O Mouse Teste de Natação Forçada
29 de janeiro de 2012
O teste de natação forçada é validado como uma abordagem experimental para avaliar a eficácia do antidepressivo potencial em roedores. Animais experimentais são colocados em um tanque de água e fugir de comportamentos relacionados à mobilidade é quantificado. Os procedimentos comuns para a versão do mouse deste teste são descritos.
O teste de natação forçada em camundongos é um teste comum utilizado para prever a eficácia de antidepressivos. Este vídeo demonstra os procedimentos da versão do teste de natação forçada em camundongos. A versão em camundongos difere da versão em ratos e não deve ser usada de forma intercambiável.
No teste de natação forçada, os camundongos são colocados em um tanque cheio de água. O camundongo permanece no tanque por seis minutos. Os comportamentos do animal são registrados durante esse período.
Após o período de teste de seis minutos, o sujeito é retirado da água. Após a conclusão do teste, as gravações visuais são transferidas para um computador ou monitor de vídeo. Para análise por observador, mede-se o tempo que um camundongo passa se debatendo durante os últimos quatro minutos da sessão de seis minutos.
Os medicamentos antidepressivos aumentam o tempo gasto se esforçando. Isso é refletido por períodos mais curtos de tempo de imobilidade. Olá, meu nome é Sean do laboratório do Dr. Todd Gould na Escola de Medicina da Universidade de Maryland.
Olá, sou a Chantelle do mesmo laboratório. Neste vídeo, vamos mostrar como realizar e pontuar a versão para camundongos do Teste de Nado Forçado. O teste de nado forçado em camundongos é utilizado para avaliar a eficácia potencial de tratamentos antidepressivos.
Então vamos começar, não é? Utilizamos tanques cilíndricos transparentes feitos de um material resistente, como plexiglass, cujas dimensões são escolhidas para impedir que os camundongos escapem ou toquem o fundo com as patas ou cauda. Encha o tanque com água da torneira até o nível predeterminado e marcado, ajustando a temperatura da água.
Deve estar entre 23 e 25 graus Celsius. Os tanques de água devem ser organizados para filmagem. Em nosso laboratório, realizamos o teste de natação forçada com quatro a cinco indivíduos simultaneamente entre os tanques.
Colocamos divisórias para impedir que os indivíduos se observem mutuamente. Essas divisórias também fornecem um contraste de fundo com os camundongos. Para camundongos albinos, a cor preta oferece um bom contraste para gravações em vídeo.
Para cepas de camundongos com coloração mais escura, um fundo branco ou creme é apropriado. Antes de iniciar o experimento, ligue a máquina de ruído branco. Certifique-se de que o volume não esteja muito alto.
Deve apenas mascarar ruídos intermitentes. Leve os indivíduos para a sala do experimento. Para aclimatação, este período geralmente é de pelo menos uma hora.
As condições na sala do experimento devem ser mantidas constantes e livres de ruídos, alterações nos níveis de luz e outras possíveis interrupções. Uma vez que o período de habituação termina, o teste pode ser iniciado. É importante registrar o nome da sessão. Primeiro, segure os camundongos pelas caudas e coloque-os suavemente no tanque.
É importante fazer isso lentamente para que os animais possam se orientar ao tocar a superfície da água. Ao final do período de teste de seis minutos, grave em vídeo a identificação dos animais e pare a gravação. Remova os camundongos na mesma ordem em que foram colocados e seque-os suavemente com toalhas de papel antes de devolvê-los à gaiola.
A água dos tanques não deve ser reutilizada. Agora que concluímos os testes, vamos passar à pontuação dos comportamentos no teste de natação forçada em massa. A principal variável avaliada é o tempo em que os animais permanecem imóveis durante o ensaio.
Normalmente, no teste de natação forçada em camundongos, pontua-se os últimos quatro minutos de uma sessão total de seis minutos. A razão para isso é o fato de que a maioria dos camundongos, independentemente do tratamento, permanece continuamente ativa nas fases iniciais do teste. Essa atividade mascara quaisquer efeitos potenciais do tratamento.
