Свет Анализ предпочтений по изучению врожденных и суточного Регулируемые Photobehavior в Drosophila Личинки

Общая цель данного эксперимента состоит в том, чтобы проверить врожденное и циркадное фотоповедение лавы дрозофилы с помощью теста на предпочтение светлой темноты. Это достигается путем предварительного выращивания экспериментальных личинок в определенных светлых темных условиях, чтобы установить начальные циркадные часы у личинок. Далее личинки переключаются в постоянную темноту, что позволяет личиночным циркадным часам свободно бегать.

Оказавшись на стадии питания L-3, лава сортируется по группам, чтобы проверить их световые предпочтения в разные циркадные временные точки. Получены результаты, которые показывают врожденное и циркадное предпочтение света на основе расчета индекса предпочтений и сравнения между временными точками и экспериментальными группами. Хотя этот метод может дать представление о врожденной и циркадной регуляции светочувствительности и обработки фотоповедения, он также может быть применен к другим системам, таким как обоняние, кассация, химиотерапия, термотаксис.

Кроме того, его можно модифицировать для тестов на обучение и память. Продемонстрируют методику Алина и БМА Чтобы аспиранты из моей лаборатории собрали яйца, дали возможность спаривающимся взрослым мухам отложить в течение 12 часов на свежие напильники и переложить их в новые флаконы. Продолжайте переводить взрослых каждые 12 часов в течение 12-часового цикла света и 12 часов темноты.

Храните 12-часовой сбор яиц в инкубаторе. Для эксперимента вырастите животных на ранней стадии L 3 личинки. Эти кормовые лаки доступны от 84 до 108 часов с момента яйца.

Правильная стадия LAE имеет решающее значение для успеха эксперимента. С конца L-3 LAE изменила поведение фото, чтобы проверить циркадные компоненты зрительного поведения. За 48 часов до тестирования и непосредственно перед тем, как личинки станут субъективными, положите собранных личинок в картонную коробку.

Затем перенесите коробку в инкубатор постоянной темноты на 48 часов до начала эксперимента, эти личинки должны оставаться нетронутыми в отведенном для этого месте. Подготовьте крышку девятисантиметровой чашки Петри, используя 20-сантиметровый квадрат, разделенный на четыре квадранта. В качестве руководства.

Приклейте 10-сантиметровые квадраты алюминиевой фольги на противоположные квадранты и обмажьте их черной лентой. Обязательно закройте край крышкой. Далее клей, 20-сантиметровый квадрат, разделенный на четыре квадранта под источником света на столе.

Отметьте на листе окружность тестовой чашки, которая будет служить ориентиром для равномерного смещения. Установите над чашкой Петри светодиодную лампу с помощью железной опорной подставки. Отрегулируйте высоту таким образом, чтобы вся тестовая пластина была равномерно освещена.

Отрегулируйте интенсивность света на испытательном полигоне в диапазоне от 350 до 760 люкс, дополнительно отрегулировав высоту лампы или используя регулируемый источник питания. Экспериментальная комната должна быть освещена красным светом и иметь ту же температуру, что и в том месте, где выращиваются животные. Флаконы выдерживались два дня в постоянной темноте.

Соберите лаву в свою пищу с помощью лопатки из верхних пяти миллиметров корма. Выложите продукты на внешнюю сторону крышки чашки Петри. Добавьте к еде немного воды и аккуратно перемешайте ее лопаткой.

Добавьте каплю воды из-под крана в новую посуду с помощью кисти. Переложите личинок в каплю воды, чтобы промыть их. Затем с помощью влажной кисти соберите личинок с помощью влажной кисти.

Отбирайте только рано питающиеся L три личинки и избегайте поздних блуждающих L трех личинок. Перенесите выбранных личинок в центр тестовой пластины. Питающиеся L три личинки имеют передние шарообразные формы, которые открыты и выступают наружу.

В форме пальца. Задние сферические крылья имеют по три отверстия и четыре группы крупных ветвистых волосков. Слюнные железы простираются до второго брюшного сегмента.

После того, как 30 личинок были помещены в центр тестовой пластины, накройте ее подготовленной крышкой. Включите светодиодную лампу. Запустите таймер и дайте личинкам свободно перемещаться по тарелке в течение пяти минут.

Затем быстро снимите крышку и подсчитайте количество личинок в темном и в светлых квадрантах. Отметка положения каждой лавы может облегчить подсчет. Быстрая фотография также может помочь личинкам, демонстрирующим нечеткое предпочтение света, например, личинкам, ползающим по стенам или заимствующим в агар, следует учитывать как нейтральное предпочтение и добавлять к общему количеству личинок при расчете индекса светового предпочтения.

После подсчета личинок выбросьте пластину и используйте новую тестовую пластину для следующего эксперимента. После выполнения от 10 до 15 испытаний по каждому генотипу приступайте к анализу в соответствии с протоколом. Предпочтение светлой и темной лавы Canton ES сравнивалось в два разных циркадных времени.

CT zero и CT 12, субъективно, рассвет и сумерки личинки или стонут в течение 48 часов в стандартных условиях, а затем переходят в постоянную темноту на трое суток. Тестирование светлой темноты при температуре люкс 350 показало, что световая фоточувствительность была выше у личинок, протестированных при нулевой CT, по сравнению с личинками, протестированными на CT 12. Используя эту формулу, предпочтение темноты нулевой лавы CT составило 0,52 по сравнению с 0,36.

Личинки CT 12, сравнивающие индексы с помощью теста Вилкоксона, получают значимое значение P 0,023. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее понимание того, как проверить световое предпочтение личинки трофа в разных кругах и временных точках достижения этой цели. Вы должны быть в состоянии увлечь на стадии F трех личинок, проверить их светофобное поведение и рассчитать индекс светового предпочтения для статистического сравнения.