcjonalny test do oceny działania przeciwzapalnego egzosomów pochodzących z różnych przelewów DPSC, umożliwiając porównawczą ocenę spójności w zależności od przelewów w jakości i funkcji egzosomów. Proces prac jest zaprojektowany z myślą o bezpośredniej implementacji w laboratoriach wyposażonych w standardowe kultury komórkowe i obiekty molekularnej biologii. Polega na komercyjnie dostępnych zestawach w celu zmniejszenia zmienności między eksperymentami i może być łatwo skalowany, aby sprostać różnym potrzebom eksperymentalnym. Aby zminimalizować zmienność między dawcami, DPSC są izolowany z pojedynczych zębów i rozwijane niezależnie, a nie łączone z wielu dawców. Ten protokół jest szczególnie przydatny dla badaczy dążących do wygenerowania funkcjonalnie zweryfikowanych egzosomów pochodzących od DPSC do zastosowań dółstrumienia, w tym gojenia ran, inżynierii tkankowej kości i badań immunomodulacyjnych, gdzie spójność między partiami jest istotna. Ogólnie rzecz biorąc, zapewnia praktyczną i standaryzowaną ramę do produkcji egzosomów pochodzących od DPSC do zastosowań w badaniach inżynierii tkankowej i medycyny regeneracyjnej.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Niniejsze badanie zostało przeprowadzone zgodnie z zasadami Deklaracji Helsińskiej i zatwierdzone przez komitety etyczne instytucjonalne. Tkanki zębowe ludzkiej miazgi zostały uzyskane z wyrzuconych trzecich zębów trzonowych lub przedtrzonowców zebranych w Szpitalu Stomatologicznym Ningbo zgodnie z instytucjonalnymi wytycznymi etycznymi (Numer protokołu. NBKQYY2025LS-04; data zatwierdzenia: 30 maja 2025). Tkanki skóry ludzkiej uzyskane zostały z wyrzuconych próbek napletka zebranych podczas rutynowych zabiegów obrzezania w Klinice Urologii w Afiliacjonowanym Szpitalu Ludowym Uniwersytetu Ningbo, zgodnie z instytucjonalnymi wytycznymi etycznymi (Numer protokołu. 2024104; data zatwierdzenia: 30 października 2024). Pisemną zgodę świadomą uzyskaono od wszystkich darczyńców lub ich pełnoletnich opiekunów przed pobraniem próbek.

1. Izolowanie ekzosomów pochodzących od komórek macierzystych z miazgi zębowej

  1. Izolowanie, hodowanie i identyfikacja komórek macierzystych z miazgi zębowej (DPSC)
    1. Zbieranie i transport próbek
      1. Zbierać całe ludzkie trzecie zęby trzonowe od darczyńców w wieku 18–25 lat lub przedtrzonowce od darczyńców w wieku 12–16 lat po wyciągnięciu ortodontycznym.
      2. Nawcześnie umieścić wyciągnięte zęby w wstępnie schłodzonej buforowanej soli fosforanowej (PBS) uzupełnionej o 100 U/mL penicyliny-G i 100 μg/mL streptomycyny.
      3. Transportować próbki do laboratorium w temperaturze 4 °C i przetwarzać w ciągu 6 godzin od wyciągnięcia.
    2. Ekspozycja miazgi zębowej i dysocjacja tkanki
      1. Zanurzić w 70% etanolu przez 30 s; przepłukać trzy razy 1x PBS zawierającym 3% P/S (po 30 s każda). Ostrożnie usunąć pozostałości dziąseł i tkanek okreszkowych z powierzchni zęba za pomocą sterylnych nożyczek lub skalpela.
      2. Owinąć ząb w sterylną gazę, a następnie ostrożnie pęknąć koronę za pomocą wysterylizowanego młotka, aby odsłonić komorę miazgi.
      3. Delikatnie oddzielić tkankę miazgi od kości dentyny, pokroić ją na małe fragmenty (mniej niż 1 mm3) za pomocą sterylnych ostrągów chirurgicznych.
