Uma técnica simplificada para a produção de um modelo de ferida isquêmica

O objetivo geral do seguinte experimento é possibilitar a criação de feridas isquêmicas, não apenas em coelhos normais, mas também em coelhos com resistência reduzida, como os idosos ou diabéticos. Todas as técnicas atualmente utilizadas para a criação de feridas isquêmicas são altamente invasivas, e até o momento, nenhuma dessas técnicas pode ser usada em animais diabéticos. Este procedimento utiliza cirurgia minimamente invasiva que começa com a realização de três pequenas incisões na pele sobre os três feixes vasculares.

O próximo passo é isolar e proteger a veia central e o feixe vascular coddle, de modo que a circulação sanguínea para a orelha seja reduzida, mas não totalmente eliminada. Por fim, os demais vasos, nervos e tecidos subcutâneos são todos seccionados ou ligados por meio das incisões na pele. A isquemia da orelha é confirmada pela ausência de pulso arterial, aparência da orelha, diferença de temperatura e saturação subcutânea de oxigênio.

Esta cirurgia minimamente invasiva pode parecer difícil de realizar, mas na verdade é muito fácil. A principal vantagem dessa técnica é que ela causa mínima perturbação na pele. Desde que publicamos esta técnica pela primeira vez em 2007, recebemos muitas perguntas.

Nós desde então simplificamos ainda mais este procedimento. Para torná-lo ainda mais fácil de realizar sem o uso de um microscópio, comece pesando o coelho selecionado, anestesie o coelho utilizando uma mistura de cetamina e xilazina. Monitore os sinais vitais do coelho; três feixes vasculares que suplem a orelha podem ser identificados no lado dorsal.

Estes são o feixe central, que é o maior deles, com colaterais conectando-se a outros vasos; o feixe coddle, no qual a artéria geralmente é muito pequena ou ausente; e o feixe craniano. No lado ventral, a pele distal não recebe suprimento sanguíneo dos vasos proximais.

Em vez disso, os feixes vasculares na orelha dorsal possuem numerosos ramos penetrantes através da cartilagem, fornecendo suprimento sanguíneo à pele ventral distal. Em alguns coelhos, ocorre também um vaso subcutâneo muito pequeno no lado ventral, que fornece sangue a não mais de um terço da pele ventral. Em uma incisão cutânea circunferencial aberta, essencialmente não há sangramento a partir de uma incisão ventral.

Antes de prosseguir, certifique-se de que o coelho não responde a estímulos dolorosos utilizando uma pinça no dedo do pé e reflexo ocular; proteja os olhos do animal aplicando pomada de lágrima artificial. Mantenha o coelho aquecido durante a cirurgia com uma manta térmica. Em seguida, com uma solução de Betadine e álcool, esfregue ambas as orelhas e a pele ao redor, e cubra o coelho de forma que apenas as duas orelhas fiquem expostas.

Uma orelha será tornada isquêmica enquanto a outra serve como controle. Os instrumentos utilizados para a cirurgia são uma faca cirúrgica com lâmina número 15, dois pares de pinças, um par para a pele e outro para os demais tecidos moles. Três pinças tipo mosquito, um ou dois pares de tesouras microcurvas, um par de tesouras pequenas para cortar suturas e tecidos resistentes, um porta-agulha e alguns punções de aço inoxidável.

Inicie a cirurgia identificando os três pedículos vasculares de acordo com as artérias e veias. Utilizando uma lâmina número 15, faça cuidadosamente um corte vertical na pele sobre o pedículo vascular central.

Isole a veia central dos tecidos circundantes e proteja-a. Este passo envolve a veia central para retração.

Disseque o nervo central livremente. Normalmente, ele está localizado no lado interno da veia. O nervo é cortado com tesoura.

Disseque a artéria central livremente. Normalmente, ela está localizada no lado cranial e mais profunda que a veia; amarre a artéria e seccione-a. Limpe os tecidos ao redor da veia central sobre a cartilagem da orelha.

Uma segunda incisão na pele é feita sobre o pedículo codilar. Para preservar o feixe. Os vasos são dissecados livremente e circundados para proteção.

Isso é especialmente útil quando a veia é grande, como neste coelho. Faça um túnel entre esta e a primeira incisão. Corte os tecidos subcutâneos sobre a cartilagem.

Uma terceira incisão na pele é feita sobre o feixe cranial. Todo esse feixe é ligado e separado. A pele sobre o terceiro feixe é aberta com corte.

Essa veia está muito próxima à pele, portanto não corte muito profundamente. Em seguida, o feixe vascular inteiro é dissecado, isolado, amarrado e separado. Usando uma faca e tesoura, faça um túnel subcutâneo.

