Um novo uso da ultra-sonografia tridimensional de alta frequência para caracterização de gravidez precoce no Mouse

O objetivo geral deste procedimento de imagem por ultrassonografia é detectar, monitorar e caracterizar a gravidez precoce no camundongo. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área da biologia reprodutiva murina e a estabelecer o crescimento, desenvolvimento e viabilidade das gestações precoces em camundongos. A principal vantagem dessa técnica é que essas gestações podem ser caracterizadas e fenotipadas in vivo, sem interrupção da gravidez do camundongo, permitindo a coleta longitudinal de dados.

Em geral, indivíduos novos neste método terão dificuldade em manter todas as imagens em um único plano. Isso se deve aos pequenos movimentos incrementais necessários no transdutor de ultrassom. Comece preparando o aparelho de ultrassom.

Ligue o transdutor e, em seguida, conecte o estágio motor 3-D ao transdutor. Depois, fixe a sonda no suporte do transdutor. Agora, posicione o camundongo em decúbito dorsal sobre a plataforma de monitoramento.

Administre anestésico por meio de cone nasal e fixe suavemente todas as patas nos sensores de monitoramento da frequência cardíaca na plataforma. Em seguida, aplique cerca de um ou dois mililitros de gel de transmissão ultrassonográfica sobre o abdômen. Depois, posicione a sonda de ultrassom no abdômen inferior utilizando o estágio motor manual.

Usando o ultrassom, localize a bexiga, que deve aparecer como um círculo escuro cheio de conteúdo alimentar logo acima da abertura vaginal. Uma vez localizada a bexiga, mova lentamente a sonda em direção cefálica para visualizar o útero gravídico, que deve apresentar-se com formato cilíndrico e áreas arredondadas nos locais da gestação. Isso pode ser descrito como semelhante a pérolas em uma corrente.

Agora, prossiga com a imagem em 2-D. Após identificar o útero gravídico, comece no local da gestação mais próximo à bexiga e mova-se lentamente e sequencialmente em direção cefálica para determinar a localização de todos os locais gestacionais. Salve a imagem.

Se o rim, o baço ou o fígado estiverem visíveis, então o corte está muito cefalado. Reposicione a sonda mais próxima da bexiga e salve a imagem. Em seguida, visualize o outro cornete uterino da mesma maneira.

Congele a imagem quando o quadro de ultrassom estiver no centro da gestação ou do local de implantação e salve a imagem para análise. Agora ou posteriormente, utilize as imagens salvas para medir as posições de implantação, usando a reação deciduática hiperecogênica como marcador. Clique manualmente na ferramenta de medição e clique na localização de um local de implantação.

Em seguida, arraste o cursor até o próximo local de implantação e clique novamente para desenhar uma linha. O software então informa o comprimento da linha. Após todos os locais de implantação serem medidos, utilize a mesma técnica e prossiga para medir o tamanho do saco gestacional e o tamanho do embrião.

Após a aquisição de imagem 2-D, posicione a sonda em uma área que corresponda aproximadamente ao ponto médio da imagem 3-D desejada. Por exemplo, ao realizar a imagem de uma maçã em 3-D, posicione a sonda no miolo. Uma vez que a sonda esteja corretamente posicionada, realize uma aquisição 3-D.

A plataforma motora 3D percorrerá esta distância ao longo do útero em uma série de etapas ou quadros. Conforme a varredura é obtida, certifique-se de que as estruturas pretendidas sejam completamente capturadas na varredura. Após coletar a varredura, carregue-a para o processamento de imagem.

Escolha os métodos paralelo e rotacional para processamento, os quais carregarão todos os quadros de imagem 3-D em uma única caixa 3-D. Em seguida, selecione o tamanho do passo de 0,08 milímetros, depois comece em uma extremidade do bloco de imagem e percorra todos os quadros para se familiarizar com os dados. A seguir, comece em uma extremidade da pilha e trace manualmente o contorno de um objeto de interesse.

Em seguida, prossiga para o quadro seguinte e novamente trace manualmente o contorno do objeto. Continue este processo até que todos os quadros tenham sido anotados manualmente. Após concluído, clique em finalizar para obter uma imagem tridimensional e o cálculo do volume do objeto.

Para a imagem, escolha entre uma sobreposição em malha ou sólida. Em seguida, opte por manter ou remover as informações de imagem ao redor para maior clareza. O ultrassom de alta frequência pode detectar o desenvolvimento de um sítio de implantação tão cedo quanto 5,5 dias após a concepção.

Usando o endométrio desidualizado mais claro e hiperecóico como marcador dos locais de implantação, o número de locais de implantação e o espaçamento entre esses locais serão quantificados no 6,5º dia após a concepção. À medida que a gestação progride até o 7,5º dia após a concepção, o saco gestacional mais escuro e hipoeicogênico e o polo embrionário tornam-se facilmente identificáveis. Foram realizadas reconstruções tridimensionais do útero de camundongo no 6,5º dia após a concepção, em formatos de sobreposição de malha e sólida.

Aos 7,5 dias após a concepção, a varredura 3D foi igualmente reveladora. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como obter imagens ultrassonográficas precisas em 2D e 3D, para caracterizar uma gestação sem interrupções. O tempo total necessário para a aquisição de uma ultrassonografia, em 2D e 3D, é de aproximadamente 10 a 20 minutos nas mãos de um usuário experiente.

Ao realizar este procedimento, é importante lembrar-se de manter os movimentos pequenos e incrementais. Esta técnica abriu caminho para que pesquisadores explorassem fenótipos de gravidez normais e anormais no camundongo.