Necropsia de diagnóstico e coleta de tecido e amostra selecionada em ratos e camundongos

O objetivo geral deste procedimento é realizar uma necropsia básica em roedor. Isso é realizado primeiramente registrando informações básicas sobre o animal. O segundo passo do procedimento é examinar as vísceras.

O terceiro passo é coletar amostras, como órgãos ou linfonodos mesentéricos. Em última análise, o estado de saúde de um animal pode ser determinado por meio de histopatologia ou outras técnicas. Geralmente, pessoas novas na realização de necropsias enfrentam dificuldades porque a anatomia de roedores é aprendida durante o trabalho.

Esses métodos podem ajudar a responder perguntas fundamentais sobre a saúde de animais em uma colônia de pesquisa. A demonstração visual dessas técnicas é essencial, pois leva tempo para aprender as localizações dos diversos tecidos e como identificar tecidos normais de anormais. Antes de eutanasiar o animal, colete informações sobre seu histórico e registre suas características atuais, como condição física, comportamento, sexo, idade, peso, linhagem, entre outras.

Este registro é essencial para a pessoa que examinará os tecidos antes da eutanásia do animal. Certifique-se de que os equipamentos de proteção individual apropriados sejam utilizados. Prepare uma mesa de dissecação, pinças, tesouras, rótulos para recipientes, fixador, meio e recipientes de coleta.

Após eutanasiar o animal, avalie seu estado corporal, verifique anormalidades na pele e no pelo, emaciação e desidratação. Procure também evidências de manipulações artificiais, implantes ou cicatrizes cirúrgicas no animal. Em seguida, utilizando um microscópio estereoscópico, examine detalhadamente todas as aberturas externas.

Esses incluem as orelhas, olhos, nariz, boca, ânus e genitália. Agora, posicione o animal em decúbito dorsal sobre a mesa de dissecação, levante a pele com pinça e use tesoura para abrir a pele do ânus até o queixo. Em seguida, afaste a pele para os lados e corte a parede abdominal e a caixa torácica.

Exponha as vísceras torácicas fazendo dois cortes lateralmente em cada lado da caixa torácica. Corte o diafragma. Em seguida, remova a caixa torácica cortando a parte superior do esterno.

Agora, examine os órgãos torácicos e abdominais expostos. Observe quaisquer alterações de cor, odores incomuns, diferenças de tamanho, órgãos ausentes ou deslocados. Examine a consistência das superfícies dos órgãos e anote quaisquer massas teciduais ou bolsas preenchidas com líquido.

Além disso, observe a presença de fluido em qualquer cavidade. Prossiga o exame com o trato gastrointestinal. Examine o mesentério em busca de linfonodos aumentados ou massas teciduais.

Descreva o conteúdo do trato gastrointestinal e verifique cuidadosamente a presença de paredes espessadas, massas ou hemorragia. Para examinar o interior dos rins, use uma lâmina para fazer uma seção longitudinal do rim esquerdo e uma seção transversal do rim direito fora do centro da linha média. Verifique o parênquima em busca de quaisquer anormalidades.

Agora, examine o sistema urinogenital em machos. Identifique as vesículas seminais, os testículos, o epidídimo, os ureteres e as glândulas perusais em fêmeas. Identifique o útero, os ovários e os ureteres.

Examine o sistema urogenital em busca de obstruções, bolsas de fluido, hemorragia ou outras anormalidades. Após concluir esses exames, isole e excise os órgãos-alvo para exame adicional. Normalmente, o coração, o fígado, os rins e o baço são coletados conforme são excisados.

Mergulhe cada órgão em um fixador ou siga os primeiros passos de um protocolo que exija esses tecidos, como congelamento ou imunohistoquímica, para obter uma fixação adequada. Geralmente, os tecidos são mergulhados em um conservante como NBF a 10% numa proporção de 20 volumes de fixador para um volume de tecido. Ao trabalhar com ratos, colete o aspirado brônquico antes do aspirado nasal.

Inicie refletindo a pele nos tecidos subcutâneos para longe da região cervical, expondo assim as glândulas salivares e a musculatura cervical. Em seguida, remova esses tecidos para expor a traqueia. Faça uma incisão de três milímetros na traqueia e insira uma pipeta carregada com um mililitro de fluido de coleta na luz traqueal, direcionada em ângulo reto.

Enxague lentamente o fluido de coleta através da traqueia e nos pulmões por três vezes. Em seguida, recolha o fluido de coleta e remova a pipeta da traqueia. Nem todo o fluido retornará para a pipeta.

