Montagem, de carga, e alinhamento de uma célula Analytical ultracentrífuga Amostra

Olá, sou Andrea Balbo. Trabalho no grupo de Peter Schuck nos Institutos Nacionais de Saúde. Neste vídeo, vamos demonstrar nossos procedimentos para a montagem, carregamento e alinhamento do rotor de uma célula de amostra de ultracentrífuga analítica.

Vamos começar. Coletado. Aqui estão os componentes de uma célula de amostra de ultracentrífuga analítica. Empilhado dentro da carcaça da célula está um centro de epon com campo de carvão ativado, de setor duplo e 12 milímetros, que será colocado entre duas montagens de janelas. Cada montagem de janela consiste em uma junta da janela, um revestimento da janela e uma janela mantida dentro do suporte da janela.

Esses componentes serão então deslizados para dentro do alojamento da célula, alinhando suas ranhuras com a guia localizada no interior do cilindro do alojamento, uma junta do alojamento e, em seguida, um anel de parafuso fecha a célula de amostra com uma pressão de torque entre 120 e 140 polegadas-libra. Após carregar sua amostra, duas juntas do tampão do alojamento e um tampão do alojamento vedam os orifícios de carregamento da célula para evitar artefatos de varredura, vazamentos e quebras durante os experimentos; é essencial que todos os componentes estejam limpos, secos, livres de poeira e na melhor condição possível, devendo ser examinados com frequência e substituídos quando necessário. Você também precisará do seguinte: um ultracentrífugo analítico, rotor de titânio com quatro furos, uma balança de laboratório, uma chave de torque com mostrador legível e um suporte para torque, um contrapeso e massas de contrapeso, uma chave de fenda de ponta chata, um par de pinças, um pipetador de 200 microlitros equipado com ponteira longa e cônica, ferramentas de alinhamento e lubrificante para revestimento por rotação.

Iniciamos a construção da célula de amostra montando dois conjuntos de janelas. Primeiro, coloque uma junta de vedação na parte inferior do suporte da janela. Em seguida, posicione o revestimento da janela, também chamado às vezes de almofada da janela, dentro do suporte de modo que a abertura do revestimento fique oposta à ranhura do suporte, em um ligeiro ângulo.

Em seguida, coloque a janela no suporte, alinhando a marca de referência na janela com a ranhura do suporte da janela. Pressione suavemente nas bordas extremas em ambos os lados da janela. Para garantir uma vedação adequada e um correto alinhamento da célula de amostra, aplicamos levemente uma camada de lubrificante na junta do alojamento no anel de rosca.

Com o lubrificante spin coat, espalhe uma quantidade muito pequena do produto entre o polegar e o indicador. Aplique uma película fina e invisível de spin coat nas roscas do anel parafuso. Da mesma forma, lubrifique a junta do alojamento.

Remova qualquer lubrificante visível. Para iniciar a montagem da célula de amostra, deslize um conjunto de janela, com a janela voltada para cima em sua direção, para dentro do alojamento da célula, alinhando a ranhura com a chave do alojamento.

Alinhe a ranhura do componente central com a guia do alojamento e deixe-o cair suavemente sobre o conjunto da janela no interior do alojamento. Nunca utilize qualquer tipo de ferramenta para empurrar o componente central para dentro do alojamento da célula. Isso poderia causar danos permanentes ao componente central, resultando em vazamentos durante experimentos.

Gire o segundo conjunto da janela de modo que a janela fique voltada para a peça central e afastada de você. Alinhe a ranhura com a chave do alojamento e deslize-a para baixo sobre a peça central. Coloque a junta do alojamento por cima.

Em seguida, um anel de rosca de modo que a palavra "out" fique visível. Usando os dedos. Depois, uma ferramenta de alinhamento, aperte manualmente o anel de rosca.