      4. Przenieść fragmenty tkanki do 1,5 mL probówki do wirowania zawierającej roztwór trawienny składający się z 2,5 mg/mL Dispase II i 2,5 mg/mL kolagenazy typu I.
      5. Inkubować mieszaninę w inkubatorze 37 °C przez 30–45 min z delikatnym mieszaniem.
        UWAGA: Czas trawienia enzymatycznego określono na podstawie objętości i stopnia homogenizacji tkanki miazgi zębowej.
    3. Zatrzymanie trawienia enzymatycznego i pierwotne hodowanie komórek
      1. Zatrzymaj trawienie enzymatyczne, dodając równą objętość Dulbecco's Zmodyfikowanego Podstawowego Srebrowego Medium (DMEM) uzupełnionego o 10% płonnego surowicy wołowej (FBS).
      2. Wirować zawiesinę komórek w 200 × g przez 5 min, aby zmieścić komórki i fragmenty tkanek.
      3. Odrzucić nadstan i ponownie zawiesić osadu w 1 mL pełnego pożywki hodowlowej (α-MEM z 20% FBS, 100 U/mL penicyliny i 100 μg/mL streptomycyny).
      4. Zasiewać zawieszone komórki i eksplanty do 60-mm naczynia do hodowli i dodać pełne pożywki hodowlowe do końcowej objętości 5 mL.
      5. Inkubować komórki w 37 °C w zwiększonej wilgotności zawierającej 5% CO2.
    4. Utrzymanie i podhodowanie komórek
      1. Odświeżać pożywkę co 2–3 dni.
      2. Codziennie monitorować komórki.
        UWAGA: Pierwotne DPSC zazwyczaj migrują z eksplantów tkankowych i osiągają 80–90% konfluencji w ciągu 7–14 dni.
      3. Do podhodowania oddzielać komórki za pomocą 0,05% trypsyny i kwasu etylenodiaminotetraoctowego (EDTA), gdy osiągną 80–90% konfluencji.
        UWAGA: Trypsyna jest czynnikiem drażniącym. Należy nosić odpowiednie wyposażenie ochrony osobistej, w tym rękawice i okulary ochronne.
      4. Przesiewać komórki w stosunku 1:3 za pomocą pełnej pożywki hodowlowej (z 20% FBS).
      5. Zastosować DPSC w przesiadaniach 2, 4 i 6 do wszystkich dalszych badań izolacyjnych ekzosomów i funkcjonalnych.
    5. Charakteryzacja DPSC za pomocą cytometrii przepływowej
      1. Odłączyć DPSC w pożądanym przesiadaniu za pomocą 0,05% trypsyny-EDTA, zneutralizować pełną pożywką hodowlą i zebrać zawiesinę komórek.
      2. Wirować w 300 × g przez 5 min w temperaturze pokojowej i odrzucić nadstan. Ponownie zawiesić osadu komórek w PBS i zliczyć komórki. Wyrównać gęstość komórek do około 1 ×

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Identyfikacja i charakterystyka mezenchymalnych komórek macierzystych miazgi zęba
Pierwotne mezenchymalne komórki macierzyste miazgi zęba (DPSCs) wyizolowane zgodnie z opisanym protokołem wykazywały stabilny wzrost i typową morfologię mezenchymalną podczas ekspansji in vitro. Jak pokazano na Rysunku 1, DPSCs w pasażach 2, 4 i 6 stanowiły jednorodną populację wrzecionowatych komórek fibroblastopodobnych, bez wyraźnych różnic morfologicznych an...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Znormalizowany protokół opisany w niniejszym badaniu zapewnia powtarzalny szablon izolacji komórek macierzystych z tkanki zębowej (DPSC), produkcji eksosomów pochodzących z DPSC (DPSC-Exos) oraz weryfikacji funkcjonalnej tych wezykuł w wielu przepływach komórkowych. Omówienie poniżej podkreśla kluczowe kwestie proceduralne, strategie optymalizacji, ograniczenia metodologiczne oraz szersze znaczenie tego przepływu pracy dla badań nad medycyną regeneracyjną.