Portanto, repita o processo se mais fluido for necessário. Para testes em camundongos. Para coletar uma amostra de aspirado nasal ou aspirado brônquico, acesse a ATU nasofaríngea utilizando tesoura esterilizada.

Seccione a articulação temporomandibular e afaste a mandíbula da maxila, expondo a cavidade nasofaríngea para coletar a aspiração nasal. Insira uma pipeta carregada com um mililitro de fluido de coleta na cavidade nasofaríngea do camundongo ou na luz traqueal da rata. A pipeta deve ser direcionada cranialmente e empurrada para dentro.

Assim, a ponta entra em contato com o palato nasal. Uma vez nessa posição, injete lentamente o fluido de coleta. À medida que o fluido entra na cavidade nasal, formará meniscos na abertura nasal e também deverá ser visível através do palato oral translúcido.

No entanto, se o fluido sair pela boca, reoriente a pipeta. Após a injeção completa, recolha o fluido de amostragem da cavidade nasal para dentro da pipeta e, em seguida, remova a pipeta. Comece segurando a traqueia com pinça e corte-a logo acima da pinça.

Em seguida, puxe suavemente a traqueia para cima, cortando as conexões teciduais até que todo o conjunto de tecidos torácicos possa ser removido. Agora, coloque os pulmões planos sobre a superfície de trabalho e amarre frouxamente um pedaço de fio cirúrgico ou barbante ao redor da traqueia. Não aperte o nó, caso contrário você não conseguirá passar a agulha pela traqueia.

Agora, preencha uma seringa com fixador e insira a agulha na abertura da traqueia, segurando firmemente a traqueia na agulha. Com pinça, encha lentamente os pulmões com fixador até que fiquem completamente inflados. O volume de fixador variará conforme a idade, linhagem e estado de saúde do animal.

Se os tecidos estiverem subinflados, eles parecerão achatados; se estiverem superinflados, um líquido espumoso vazará do tecido após o enchimento. Aperte o material de sutura ou o fio ao redor da traqueia para evitar o refluxo do fixador para fora dos pulmões. Em seguida, coloque os pulmões inflados no fixador. Posicione a carcaça sobre uma placa de dissecação limpa em posição ventral e use tesoura e pinça para remover a pele e o músculo que recobrem o crânio.

Em seguida, decapite a carcaça usando uma tesoura pequena. Insira a lâmina inferior no forame magno e corte ao longo da linha média do crânio com um movimento ascendente. Agora, exponha o cérebro com uma pinça, abrindo o crânio.

Se o patologista preferir cortar seções do cérebro enquanto ainda estiver dentro do crânio, coloque imediatamente o crânio com o cérebro exposto em FBN a 10%. Caso contrário, segure a cabeça ao redor do nariz com pinça ou dedos e inverta suavemente o crânio para que a gravidade ajude o tecido a sair do crânio. Cuidadosamente, deslize a pinça curva ao longo da borda externa do cérebro, começando pelos lobos olfativos.

Continue deslizando a pinça ao longo do crânio em direção ao cerebelo, enquanto pinça suavemente os nervos com a mesma pinça. Quando o cérebro se soltar, coloque-o no fixador. Para localizar os nódulos linfáticos mesentéricos primeiro, localize o ceco em forma de vírgula no intestino. Os nódulos linfáticos mesentéricos são os nódulos amarelados, ovais ou esféricos, no mesêntero adjacentes ao ceco.

Eles geralmente são ligeiramente mais espessos e firmes em textura do que o mesentério e a gordura circundantes. Um microscópio cirúrgico pode ser útil para diferenciar os tecidos inicialmente, mas com experiência, não será necessário. Usando pinça e tesoura, isole os linfonodos mesentéricos e, em seguida, transfira-os para um tubo de armazenamento para serem usados em cultura, PCR ou histopatologia.

Após a conclusão do protocolo, o seguinte estará disponível para um patologista ou cientista: um relatório escrito sobre as condições objetivas e subjetivas no momento da eutanásia. Uma descrição objetiva dos tecidos antes de sua fixação, todos os principais órgãos abdominais e torácicos em fixador, o cérebro e os linfonodos mesentéricos, além de amostras de aspirado nasal e brônquico. Uma vez dominada, uma necropsia abreviada pode levar menos de 30 minutos.

Ao realizar este procedimento, é importante lembrar-se de registrar suas observações sobre o estado do animal e de seus tecidos. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como realizar uma necropsia completa em roedores, incluindo a coleta de pulmões perfundidos, linfonodos mesentéricos e cérebro.