Usando embrião de frango como ferramenta poderosa na avaliação de cardiotoxi cidades do desenvolvimento

Olá a todos. Sou Qixiao Jiang, Professor Associado do Departamento de Toxicologia da Escola de Saúde Pública da Universidade de Qingdao. Em nome do meu grupo de pesquisa, vou apresentar os ativos do uso do embrião de frango no desenvolvimento da nossa avaliação de toxicidade cardio.

O embrião de frango é um modelo clássico de desenvolvimento que tem múltiplas vantagens como fácil manipulação, alta acessibilidade, sistema independente fechado, etc. Trabalhando com múltiplos poluentes ambientais, como o ácido tânnico fenólico. Escapamento diesel, particularmente a matéria nos nano tubos de carbono.

Temos um múltiplo método de exposição estabelecido em laboratório, mas para uma causa maior, as avaliações funcionais também são realizadas rotineiramente. Neste vídeo, vou mostrar os detalhes dos métodos de exposição e os métodos de avaliação funcional morfológica para você. Sinta-se livre para entrar em contato conosco se você estiver interessado.

Obrigado. Aqui estão nossos métodos de exposição que posso apresentar a você. Agora, o primeiro método que vou introduzir é uma injeção de célula de ar, onde você vai injetar diretamente na célula de ar.

Limpe a superfície dos ovos com solução de poli-iodeto. Esta é uma solução de poli-iodeto comercialmente disponível, diluída com água deionizada, 1/5. E então, eu seco a casca de ovo com papel de tecido, sem esfregar.

É importante porque esfregar vai quebrar seu revestimento de camada protetora na parte externa da concha. Limpei todos os ovos na sala escura e a marca da célula de ar com um lápis. Exclua ovos com rachaduras na casca.

Também exclua ovos com células de ar ao lado. Se isso tem uma ponta cega, esses são altamente improváveis de chocar normalmente. Higienize a área da célula aérea, bem como a sonda metálica, com 75% de álcool.

Limpe-os e faça um pequeno buraco no centro da área da célula de ar com a sonda. Não enfie a sonda profundamente na célula de ar. Em vez disso, só quebre a casca com a ponta da sonda.

Se o orifício ainda não for grande o suficiente, quebre a casca novamente nas proximidades do orifício existente, até que seja grande o suficiente para permitir a inserção da ponta. Insira a ponta da pipeta no orifício com a ponta tocando a membrana interna. Lentamente, injete a mistura e segure-a lá por pelo menos 10 segundos.

Isto é para permitir que o óleo dispensado seja totalmente dispensado. E então remova a ponta. Agora, sele o buraco com um pincel e uma gota de parafina derretida.

Tenha cuidado para não pingar parafina derretida na memória interna. Uma vez selados, coloque os ovos na incubadora até atingirem o estágio embrionário desejado. O segundo, o método que vou introduzir é a injeção micro.

Em primeiro lugar, os ovos precisam ser limpos e manuseados como descrito na seção de injeção de ar. Este procedimento precisa ser realizado em capô esterilizado. Esterilize a área da célula de ar e os instrumentos com acetona.

Faça um pequeno buraco no centro da área da célula aérea com a sonda metálica. Não coloque a sonda profundamente na célula de ar, ou a memória interna pode estar danificada. Em seguida, use o mesmo processo para ampliar cuidadosamente o orifício até que o diâmetro seja de aproximadamente dois milímetros.

Isso pode permitir a confirmação da razão da memória interna. Em seguida, carregue a solução no micro injetor e insira cuidadosamente a agulha através do orifício na membrana interna por aproximadamente três milímetros. Dispense suavemente a solução e, em seguida, remova a agulha.

Mantenha a agulha o mais perpendicular possível. Sele o orifício com um pequeno pedaço de fita. Cubra completamente o orifício para evitar a desidratação e a morte do embrião durante a incubação subsequente.

O terceiro método que vou introduzir é a infusão de células aéreas. onde você incutir um contaminante de gás na célula de ar. Limpe e manuseie os ovos conforme descrito na seção de injeção de células de ar.

E então você pode ler ovos até o dia 17. Manuseie os ovos no dia 17 para marcar a área da célula aérea. No dia 18, retire os ovos da incubadora, esterilize a área da célula de ar e os instrumentos, com acetona.

E então cuidadosamente fazer dois pequenos buracos em dois lados da célula de ar. Uma é para injeção de gás ou aerossol. A outra é para expandir nosso ar.

