Abordagem Técnica para Análise Estrutural de um Composto Desconhecido em Líquido Oral Huoxiang Zhengqi Baseada em Espectrometria de Massa por Armadilhas Iônicas Lineares

Foi desenvolvido um método de fragmentação por espectrometria de massa em múltiplos estágios para identificar e caracterizar constituintes complexos no líquido oral Huoxiang Zhengqi. A espectrometria de massa tradicional em tandem não consegue resolver estruturas compostas desconhecidas. Espectrometria de massa multi-estágio proporciona fragmentação mais profunda para uma elucidação estrutural abrangente.

Para preparação para cromatografia líquida de ultra desempenho, comece clicando duas vezes no software Xcalibur para abri-la. Clique em Pronto para Download, depois em Controle Direto. Na janela pop-up, clique na coluna Módulo de Bombeamento e defina a porcentagem B em 50, a porcentagem C a zero e a porcentagem D a zero.

Clique no botão Motor para colocar no estado ligado. Clique em mais opções, defina o fluxo para cinco mililitros por minuto e o tempo para 180 segundos na janela pop-up. Clique em Eliminar, depois em Executar apesar do aviso na janela pop-up.

Volte à janela principal do software e clique em Visualização de Configuração de Sequências. Clique em Abrir para importar o modelo editado. Clique com o botão direito no nome do método e clique em Abrir Arquivo para abrir o arquivo do método.

Na janela principal do software, defina a primeira massa para 100 de relação massa-carga e a última de 1200 de massa-carga. Clique em Salvar para salvar o método. Clique em Executar Sequência, selecione Esperar no sistema de sequência após definir e depois clique em Ok na janela pop-up.

Espere a injeção da amostra ser concluída. Clique em Visualização do Roteiro, depois clique no ícone do Navegador Qual para abrir a janela do Navegador Qual. Clique em Abrir, selecione o arquivo de dados com formato RAW e clique duas vezes para abri-lo.

Clique com o botão direito na janela do cromatograma e clique em Faixas. Na seção filtro de varredura, selecione ESI full MS. E na seção de tipos de enredo, escolha TIC e clique em Ok. Observe o cromatograma iônico total exibido.

Clique no botão de pino na janela do espectro de massa. Na janela do cromatograma, clique e deslize para selecionar uma região temporal com a maior abundância relativa relativa. Observe os íons do espectro de massa correspondentes e registre os valores da razão massa-carga.

Abra a janela de configuração do instrumento. Localize a coluna de massa pai do N igual a duas linhas e insira o valor da relação massa/carga previamente registrado. Clique em Salvar para salvar o método.

Retorne à visualização de configuração de sequência na janela do software, modifique o nome do arquivo e clique em Salvar para salvar a sequência. Clique em executar sequência, depois clique em Ok na janela pop-up. Espere a injeção da amostra ser concluída.

Vá até a janela do Navegador Qual, clique em Abrir, selecione o arquivo de dados RAW e clique duas vezes para abri-lo. Clique com o botão direito na janela do cromatograma e clique em Faixas. Na seção de filtro de varredura, selecione ESI completo MS.In a seção de tipo de gráfico, escolha TIC e clique em Ok para exibir o cromatograma.

Na janela do espectro de massa, clique no botão do pino de pressão. Selecione uma região temporal com a maior abundância relativa e observe os íons do espectro de massa. Registre os valores da relação massa-carga para o próximo nível de espectrometria de massa.

Na janela de configuração do instrumento, localize a coluna de massa pai do N igual a três linhas e insira o valor da relação massa/carga previamente registrado. Clique em Salvar para salvar o método. Como demonstrado anteriormente, repita o procedimento de visualização dos dados para completar a injeção e análise da amostra.

Após abrir o arquivo de dados brutos, clique no botão de pino na janela do espectro de massa e observe os picos de íons fragmentados que mudam. Na janela de configuração do instrumento, vá até a coluna Tipo de Ato e clique em CID. Depois, selecione PQD ou ETD para mudar o modo de colisão.

Na coluna Energia de Colisão Normalizada, clique em 35 e mude para 50 para ajustar a energia de colisão. Desenhe o íon pai e os íons de fragmentação no software de desenho, incluindo a estrutura do íon pai, nome do composto e valor da razão massa-carga. Como exemplo, identifique o fragmento na razão massa-carga 461,15 e examine o íon precursor com razão massa-carga 623,21 no espectro de espectrometria de massa tandem.

Calcule a diferença de massa. Analise a fragmentação adicional do íon intermediário com a razão massa-carga de 461,15. Para gerar um íon produto com relação massa-carga 315,09 no cubo MS, calcule a diferença de massa com base nas análises de posição de ligação e ligação de todos os fragmentos.

Deduzir a estrutura final do composto desconhecido com uma relação massa-carga de 623,21. O composto desconhecido, com relação massa-carga de 623,21, perdeu uma unidade hexosa e gerou um íon fragmento com relação massa-carga de 461,15. A fragmentação por espectrometria de massa terciária do intermediário produziu neobyakangelicol com uma relação massa-carga de 315,09 após a perda de uma unidade de rhamnose.

A espectrometria de massa quádrupla do neobyakangelicol produziu um íon fragmentado com relação massa-carga de 135,09. A estrutura do composto desconhecido foi deduzida a partir do padrão de fragmentação em múltiplos estágios. Os compostos desconhecidos com razões massa-carga de 545,41 e 365,12 foram deduzidos usando o mesmo método de fragmentação.

Esse protocolo permite a análise detalhada e a caracterização estrutural de compostos mais desconhecidos em ervas medicinais e medicamentos patenteados chineses. Uma compreensão clara da estrutura central dos principais componentes é essencial para fragmentação e análise precisas usando esse protocolo. Esse procedimento possibilita o desenvolvimento de um banco de dados de fragmentação por espectrometria de massa em múltiplos estágios para melhorar a identificação de compostos e a análise comparativa.