Мультиспектральные в режиме реального времени флуоресценции для Интраоперационная Обнаружение узла Стража Лимфатические в гинекологической онкологии

Общая цель следующего эксперимента заключается в интраоперационном определении сторожевого лимфатического узла при раке шейки матки или раке вульвы. Сторожевой лимфатический узел представляет собой первый дренирующий лимфатический узел, отводящий лимфу от опухоли. В данной процедуре флуоресцентный агент (индигокармин и зеленый краситель или ICG) вводится вместе со стандартным синим красителем вокруг первичной опухоли.

Раствор будет перемещаться к первому дренирующему лимфатическому узлу. Специально разработанная система интраоперационной мультиспектральной флуоресцентной камеры, установленная в операционной до начала операции, регистрирует события лимфотока in vivo в режиме реального времени на основе флуоресцентного сигнала, опираясь на результаты in vivo и ex vivo, указывающие на интенсивность флуоресцентного сигнала, а также на классический метод обнаружения по синему окрашиванию. Это позволяет хирургу точно выполнить иссечение сторожевого лимфатического узла.

Основное преимущество данной методики по сравнению с существующими методами заключается в том, что она представляет собой одноэтапную процедуру, в ходе которой визуализация и иссечение лимфатических узлов осуществляются непосредственно во время операции. Эта платформенная технология может усовершенствовать современные концепции в хирургической онкологии, не только предоставляя хирургу анатомическую информацию, но и обеспечивая динамическое флуоресцентное отслеживание в режиме реального времени in vivo. Для выполнения данного протокола необходимо подготовить интраоперационную мультиспектральную флуоресцентную камеру, которая обычно модифицируется под конкретные задачи.

Система, представленная здесь, была разработана в Институте биологического и медицинского имиджинга в Мюнхене. В тесном сотрудничестве с SEARCHs для возбуждения флуоресцентного зонда используется лазер. Фильтры камеры настроены на ближнюю инфракрасную флуоресценцию с длиной волны возбуждения 750 нанометров и длиной волны эмиссии 800 ± 20 нанометров; при этом свет эмиссии проходит через оптическую систему, где он разделяется на видимый свет, собственную флуоресценцию и ближнюю инфракрасную флуоресценцию.

ПЗС-камеры выровнены таким образом, чтобы регистрировать отдельные пучки света, что позволяет обрабатывать мультиспектральные сигналы со всех камер для получения точных количественных данных о биораспределении флуорофора четыре. Данная установка также корректирует артефакты. Компьютерные мониторы на пульте управления и в операционной позволяют отображать цветовые и флуоресцентные сигналы в виде отдельных изображений, а также в виде одного совмещенного изображения в стерильных условиях.

Приготовьте флуоресцентный контрастный агент индоцианин зеленый в концентрации 0.5 mg/mL в стерильной дистиллированной воде. Не используйте физиологический раствор, так как это приводит к немедленному осаждению реагента; храните раствор в темном прохладном месте, чтобы предотвратить выцветание и сохранить стабильность ICG. Для минимизации помех стандартному ходу операции установите и запустите систему камер в операционной до начала хирургического вмешательства, а также проверьте подключение к экранам высокого разрешения для использования во время операции. Накройте камеру стандартными стерильными чехлами, соблюдая стерильные процедуры и условия, как показано на видео.

Перед введением флуоресцентного агента расположите камеру над пациентом и обеспечьте обзор интересующей области. Отрегулируйте зум для фокусировки камеры и выключите свет в операционной для более точного обнаружения флуоресцентного сигнала.

В шприц Lotus наберите 1 мл ICG в концентрации 0,5 мг/мл и равный объем стандартного синего красителя. Осторожно введите флуоресцентный агент в четыре квадранта вокруг первичной опухоли, стараясь не допустить пролива; в случае попадания ICG на хирургические перчатки просто замените их в ходе процедуры.

Перемещайте камеру таким образом, чтобы обеспечить непрерывную запись интересующей области. Получите статические изображения или видео в реальном времени, фиксирующие лимфоток и появление флуоресцентного сторожевого лимфатического узла. Время экспозиции от 180 до 200 миллисекунд обеспечит хорошее качество видеозаписей.

Сохраните все данные на компьютере соответствующим образом для последующего анализа. Визуальный осмотр на наличие синего окрашивания, вызванного введением красителя Patent Blue, проводится как стандартная часть процедуры с использованием одновременно зарегистрированных флуоресцентных изображений в качестве ориентира. Выполняется эксцизия сторожевого лимфатического узла в режиме реального времени.

Визуализация в режиме реального времени помогает обнаружить флуоресцирующие узлы в неожиданных локализациях; при этом последовательно получают изображения ex vivo всех иссеченных лимфатических узлов для выявления флуоресценции. При создании статических изображений можно использовать более длительное время экспозиции. Sentinel-узел направляется на гистопатологический анализ для определения наличия или отсутствия опухолевых клеток.

Эффективность интраоперационного обнаружения сторожевого лимфатического узла с помощью данного протокола мультиспектральной флуоресцентной визуализации продемонстрирована на этом примере мультиспектрального флуоресцентного изображения лимфатического узла in vivo при раке вульвы. Четко визуализируется флуоресцирующий лимфатический узел в паховой области перед иссечением. В этом коротком видеоролике мы демонстрируем обнаружение сторожевого лимфатического узла в режиме реального времени на основе флуоресценции у пациентки с раком шейки матки.

Здесь представлено ex vivo изображение лимфатического узла при раке шейки матки. Цветное изображение лимфоузла было совмещено с флуоресцентным изображением того же самого узла с использованием псевдоцветовой шкалы для получения четкого снимка с высоким соотношением сигнал/фон. Эта методика не только открыла исследователям в области хирургической онкологии путь к резекции сторожевого лимфатического узла под визуальным контролем, но и создала возможности для специфической таргетной визуализации опухоли с целью оценки границ новообразования и проведения индивидуальных вмешательств у пациентов с солидными опухолями и возможными локальными регионарными метастазами.

Таким образом, после просмотра этого видео у вас должно сложиться четкое представление о методе интраоперационной флуоресцентной визуализации сторожевых лимфатических узлов в режиме реального времени при гинекологическом раке.I.