Nadrzędnością tego protokołu jest ryg...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają żadnych konkurencyjnych interesów finansowych do zadeklarowania.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ten projekt został sfinansowany przez Narodowe Fundusz Nauki Przyrodniczej Chin (Grant nr 82273554). Autorzy dziękują Laboratorium Inżynierii Biomateriałów i Regeneracji Tkankowej w Ningbo Stomatology Hospital za ciągłe wsparcie oraz obecnym i byłym członkom zespołu za cenne dyskusje. Autorzy wyrażają również wdzięczność dla Dr. Liliang Shen z Powiązanego Szpitala Ludowego Uniwersytetu Ningbo za jego hojne wsparcie i mocne poparcie w dostarczeniu próbek tkanki napletka.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
0.05% Trypsin-EDTA SolutionGibco25300054Ze względu na swoją trawiącośś trypsyna jest szeroko stosowana do dysocjacji komórek, rutynowego przeszczepu komórek i pierwotnej dysocjacji tkanek.
100 mm Cell and Tissue Culture DishBiofilTCD010100Powierzchniowo traktowana/Nie traktowana
Sterylizacja&Nie-pirogenna
Wolne od DNase/RNase
100 nm PS beadsThermo Fisher3100APrzed przeprowadzeniem eksperymentów analizy śledzenia nanocząstek (NTA) urządzenie musi zostać skalibrowane za pomocą standardu o dokładnie znanym rozmiarze cząstek (100 nm).
15-mL Bulk Conical Centrifuge TubeKIRGENKG2611Sterylne, wolne od RNase/Dnase i pirogenów
200-mesh Formvar-carbon-coated copper gridZhongjing Scientific InstrumentsAZH200Wspiera próbki egzosomów do obrazowania TEM. Powłoka Formvar-carbon zwiększa przyleganie próbki i przewodność, podczas gdy kratka 200-mesh zapewnia odpowiednią otwartą przestrzeń dla równomiernego rozłożenia cząstek i stabilnego obrazu.
37 °C IncubatorThermo Scientific51032877Inkubator CO2 37 stopni zapewnia idealne środowisko in vitro.
50-mL Bulk Conical Centrifuge TubeKIRGENKG2811Sterylne, wolne od RNase/Dnase i pirogenów
Anti-CD63 antibody [MX-49.129.5]Abcamab193349Anti-CD63 antibody [MX-49.129.5] (ab193349) is a mouse monoclonal antibody detecting CD63 in Western Blot, Flow Cytometry (Intra), Flow Cytometry, IHC-P, ICC/IF. Suitable for Human.
Anti-TSG101 antibody [EPR7130(B)]Abcamab125011Anti-TSG101 antibody [EPR7130(B)] (ab125011) is a rabbit monoclonal antibody detecting TSG101 in Western Blot, Flow Cytometry (Intra), Flow Cytometry, IHC-P, ICC/IF. Suitable for Human, Mouse, Rat.
Automated cell counterCountstarIC1000Automatyczny licznik komórek do szybkiego, precyzyjnego liczenia komórek
BCA Protein Assay KitBeyotimeP0012Mają dobry liniowy związek w zakresie stężeń 50 - 2000 μg/ml.
Benchtop CentrifugeBIORIDGETD5Centryfuga stołowa do szybkiej i wydajnej separacji próbek w warunkach laboratoryjnych
Biological safety cabinetThermo Scientific1379Biological Safety Cabinet is a sterile containment device that protects operators, samples, and environments from biohazards by filtering airborne pathogens and preventing cross-contamination during microbiological work.
Cell Culture Plate,12-WellEppendorf0030721110Obrobieńczy,z pokrywką,dno płaskie
Sterylizacja,wolne od wykrywalnych pirogenów,RNase & DNase,ludzkiej & bakt.DNA
Niecytotoksyczne
Cell Culture Plate,96-WellNEST 701001 0714BObrobieńczy,Polistyren,Nie-pirogenna,Sterylizowana
CellsavingNCMC40100Bez surowicy, wolny od białka zwierzęcego
Środek do zamrażania komórek
Collagenase, Type I, powderGibco17100017Kollagenaza to proteaza, która rozrywa wiązanie między neutralną aminokwasem (X) a glicyną w sekwencji Pro-X-Gly-Pro, która występuje z dużą częstotliwością w kolagenie.