Como é possível observar neste vídeo, os camundongos são muito ativos durante as fases iniciais do teste. Essa atividade diminuirá após os primeiros dois minutos para cada tempo de camundongo gasto. A movimentação é medida por um cronômetro na tela controlado por um controle de videogame.
O outro cronômetro faz a contagem regressiva de 240 segundos. A mobilidade durante o tempo de teste é definida como quaisquer movimentos além daqueles necessários para equilibrar o corpo e manter a cabeça acima da água. Agora, vamos ver um exemplo de pontuação de uma tentativa.
Cobrimos primeiro os outros camundongos que não estão sendo avaliados para evitar confusão. Os camundongos geralmente flutuam na água com facilidade. No entanto, ainda apresentam pequenos movimentos para equilibrar seus corpos e manter as cabeças acima da água.
Esses comportamentos não são uma tentativa de escapar e não devem ser pontuados como mobilidade. Além disso, após um único episódio de mobilidade, os camundongos, mesmo essencialmente imóveis, ainda podem derivar na água em razão do momento adquirido anteriormente; esses movimentos também não devem ser pontuados como mobilidade. Agora vamos passar para outro vídeo.
O camundongo neste vídeo exibe períodos de mobilidade e imobilidade, conforme rotulado na tela, e um observador registrará o tempo de mobilidade. Embora teoricamente seja possível medir diretamente o tempo de imobilidade, é mais fácil detectar e medir movimentos ativos do que a ausência desses movimentos. Tradicionalmente, o tempo de imobilidade é relatado.
O tempo de imobilidade é determinado subtraindo-se o tempo de mobilidade de 240 segundos. A pontuação do quarto teste de natação exige muito treinamento e prática. Para alcançar altos níveis de confiabilidade, é importante estabelecer um padrão interno de referência e treinar cada novo observador até que atinja altos níveis de confiabilidade.
Neste vídeo, explicamos a versão do teste de natação forçada em camundongos. Boa sorte em seus futuros experimentos.
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Visão Geral
O teste de natação forçada é um método validado para avaliar a eficácia potencial de antidepressivos em roedores. Este teste consiste em colocar camundongos em um tanque com água e quantificar seu comportamento de mobilidade relacionado à fuga.
Componentes Principais do Estudo
Área de Ciência
- Neurociência
- Ciência Comportamental
- Psicofarmacologia
Antecedentes
- O teste de natação forçada é comumente utilizado em pesquisas pré-clínicas.
- Ele ajuda a prever a eficácia de tratamentos antidepressivos.
- Camundongos são usados devido às suas semelhanças comportamentais com os seres humanos.
- Existem diferentes versões do teste, incluindo as versões para camundongo e rato.
Objetivo do Estudo
- Demonstrar os procedimentos da versão do teste de natação forçada em camundongos.
- Destacar as diferenças entre as versões realizadas em camundongos e ratos.
- Fornecer um guia visual para pesquisadores que realizam o teste.
Métodos Utilizados
- Os camundongos são colocados em um tanque cheio de água por seis minutos.
- As observações comportamentais são registradas durante a duração do teste.
- A mobilidade relacionada à fuga é quantificada para avaliar a eficácia antidepressiva.
- Os procedimentos são padronizados para garantir a reprodutibilidade.
Resultados Principais
- O teste fornece informações sobre as respostas comportamentais de camundongos.
- Os resultados podem indicar a eficácia potencial de antidepressivos.
- A variabilidade no comportamento pode fornecer informações sobre os mecanismos subjacentes da depressão.
- Procedimentos padronizados aumentam a confiabilidade dos resultados.
Conclusões
- O teste do nado forçado é uma ferramenta valiosa na pesquisa de antidepressivos.
- Compreender o comportamento de camundongos neste contexto pode levar a tratamentos melhores.
- Estudos futuros podem se basear nestes achados para explorar novas vias terapêuticas.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
O teste de natação forçada em camundongos é um ensaio comportamental pré-clínico amplamente utilizado para avaliar a eficácia de antidepressivos, fornecendo uma leitura quantitativa da mobilidade relacionada à fuga que auxilia na validação de alvos e na redução de riscos mecanicistas na fase inicial de descoberta. Seu procedimento padronizado permite a avaliação reprodutível dos efeitos de compostos sobre estados semelhantes à depressão, orientando decisões de avanço ou interrupção no planejamento da fila de antidepressivos. A simplicidade do teste e seus requisitos mínimos de equipamentos facilitam sua implementação escalonável em diferentes fluxos de descoberta.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia Farmacêutica
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Valor Científico: Avalia hipóteses terapêuticas mediante a medição de alterações induzidas por antidepressivos no comportamento de mobilidade, apoiando a validação do engajamento do alvo.
