Диагностическое вскрытие и выбранной коллекции тканей и образцов у крыс и мышей

Общая цель данной процедуры заключается в проведении базового некропсии грызуна. Сначала фиксируется основная информация о животном. Вторым этапом процедуры является исследование внутренних органов.

Третьим этапом является сбор образцов, таких как органы или мезентериальные лимфатические узлы. В конечном итоге состояние здоровья животного может быть определено с помощью гистопатологии или других методов. Как правило, люди, которые впервые проводят некропсию, сталкиваются с трудностями, так как анатомия грызунов изучается непосредственно в процессе работы.

Эти методы могут помочь ответить на ключевые вопросы о состоянии здоровья животных в исследовательской колонии. Визуальная демонстрация данных методик необходима, так как изучение расположения различных тканей, а также способов дифференциации нормальных и патологически измененных тканей требует времени. Перед эвтаназией животного соберите сведения о его анамнезе и зафиксируйте текущие характеристики, такие как физическое состояние, поведение, пол, возраст, вес, линия и так далее.

Эта запись содержит важные сведения о возрасте животного для специалиста, который будет проводить исследование тканей перед эвтаназией. Убедитесь в использовании соответствующих средств индивидуальной защиты. Подготовьте препаровальный стол, пинцет, ножницы, этикетки для контейнеров, фиксатор, среды и сосуды для сбора образцов.

После эвтаназии животного оцените его общее состояние, проверьте наличие аномалий кожи и шерстного покрова, признаки истощения и обезвоживания. Также проверьте животное на наличие следов искусственных манипуляций, имплантатов или хирургических рубцов. Затем с помощью диссекционного микроскопа детально осмотрите все наружные отверстия.

К ним относятся ушные раковины, глаза, нос, рот, анальное отверстие и половые органы. Теперь положите животное на спину на препарировочную доску, приподнимите кожу пинцетом и с помощью ножниц сделайте разрез кожи от анального отверстия до подбородка. Затем раздвиньте кожу в стороны и разрежьте брюшную стенку и грудную клетку.

Обнажите органы грудной полости, сделав два латеральных разреза вдоль каждой стороны грудной клетки. Разрежьте диафрагму. Затем удалите грудную клетку, сделав поперечный разрез по верхней части грудины.

Теперь осмотрите обнаженные органы грудной и брюшной полостей. Отметьте любые изменения цвета, необычные запахи, особенности размера, различия, а также отсутствие или смещение органов. Оцените консистенцию поверхностей органов и зафиксируйте наличие любых тканевых образований или заполненных жидкостью полостей.

Также отметьте наличие жидкости в любой из полостей. Продолжите обследование желудочно-кишечного тракта. Осмотрите брыжейку на предмет увеличенных лимфатических узлов или тканевых образований.

Опишите содержимое желудочно-кишечного тракта и внимательно проверьте стенки на предмет утолщения, наличия образований или кровоизлияний. Чтобы исследовать внутреннюю структуру почек, с помощью лезвия сделайте продольный разрез левой почки и поперечный разрез правой почки со смещением от срединной линии. Осмотрите паренхиму на наличие любых патологических изменений.

Теперь изучите мочеполовую систему самцов. Определите семенные пузырьки, семенники, придатки семенников, мочеточники и парауретральные железы у самок. Определите матку, яичники и мочеточники.

Осмотрите мочеполовую систему на наличие закупорок, скоплений жидкости, кровоизлияний или других патологий. После завершения осмотра изолируйте и вырежьте целевые органы для дальнейшего исследования. Как правило, по мере извлечения собирают сердце, печень, почки и селезенку.

Погрузите каждый орган в фиксатор или выполните первые этапы протокола, требующего использования этих тканей (например, замораживание или иммуногистохимический анализ), для обеспечения надлежащей фиксации. Как правило, ткани погружают в консервант, такой как 10%NBF, в соотношении 20 объемов фиксатора к одному объему ткани. При работе с крысами сначала собирайте бронхиальный аспират, а затем назальный аспират.

Начните с отсечения кожи и подкожных тканей от шейной области, чтобы обнажить слюнные железы и мышцы шеи. Затем удалите эти ткани для обнажения трахеи. Сделайте разрез длиной 3 mm в трахее и введите в просвет трахеи, направляя ее по четвертям, пипетку с 1 mL пробоотборного раствора.

Медленно промойте трахею и легкие промывочной жидкостью три раза. Затем аспирируйте жидкость и извлеките пипетку из трахеи. Часть жидкости останется в легких и не вернется в пипетку.