Dispase II, powderGibco17105041Dispase II (neutralna proteaza) to endopeptydaza aminowa, która hydrolizuje N-końcowe wiązania peptydowe niepolarnych reszta aminokwasowych.
Dulbecco's Modified Eagle MediumGibco C11995500BT[+]4.5g/L D-Glukosa
[+]L-Glutamina
[+]110mg/L Sodowego Pirogronianu
Evo M-MLV Reverse Transcription KitAGAG11707Dedykowany reagent do odwrotnej transkrypcji dla Real Time RT-PCR. Wykorzystuje odwrotną transkryptazę Evo M-MLV o silnej zdolności do ekstensji, umożliwiając wydajną syntezę cDNA w krótkim czasie.
Exosome Concentration SolutionUmibioUR52111Ekstrakcja egzosomów z nadstanu komórkowego
Exosome Depleted Fetal Bovine SerumUmibioUR50202Surowica łożyskowa wołowa wolna od egzosomów została uzyskana przez filtrowanie sterylnie zebranej zdrowej surowicy łożyskowej wołowej, i ≥99% endogennych egzosomów w surowicy łożyskowej wołowej zostało usuniętych. Miała taką samą szybkość wzrostu komórek i morfologię jak surowica łożyskowa wołowa przed przetworzeniem.
Fetal Bovine Serum, qualified, AustraliaGibco10099141Poziom hemoglobiny: ≤30 mg/dL (poziomy rutynowo ≤25 mg/dL)
Human-H36B4Sangon BiotechSB002Forward: 5'-GCAATGTTGCCAGTGTCTGT-3'; Reverse: 5'-GCCTTGACCTTTTCAGCAAG-3'
Human-IL-23ASangon BiotechSB002Forward: 5'-GAAGAGGGAGATGAAGAGAC-3'; Reverse: 5'-TATCCGATCCTAGCAGCTTC-3'
Inverted Biological MicroscopeLeicaDMI1Możesz bezpośrednio obserwować żywe komórki lub tkanki przylegające do ścianek pojemników, takich jak kolby

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lotfy, A., AboQuella, N. M., Wang, H. Mesenchymal stromal/stem cell (MSC)-derived exosomes in clinical trials. Stem Cell Res Ther. 14 (1), 66 (2023).
  2. Shan, Z., Su, X., Liu, L., Duan, S. Liquid biopsy based on EV biomarkers: a new frontier for early diagnosis and prognosis assessment of cancer at ESMO 2024. Nano TransMed. 4, 100084 (2025).
  3. Gronthos, S., et al. Stem cell properties of human dental pulp stem cells. J Dent Res. 81 (8), 531-535 (2002).
  4. Pineda, J. R., et al. In vitro preparation of human Dental Pulp Stem Cell grafts with biodegradable polymer scaffolds for nerve tissue engineering. Methods Cell Biol. 170, 147-167 (2022).
  5. Chansaenroj, J., et al. Potential of Dental Pulp Stem Cell Exosomes: Unveiling miRNA-Driven Regenerative Mechanisms. Int Dent J. 75 (2), 415-425 (2025).
  6. Dhar, R., Subramaniyan, V. Exosomes: a next-generation cancer theranostics. Nano TransMed. , 100096 (2025).
  7. Wang, Y., et al. Therapeutic effect of mesenchymal stem cells and their derived exosomes in diseases. Mol Biomed. 6 (1), 34 (2025).
  8. Tan, F., et al. Clinical applications of stem cell-derived exosomes. Signal Transduction Targeted Ther. 9, 17 (2024).
  9. Li, L., Ge, J. Exosome‑derived lncRNA‑Ankrd26 promotes dental pulp restoration by regulating miR‑150‑TLR4 signaling. Mol Med Rep. 25 (5), 152 (2022).
