8 kwietnia 2015
Ten protokół opisuje zmodyfikowaną tablicę do dołków, która jest zestawem testów behawioralnych, który zawiera cechy otwartego pola i tradycyjnej tablicy do dołków. Układ ten umożliwia analizę różnicową nieuwarunkowanych zachowań małych ssaków laboratoryjnych, a także analizę zdolności poznawczych.
Ogólnym celem poniższych eksperymentów jest zmierzenie bezwarunkowego zachowania małych ssaków laboratoryjnych i analiza ich zdolności poznawczych. Osiąga się to poprzez umieszczenie zwierząt w zmodyfikowanej tablicy do otworów, aby obserwować i oceniać ich bezwarunkowe zachowanie z obecnością lub bez obecności ich kolegów z klatki. Dodatkowo, nowy i znany przedmiot lub granulka żywności może zostać umieszczona w aparacie przed badaniem, co można wykorzystać do pomiaru rozpoznawania obiektów lub hamowania przyjmowania pokarmu.
Trzecim zastosowaniem tej metody jest umieszczenie zwierzęcia w poznawczej wersji zmodyfikowanej całej planszy, w której nagroda jest kolejkowana z kontrastowym kolorowym identyfikatorem W celu zmierzenia zdolności poznawczych osoby badanej, wyniki pokazują spektrum bezwarunkowych zachowań. Ponieważ metoda łączy wiele wymiarów behawioralnych w jednym paradygmacie, który zawiera cechy tradycyjnej tablicy z otworami i testu w otwartym polu, główną zaletą tej techniki jest to, że pokonuje wady baterii testowej poprzez zmniejszenie liczby wykorzystywanych zwierząt, obejście możliwych efektów kolejności testów oraz zmniejszenie efektu czasu i kosztów. Badania powinny być przeprowadzane w zwykłym pomieszczeniu w pomieszczeniu w fazie ciemnej, ponieważ najbardziej aktywna faza zwierzęcia na potrzeby niniejszego badania wideo jest przeprowadzana w warunkach jasnego oświetlenia.
Testy behawioralne powinny być przeprowadzane na zwierzętach, które zostały przyzwyczajone do swojego środowiska i obchodzenia się z nimi przez eksperymentatora. Umieść płytkę zawierającą cylindry na środku pudełka eksperymentalnego. Następnie umieść światło sceniczne nad tablicą, aby stworzyć kontrast w natężeniu światła między tablicą a pudełkiem i zwiększyć awersyjny charakter planszy.
Na początek umieść znajomy przedmiot w aparacie w odległości dwóch centymetrów od nowego obiektu w rogu naprzeciwko punktu początkowego. Następnie wyjmij zwierzę przeznaczone do badania z klatki domowej i umieść je przodem do ściany w określonym rogu aparatu. Pozwól zwierzęciu swobodnie eksplorować przez około pięć minut.
Poproś doświadczonego obserwatora o ocenę parametrów behawioralnych za pomocą oprogramowania do oceny behawioralnej. Użyj parametrów wymienionych w tej tabeli, a także zmierz czas, w którym zwierzę zbliża się do nowego i znajomego przedmiotu lub nowego i znajomego produktu spożywczego. Po każdej próbie należy czyścić aparat wodą z kranu i ręcznikiem papierowym.
Aby uniknąć stronniczości opartej na sygnałach węchowych, umieść członków grupy w komorze grupowej na 10 do 30 minut przed badaniem zwierzęcia doświadczalnego, aby umożliwić zamieszkanie. Następnie umieść zwierzę doświadczalne w komorze testowej i pozwól mu swobodnie eksplorować zmodyfikowaną całą planszę przez pięć minut lub tak długo, jak wymaga tego twój własny protokół. Ponownie, poproś doświadczonego obserwatora o ocenę parametrów behawioralnych na żywo za pomocą oprogramowania do oceny behawioralnej, używając parametrów wymienionych w tabeli pierwszej, tak jak poprzednio.
Przed rozpoczęciem tego eksperymentu zapoznaj zwierzęta z bardzo smaczną nagrodą. Tutaj używany jest kawałek migdała. Oferuj nagrodę pęsetą w klatce domowej raz dziennie przez dwa kolejne dni przed eksperymentem, włóż przegrodę, aby zmniejszyć rozmiar pudełka do 50 na 50 centymetrów.
Do testowania, myszy, umieść mniejszą tablicę na środku pudełka. Ten schemat przedstawia konfigurację zmodyfikowanej tablicy otworów. Następnie zapach, wszystkie 10 cylindrów o smaku, który przyciąga zwierzęta, taki jak wanilia i przynęta, wszystkie cylindry z nagrodą umieszczone pod siatką, aby nie można było jej usunąć.
