Minimamente Invasiva transversal aórtica constrição em Ratos

O objetivo geral deste procedimento é induzir hipertrofia ventricular esquerda por meio da constrição do arco aórtico transverso com um procedimento cirúrgico simples que não requer ventilação artificial. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área de cardiologia sobre remodelamento miocárdico, hipertrofia cardíaca, apoptose e fibrose, bem como condições de sobrecarga de pressão no ventrículo esquerdo. A principal vantagem desta técnica é que ela preserva os aspectos essenciais da constrição aórtica transversa convencional, ao mesmo tempo que elimina a necessidade de ventilador e intubação traqueal.

Antes de iniciar o procedimento, utilize um porta-agulhas para curvar as pontas de duas a quatro agulhas de calibre 30 e monte as agulhas em aplicadores de algodão individuais. Em seguida, rompa a ponta de uma agulha de calibre 27 e use o porta-agulhas para dobrar a ponta em 90 graus. Depois, alise a ponta em uma superfície dura para formar um espaçador de 0,4 milímetro.

Após confirmar o nível apropriado de sedação pela ausência de resposta ao aperto no dedo do pé, aplique pomada nos olhos do animal e posicione o camundongo em uma placa aquecida a 37 graus Celsius, na posição supina. Prenda as patas à placa aquecida com fita cirúrgica. Em seguida, desinfete a pele com três passagens consecutivas de álcool e solução de povidona-iodo e coloque um campo estéril com área operatória exposta sobre o animal.

Para iniciar o procedimento de ligadura, utilize um escalpe estéril para abrir a pele na posição mediana do pescoço e do tórax. Em seguida, sob um microscópio estereoscópico, use uma tesoura romba para separar suavemente os tecidos conjuntivos e puxar a glândula tireoide em direção à cabeça. Com auxílio de agulhas curvas, separe a camada muscular na traqueia ao longo da linha mediana, para ambos os lados do animal, e use a tesoura romba para cortar o esterno aproximadamente cinco milímetros até a segunda costela.

Abra a incisão com pinças curvas e use uma agulha curva para separar os lobos do timo e a parede inferior do tórax. Nesse momento, o arco aórtico transverso e as duas artérias carótidas ficarão claramente visíveis. Posicione a agulha curva sob o arco e use a ponta para fazer uma perfuração entre a parede do vaso e o tecido conjuntivo do outro lado.

Use a agulha para posicionar um fio de sutura monofilamento 6-0 sob o arco aórtico e coloque o espaçador previamente preparado dentro do laço. Fixe o fio com um nó duplo e remova suavemente o espaçador. Após confirmar a constrição bem-sucedida com o nó, corte as pontas do fio e use um fio de sutura de seda 6-0 para fechar a parede torácica com um padrão de sutura interrompida simples, seguido pelo fechamento da pele com um fio de sutura monofilamento 6-0 em um padrão de sutura contínua.

Em seguida, aplique solução de povídon-iodo no local da sutura e coloque o animal em uma gaiola pré-aquecida para recuperação e monitoramento pós-operatório. Após uma semana, aplique gel eletrolítico nas patas do animal experimental e fixe-as com fita adesiva sobre uma plataforma aquecida a 37 graus Celsius com eletrodos. A seguir, aplique gel de ultrassom no tórax do camundongo e selecione o modo B em um sistema de ultrassom de alta frequência.

Usando uma sonda MS550D de 40 megahertz, localize o ventrículo esquerdo. Em seguida, no modo M, meça a espessura da parede sistólica e diastólica. Retorne ao modo B para localizar a artéria carótida comum esquerda antes do ponto de bifurcação, e utilize onda pulsada e doppler colorido para avaliar o fluxo, armazenando as imagens para análise posterior conforme apropriado.

Incline a plataforma de manipulação do animal para a extrema esquerda, de modo que o camundongo fique em posição decúbito lateral esquerdo, e posicione a sonda com um ângulo de 30 graus em relação a uma posição paralela à cabeça, na localização parasternal. Ajuste os torques x e y para identificar o arco aórtico e localize a constrição utilizando o modo Doppler colorido, para tornar o local da constrição mais visível. Com o uso do Doppler de onda pulsada e Doppler colorido, meça a velocidade máxima do fluxo no ponto onde o sangue flui entre as duas artérias carótidas que se originam do arco aórtico.

Em seguida, permita que o animal se recupere sobre uma placa aquecida na posição prona com monitoramento até a recuperação completa. A constrição transversa da aorta minimamente invasiva, ou MTAC, produz de forma confiável sobrecarga de pressão no ventrículo esquerdo em camundongos ligados, com uma aorta transversa claramente visível e constrição aumentada da velocidade máxima do fluxo no local da constrição. Em comparação, o animal submetido a cirurgia simulada não demonstra constrição aparente, apresentando velocidade normal do fluxo máximo.

Como consequência da ligadura, a velocidade do fluxo sanguíneo é significativamente aumentada na artéria carótida direita, e a pressão pode aumentar na aorta ascendente e no coração, levando ao desenvolvimento de hipertrofia ventricular esquerda, reduzindo significativamente o fluxo na artéria carótida comum esquerda. No entanto, um fluxo sanguíneo quase idêntico é observado nas artérias carótidas direita e esquerda no camundongo submetido a cirurgia simulada. Os parâmetros relacionados à hipertrofia resultante são facilmente observados nos corações significativamente aumentados e deformados de camundongos submetidos à ligadura MTAC, bem como na sua sobrevida geral reduzida.

Essas alterações são ainda observadas ao nível celular, incluindo um aumento no tamanho das células musculares cardíacas e fibrose nos camundongos MTAC, em comparação com animais não ligados. Uma vez dominada, esta técnica pode ser concluída em cinco a dez minutos, se realizada corretamente. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar-se de ter cuidado para não danificar os vasos.

Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como induzir hipertrofia ventricular esquerda por meio da constrição transversa do arco aórtico, utilizando um procedimento cirúrgico simples que não requer ventilação artificial.