  10. Lin, T., et al. Inhibition of chondrocyte apoptosis in a rat model of osteoarthritis by exosomes derived from miR‑140‑5p‑overexpressing human dental pulp stem cells. Int J Mol Med. 47 (3), 7 (2021).
  11. Liang, X., et al. Dental pulp mesenchymal stem cell-derived exosomes inhibit neuroinflammation and microglial pyroptosis in subarachnoid hemorrhage via the miRNA-197-3p/FOXO3 axis. J Nanobiotechnology. 22 (1), 426 (2024).
  12. Lin, T. Y., et al. 2,3,5,4’-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside-stimulated dental pulp stem cells-derived exosomes for wound healing and bone regeneration. J Dent Sci. 20 (1), 154-163 (2025).
  13. Livshits, M. A., et al. Isolation of exosomes by differential centrifugation: Theoretical analysis of a commonly used protocol. Sci Rep. 5, 17319 (2015).
  14. Patel, G. K., et al. Comparative analysis of exosome isolation methods using culture supernatant for optimum yield, purity and downstream applications. Sci Rep. 9 (1), 5335 (2019).
  15. Li, P., et al. Progress in Exosome Isolation Techniques. Theranostics. 7 (3), 789-804 (2017).
  16. Ludwig, A. K., et al. Precipitation with polyethylene glycol followed by washing and pelleting by ultracentrifugation enriches extracellular vesicles from tissue culture supernatants in small and large scales. J Extracell Vesicles. 7 (1), 1528109 (2018).
  17. Veerman, R. E., et al. Molecular evaluation of five different isolation methods for extracellular vesicles reveals different clinical applicability and subcellular origin. J Extracell Vesicles. 10 (9), e12128 (2021).
  18. Lobb, R. J., et al. Optimized exosome isolation protocol for cell culture supernatant and human plasma. J Extracell Vesicles. 4, 27031 (2015).
  19. Gao, M., et al. Comparison of Yield, Purity, and Functional Properties of Large-Volume Exosome Isolation Using Ultrafiltration and Polymer-Based Precipitation. Plast Reconstr Surg. 149 (3), 638-649 (2022).
  20. Hilkens, P., et al. Effect of isolation methodology on stem cell properties and multilineage differentiation potential of human dental pulp stem cells. Cell Tissue Res. 353 (1), 65-78 (2013).
  21. Noda, S., et al. Effect of cell culture density on dental pulp-derived mesenchymal stem cells with reference to osteogenic differentiation. Sci Rep. 9 (1), 5430 (2019).
  22. Ahmad, P., et al. Isolation methods of exosomes derived from dental stem cells. Int J Oral Sci. 17 (1), 50 (2025).
  23. Chen, J., et al. Review on strategies and technologies for exosome isolation and purification. Front Bioeng Biotechnol. 9, 811971 (2021).
  24. Coumans, F. A. W., et al. Methodological guidelines to study extracellular vesicles. Circ Res. 120 (10), 1632-1648 (2017).
  25. Welsh, J. A., et al. Minimal information for studies of extracellular vesicles (MISEV2023): From basic to advanced approaches. J Extracell Vesicles. 13 (2), e12404 (2024).
  26. Yakubovich, E. I., Polischouk, A. G., Evtushenko, V. I. Principles and problems of exosome isolation from biological fluids. Biochem (Mosc) Suppl, Membr Cell Biol. 16 (2), 115-126 (2022).
  27. Li, Y., et al. Dental stem cell-derived extracellular vesicles as promising therapeutic agents in the treatment of diseases. Int J Oral Sci. 14, 2 (2022).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Medyczne kom rki macierzyste miazgi z baegzosomy DPSCizolacja egzosom woczyszczanie egzosom wcharakterystyka egzosom wmezenchymalne kom rki macierzysterozk ad wielko ciekspresja marker wtest przeciwzapalny

Powiązane artykuły