Butle Q3 z kolorowym pierścieniem, który kontrastuje z PVC i przynętą na te butle z wyjmowaną nagrodą. Ponownie umieść zwierzę w tym samym rogu aparatu i poproś doświadczonego obserwatora o wynik na żywo. Parametry behawioralne za pomocą oprogramowania do oceny behawioralnej.
Zmierz parametry wymienione w tabeli drugiej oprócz tych poprzednio pokazanych w tabeli pierwszej, z wyjątkiem parametrów związanych z rozpoznawaniem obiektów lub hamowaniem przyjmowania pokarmu. Wykonuj cztery próby treningowe dziennie ze stałymi odstępami między próbami, aż do ustalenia stałego czasu zbierania wszystkich trzech kawałków migdałów. Po każdej próbie należy czyścić aparaturę wodą z kranu i ręcznikiem papierowym, aby uniknąć błędu systematycznego opartego na sygnałach węchowych w celu przetestowania odwróconego uczenia się.
Gdy zwierzę jest już w pełni wyszkolone, załóż trzy różne cylindry lub tyle różnych cylindrów, ile jest wymagane przez twój własny protokół i przetestuj zwierzę w wymaganej liczbie prób. Pierwsze cztery obrazy pokazują wyniki paradygmatu testów poznawczych, który mierzy funkcjonowanie poznawcze sześciu czarnych myszy J C 57 z łagodnym niedokrwieniem niedotlenienia mózgu oznaczonym HI 45, ciężkim niedokrwieniem niedotlenienia, oznaczonym HI 75 i pozorowanymi myszami kontrolnymi. Ten wykres przedstawia średnie opóźnienie do ukończenia czterech prób w dniu testowym.
Ten wykres pokazuje liczbę ponownych wizyt w zatkanym dołku w każdym dniu testowym. Miara błędów pamięci krótkotrwałej. Tutaj pokazane są wizyty w niezakręconych otworach.
Jest to miara błędu błędów pamięci długotrwałej. W tym miejscu wyświetlane są dane dotyczące liczby błędów pominięcia. Błąd pominięcia definiuje się jako liczbę nieodwiedzonych butli z przynętą.
Aby potwierdzić, że grupa I 45 nie miała upośledzenia funkcji poznawczych, grupa ta została przetestowana w porównaniu z pozorowanymi kontrolami. W zadaniu odwrócenia, trzy zatkane otwory zostały przydzielone do trzech różnych cylindrów, a zwierzęta zostały przetestowane w czterech próbach. Efekt odwrócenia staje się widoczny, gdy porównamy ostatnią próbę pierwszego etapu z pierwszą próbą etapu odwrócenia.
Ten obraz pokazuje opóźnienie do ukończenia badania dla obu grup i widoczny jest wyraźny ogólny efekt leczenia. Oznacza to, że w grupie HI 45 występuje upośledzona elastyczność poznawcza, którą można było wykryć przy użyciu zmodyfikowanej całej tablicy z zadaniem odwrócenia. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak korzystać ze zmodyfikowanej całej tablicy zarówno w wersji ogólnej, jak i kognitywnej.
Niniejszy protokół opisuje zmodyfikowaną płytę z otworami, test behawioralny łączący cechy testu otwartej przestrzeni oraz tradycyjnej płyty z otworami. Pozwala on na różnicową analizę zachowań bezwarunkowych oraz zdolności poznawczych u małych ssaków laboratoryjnych.
Paradygmat zmodyfikowanej tablicy z otworami (mHB) umożliwia kompleksowe profilowanie behawioralne i poznawcze u małych ssaków laboratoryjnych, wspierając wczesny etap walidacji celów oraz ograniczanie ryzyka mechanistycznego w procesie odkrywania leków neuropsychiatrycznych i wpływających na OUN. Dzięki integracji wielu wymiarów behawioralnych w jednym teście, mHB ogranicza liczbę wykorzystywanych zwierząt, minimalizuje zakłócenia wynikające z kolejności przeprowadzanych prób oraz usprawnia selekcję celów istotnych dla OUN w ramach portfolio badawczego.
Paradygmat mHB wpisuje się w kontinuum procesu odkrywania leków, od wczesnej walidacji celu, poprzez identyfikację związku wiodącego, aż po przedkliniczną ocenę behawioralną, szczególnie w ramach portfeli badawczych skoncentrowanych na OUN.