Às vezes, a peça central não desliza facilmente para dentro do cilindro da carcaça. Você pode alinhá-la primeiro e, em seguida, colocar o segundo conjunto da janela sobre ela. Aplicando uma pressão suave para baixo sobre o conjunto da janela.

Você pode deslizar ambos para dentro da carcaça da cubeta ao mesmo tempo. Dessa forma, evitamos pressionar diretamente o componente central. Agora é um bom momento para verificar a cubeta quanto a partículas de poeira, fiapos e impressões digitais.

Você também notará os anéis de Newton, que indicam que ainda há ar entre o componente central e as janelas. Eles desaparecerão após o aperto com o anel de parafuso para cima e a palavra "out" visível. Coloque a célula de amostra completamente para baixo dentro da célula.

Chave de torque do suporte de torque. Mantenha a célula no lugar aplicando pressão constante sobre o manípulo do suporte de torque. Em um único movimento contínuo, aplique torque no anel de parafuso entre 120 e 140 polegadas-libra.

Solte a alavanca do suporte de torque e remova cuidadosamente a célula de amostra. Normalmente, carregamos um volume de 400 microlitros em cada setor do centro de 12 milímetros. Usando uma pipeta de 200 microlitros, posicione a célula de amostra com os orifícios de carregamento voltados para cima e a palavra "out" no anel de rosca visível.

Deslize a ponteira da pipeta até a metade do setor central esquerdo através dos orifícios de carregamento e libere lentamente 200 microlitros da solução de referência. Repita uma vez para completar um total de 400 microlitros, utilizando a mesma ponteira e a mesma técnica com cuidado e lentidão. Preencha o setor central direito com 400 microlitros da solução da amostra.

É imperativo igualar os volumes das soluções de referência e da amostra o mais próximo possível. Encaixar firmemente a ponteira na pipeta, carregar e dispensar as soluções lentamente, evitar bolhas durante o carregamento e usar a mesma ponteira para ambas as soluções. Todos esses cuidados ajudam a manter os volumes iguais para selar a célula.

Coloque duas juntas de vedação vermelhas do bujão firmemente em cada orifício de carregamento, certificando-se de que estejam posicionadas cuidadosamente entre a peça central e a carcaça de alumínio. Cubra cada orifício de carregamento com um bujão e aperte manualmente com uma chave de fenda de ponta chata pequena. Antes de carregar o rotor, certifique-se de que o contrapeso e a célula que ficará oposta ao contrapeso tenham pesos que diferem em no máximo 0,5 grama um do outro.

Inicie com uma balança zerada. Primeiro, pese uma célula de amostra que ficará posicionada oposta ao contrapeso. Zere a balança para subtrair o peso da célula de amostra.

Em seguida, pese o contrapeso. Aqui, verificamos que o contrapeso é 4,193 gramas mais leve que a célula da amostra. Selecione um contrapeso de quatro gramas e parafuse-o no orifício de fixação do contrapeso, certificando-se de que ele não fique saliente na parte superior.

Pese o contrapeso para garantir que o peso final esteja dentro de 0,5 gramas. Usando um rotor de quatro furos, coloque o contrapeso na posição quatro, de modo que a seta branca fique visível e apontando na direção da força centrífuga. Com uma ferramenta de alinhamento, certifique-se de que ele esteja totalmente encaixado dentro do rotor.

Posicione a célula de amostra da balança com as tampas da carcaça voltadas para o centro do rotor e a palavra "out" no anel de rosca visível. Novamente, utilizando uma ferramenta de alinhamento, certifique-se de que ela esteja totalmente inserida no interior do rotor, observando a partir da parte inferior do rotor.

Alinhe o interior. Risque, marcando a marca mais próxima ao centro do rotor com o traço de risco no contrapeso usando uma ferramenta de alinhamento. Da mesma forma, alinhe a célula da amostra na posição dois.

Após todos os alinhamentos celulares, o rotor está pronto para ser colocado na câmara da centrífuga.