Controle cuidadosamente o tamanho dos orifícios, de modo que o lado do orifício de injeção seja suficiente para que a agulha do cateter seja inserida, enquanto o diâmetro do orifício em expansão deve ser um pouco maior. Aproximadamente um milímetro de diâmetro. Este é o saco de amostra que usamos para segurar o gás alvo ou aerossol.

Você pode substituir com qualquer dispositivo que você usar. Despeje suavemente 10 mL de gás ou aerossol em uma seringa. E então, cuidadosamente anexar a seringa à nossa agulha de cateter com o controle remoto da agulha interna para que ela seja macia.

Insira suavemente esta agulha do cateter no orifício de infusão. Uma vez lá, aplique pressão contra a agulha do cateter. Isto é para minimizar o vazamento do local da injeção.

Outro dedo pode ser colocado ao redor com o orifício de expulsão para a sua confirmação de infusão. Se você fizer a infusão suavemente, o fluxo de ar do orifício de expulsão deve ser facilmente sentido. É o ar original na célula aérea sendo expulso.

Quando a infusão estiver pronta, sele os dois orifícios imediatamente. Essas fitas e o retorno dos ovos à sua incubadora. Posso apresentar nosso processo de avaliação de ponto final.

Anestesiar totalmente os animais com pentobarbital de 33 mg/kg. Injeção ip testada pelas aberturas. Em seguida, coloque galinhas na mesa de operação.

Esterilize a área do abdômen e os eletrodos com etanol. Em seguida, insira dois eletrodos de agulha de dois lados do abdômen sub continuamente. Certifique-se de que as agulhas não entram na cavidade do abdômen levantando um pouco a pele.

E insira a agulha de lá. Uma vez inserida, empurre cuidadosamente a agulha para a frente até atingir o lado da cavidade torácica. Certifique-se de que a agulha não vá fundo no corpo ou se retire da pele.

Em seguida, faça as medições com um instrumento eletrocardiográfico. Outros instrumentos de seminário capazes de ECG também podem ser usados. Este é o nosso segundo método de avaliação de pontos finais é mapear para Motrin.

Esta é a seção transversal do coração no caminho do HME. Este é o ventrículo certo com o que vamos medir. Para fazer isso, usamos duas réguas.

Régua 1, e régua 2. Agora nós apenas copiamos a régua um para a tela e redimensioná-lo para o tamanho apropriado e, em seguida, girar isso. E nós movemos para que as duas extremidades da linha horizontal repousam nas duas extremidades das 3 paredes do ventrículo direito.

E agora temos sete linhas de medição que atravessam nossa parede de ventrículo direito. Agora nós copiamos a régua secundária para a imagem também. Nós também redimensioná-lo um pouco e girar e substituir isso para que ele seja colocado da mesma forma.

Esta linha horizontal vai paralelamente com a parede externa do ventrículo direito. E o perpendicular atravessaria o ponto onde as linhas de matéria branca do governante se encontram com a parede interna ou o ventrículo direito. E então fazemos pontos de medição para que possa ser medido mais tarde com imagem J.Repetimos esse processo 7 vezes por amostra, de modo que nossa medição representativa do ventrículo direito.

Vou te mostrar um resumo dos resultados atuais. Esta é a injeção de PFOA no ovo antes da incubação, e você pode ver que com o aumento dos da injeção a concentração de soro LPF no soro aumentou efetivamente. Pela demonstração, a eficácia da micro injeção.

Você pode ver que A é controle, e o B, é onde o antivírus expresso em grande fluorescência q proteína foi injetado. Você pode ver uma forte fluorescência. E esta é a demonstração para a eficácia da infusão de epitélio.

Você pode ver que com a infusão, mudanças dramáticas de fibra óptica foram observadas no tecido do miocárdio. Ok. E você também pode ver que os intervalos R-R das galinhas incubadoras 0, 1 e 2 semanas. Também mudou significativamente após a infusão com escapamento diesel.

Indicando que você leva em conta isso, este método. Aqui, você também pode ver que a eficácia da infusão de epitélio neste exemplo. você pode ver que os ventrículos certos do coração efetivamente aumentaram depois de ser aerossol infundido com escape diesel.

E também, claro, aqui estamos usando os métodos histomorfométricos. Nós apenas mostramos a você. Isso é bastante eficaz. Ok.

Estes são todos os métodos que vou apresentar a você. Espero que isso possa facilitar o trabalho de outras pessoas com embriões de frango como uma poderosa ferramenta de pesquisa na Toxicologia do Desenvolvimento. Tenha um bom dia.