Os três cortes interrompem todos os tecidos subcutâneos, músculos, nervos e pequenos ramos vasculares. Utilize dissecações adicionais afiadas e rombas para limpar a base, deixando a cartilagem exposta com cerca de cinco a dez milímetros de largura. O sangramento pode ser controlado com pressão de gaze.

A eletrocautériase não é necessária. A pele dentro da orelha não é cortada, pois não possui grande vascularização. O aspecto importante deste procedimento é garantir uma dissecção adequada do túnel subcutâneo, protegendo ao mesmo tempo os vasos.

Este procedimento não deveria ser tão difícil. Após a hemostasia, as três incisões na pele são fechadas com suturas de quatro ou cinco fios e verificadas novamente para garantir que as incisões cutâneas foram adequadamente fechadas e que não há sangramento visível. Para testes de fármacos em feridas, quatro feridas circulares de espessura total na pele podem ser criadas na face ventral de cada orelha com um punch de aço inoxidável de seis milímetros.

A distância entre os ferimentos é de pelo menos 20 a 30 milímetros. A pele e o pericondrío dentro do punch são removidos, mas a cartilagem não é danificada. Após os ferimentos serem criados em ambas as orelhas, cubra-os temporariamente com gaze e transfira o coelho para uma sala de procedimentos para aplicação do fármaco.

Após a remoção dos coágulos sanguíneos das feridas, aplique as drogas testadas e controle. As feridas são cobertas com curativo oclusivo para prevenir dessecação. Ao comparar duas drogas, aplique cada droga em uma ferida proximal e outra distal.

Isso controla as diferentes taxas de cicatrização de feridas na orelha distal e proximal no pós-operatório. A orelha isquêmica geralmente torna-se fria e cianótica, com sensibilidade reduzida distal à incisão. Pode haver edema leve por alguns dias, mas ele desaparece espontaneamente e nenhum tratamento é necessário.

O pulso da artéria central está ausente. O movimento da orelha é reduzido, mas não totalmente eliminado porque alguns músculos ainda estão ligados à base da orelha. Se o túnel for feito corretamente, uma depressão nítida pode ser observada entre as incisões.

Um adesivo de fentanil é fixado na pele das costas para aliviar possíveis dores pós-operatórias. A temperatura da pele é medida diariamente em cada orelha com um termômetro. A circulação sanguínea é avaliada na orelha utilizando um medidor de tensão transcutânea de oxigênio ou um medidor de fluxo a laser doppler.

Após uma semana, os pontos das incisões na pele podem ser removidos a partir de 2007. O procedimento foi utilizado em mais de 70 coelhos. Isso inclui 23 coelhos diabéticos e quatro idosos.

As diferenças de temperatura entre a orelha não isquêmica e a isquêmica variaram de um a 10 graus Celsius, com a maioria dos coelhos situando-se na faixa de dois a seis graus Celsius. A diferença de temperatura foi maior nos primeiros dias após a cirurgia, diminuindo gradualmente após o dia 15, mas ainda foi mantida ao final de um mês. Foram coletadas seis amostras de tecido de cada orelha e os conteúdos de fosfatos de alta energia foram medidos por HPLC, tanto de TP quanto de energia total.

As concentrações foram mais altas nas orelhas normais do que nas orelhas isquêmicas. Os tempos de cicatrização das feridas foram sempre mais longos na orelha isquêmica do que na orelha não isquêmica em animais não diabéticos e diabéticos em 15 coelhos não diabéticos. O tempo médio de cicatrização foi de 17,8 dias na orelha não isquêmica versus 21,8 dias na orelha isquêmica.

Em animais diabéticos com 10 a 12 meses de evolução, o tempo médio de cicatrização foi de 18,3 dias na orelha não isquêmica em comparação com 29,1 dias na orelha isquêmica. Em todos os animais, incluindo coelhos diabéticos, as incisões cutâneas cicatrizaram normalmente, sem quaisquer complicações em coelhos. Com 24 meses de duração do diabetes, as feridas ventrais apresentam maior tendência a infecção.

Essa característica torna a lesão mais semelhante às feridas diabéticas humanas. Uma amostra de histologia mostra a cicatrização do túnel subcutâneo, no qual o músculo está ausente e é substituído por tecidos fibrosos. No entanto, a pele permanece intacta.

Ao realizar este procedimento, é importante lembrar-se de tratar os animais de maneira humanitária. Uma vez dominada, esta técnica pode ser realizada em menos de uma hora. Utilizamos esta técnica em mais de 70 coelhos, incluindo 23 coelhos diabéticos, sem quaisquer complicações, como sangramento ou infecção.

É um procedimento muito seguro ao seguir este protocolo. Outros métodos, como isquemia adicional, lesão nervosa e inoculação bacteriana, podem ser realizados para responder perguntas adicionais, como úlceras vasculares, úlceras de pressão e neuropatia diabética.