Таким образом, при необходимости получения большего количества жидкости повторите этот процесс. Для проведения тестирования на мышах: чтобы взять образец назального или бронхиального аспирата, обеспечьте доступ к носоглотке, используя стерилизованные ножницы.

Перережьте височно-нижнечелюстной сустав и отведите нижнюю челюсть от верхней, чтобы открыть носоглоточное соустье для сбора назального аспирата. Введите пипетку, заполненную 1 mL пробоотборной жидкости, в носоглоточное соустье мыши или в просвет трахеи крысы. Пипетку следует направить краниально и ввести внутрь.

Таким образом, наконечник касается небной части носовой полости. После этого медленно введите пробоотбирающую жидкость. По мере поступления жидкости в носовую полость она будет образовывать мениски у носового отверстия, а также станет видна через полупрозрачное нёбо полости рта.

Однако, если жидкость вытекает через рот, измените положение пипетки. После полного введения введите пробоотбирающую жидкость из носовой полости обратно в пипетку, а затем извлеките пипетку. Начните с захвата трахеи пинцетом и перережьте её непосредственно над пинцетом.

Затем осторожно потяните трахею вверх, перерезая тканевые связи, пока весь комплекс тканей грудной клетки не будет иссечен. Теперь разложите легкие на рабочей поверхности и неплотно завяжите вокруг трахеи фрагмент шовного материала или нити. Не затягивайте узел, иначе вы не сможете ввести иглу в трахею.

Теперь наполните шприц фиксатором и введите иглу в отверстие трахеи, зафиксировав трахею на игле. С помощью пинцета медленно заполняйте легкие фиксатором до их полного расправления. Объем фиксатора будет варьироваться в зависимости от возраста, линии и состояния здоровья животного.

Если ткани недостаточно раздуты, они будут выглядеть плоскими; если раздуты слишком сильно, после наполнения из ткани начнет просачиваться пенистая жидкость — в этом случае затяните шовный материал или нить вокруг трахеи, чтобы предотвратить обратный ток фиксатора из легких. Затем поместите раздутые легкие в фиксатор. Положите тушку на чистый препарировальный столик в положении на брюшную сторону и с помощью ножниц и пинцета удалите кожу и мышцы, покрывающие область сердца.

Затем обезглавьте тушку с помощью маленьких ножниц. Введите нижнее лезвие в большое затылочное отверстие (foramen magnum) и разрежьте череп по срединной линии движением снизу вверх. После этого с помощью пинцета обнажите головной мозг, раздвинув створки черепа.

Если патологоанатом предпочитает выполнять серийные срезы мозга непосредственно в черепе, немедленно поместите череп с обнаженным мозгом в 10%NBF. В противном случае зажмите голову в области носа пинцетом или пальцами и осторожно переверните череп, чтобы ткани выпали под действием силы тяжести. Осторожно проведите изогнутым пинцетом вдоль внешнего края головного мозга, начиная от обонятельных долей.

Продолжайте вести пинцет вдоль черепа в направлении мозжечка, осторожно зажимая нервы тем же пинцетом. После извлечения мозга поместите его в фиксатор. Чтобы найти брыжеечные лимфатические узлы, сначала найдите крупную коммообразную слепую кишку кишечника. Брыжеечные лимфатические узлы представляют собой желтые овальные или сферические образования из ткани в брыжейке, прилегающей к слепой кишке.

Они зачастую немного толще и плотнее по текстуре, чем окружающий брыжеечный жир и брыжейка. Для первоначального дифференцирования тканей может быть полезен диссекционный микроскоп, однако с опытом в нем не будет необходимости. С помощью пинцета и ножниц изолируйте лимфатические узлы брыжейки, затем перенесите их в пробирку для хранения с целью последующего использования для культивирования, ПЦР или гистопатологического исследования.

После завершения протокола патологоанатом или ученый получают следующие материалы: письменный отчет об объективном и субъективном состоянии животного на момент эвтаназии, объективное описание тканей до их фиксации, все основные органы брюшной и грудной полостей в фиксаторе, головной мозг, брыжеечные лимфатические узлы, а также образцы назального и бронхиального аспиратов. При наличии соответствующего навыка сокращенный некропсийный осмотр может занять менее 30 минут.

При выполнении данной процедуры важно не забывать фиксировать наблюдения за состоянием животного и его тканей. После просмотра этого видео вы должны получить четкое представление о том, как провести полный некропсии грызуна, включая забор перфузированных легких, мезентериальных лимфатических узлов и головного мозга.