- Valor Operacional: Permite a validação funcional de alvos do SNC por meio da avaliação da resposta à dose de compostos antidepressivos.
- Valor Preditivo: Contribui para a confiança pré-clínica ao correlacionar o aumento do tempo de esforço com a eficácia clínica potencial.
Triagem e Desenvolvimento de Ensaios
- Prontidão do Ensaio: Produz medições quantificáveis de mobilidade nos últimos quatro minutos de uma sessão de seis minutos, permitindo a triagem padronizada de compostos.
- Reprodutibilidade: Temperatura padronizada da água (23–25°C), dimensões do tanque e treinamento dos observadores garantem resultados consistentes entre laboratórios.
- Escalabilidade: Compatível com testes paralelos de quatro a cinco indivíduos utilizando divisores para prevenir interferência social, permitindo avaliação de média escala.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Relevância para a Doença: Modela estados semelhantes à depressão por meio do comportamento de imobilidade, permitindo a avaliação de candidatos a antidepressivos baseados em mecanismos.
- Continuidade Tradutiva: A pontuação da mobilidade alinha-se com desfechos clínicos ao quantificar comportamentos ativos de enfrentamento preditivos da resposta ao tratamento.
- Avanço Ajustado ao Risco: Dados confiáveis de imobilidade apoiam decisões pré-clínicas de avançar ou não avançar, reduzindo a progressão de falsos positivos.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
O teste de natação forçada em camundongos funciona como um ensaio comportamental de descoberta que conecta a validação de alvo e a identificação de compostos líderes, fornecendo insights mecanicistas antes do avanço para estudos pré-clínicos de eficácia.
- Biologia da Descoberta: Apoia a verificação de hipóteses ao isolar o efeito de compostos no comportamento relacionado à fuga, esclarecendo o envolvimento de vias na regulação do humor.
- Triagem: Fornece saídas quantitativas de mobilidade que permitem a comparação de compostos em teste com controles e antidepressivos de referência.
- Análises: A medida do tempo de mobilidade, derivada da detecção de movimento ativo, fornece um indicador confiável e independente de avaliador para comparações entre grupos.
- Pesquisa Translacional: Conecta-se à validação pré-clínica ao oferecer um indicador comportamental da resposta a antidepressivos, contribuindo para estudos sobre mecanismo de ação.
- Reutilização Empresarial: Estabelece uma plataforma comportamental reutilizável para avaliação de alvos do SNC em diversas campanhas de descoberta.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Aumenta a confiança preditiva na validação de alvos ao reduzir a ambiguidade mecanicista na triagem de antidepressivos.
- Valor Operacional: Garante a padronização do ensaio por meio de duração fixa, controle de temperatura e protocolos de pontuação cegos.
- Valor Estratégico: Melhora a eficiência do capital ao permitir a eliminação precoce de candidatos a antidepressivos antes de estudos que consomem muitos recursos.
- Impacto sobre o Portfólio: Apoia a priorização ajustada ao risco ao identificar compostos com efeitos robustos de melhoria da mobilidade.
Considerações sobre a Implementação
- Requer experiência em neurociência comportamental no manejo de roedores e na pontuação etológica.
- Depende de instrumentação ambiental controlada, incluindo tanques de água com temperatura regulada e sistemas de gravação em vídeo.
- Necessita padronização entre equipes no treinamento de observadores para alcançar confiabilidade interobservador na pontuação de mobilidade.
- Envolve considerações de adaptação para diferentes linhagens de camundongos, incluindo a otimização do contraste de fundo para rastreamento em vídeo.
- Limitado por fatores de confusão potenciais, como reatividade ao estresse e comprometimento motor, que devem ser controlados por meio de ensaios complementares.
