Получение высококачественных криорезов цельного кроличьего глаза
10 ноября 2023 г.
В этом протоколе описан надежный метод получения высококачественной криосекции цельных глаз кролика. В нем подробно описаны процедуры диссекции, фиксации, встраивания и разрезания глаз кролика, которые могут быть легко адаптированы для использования в любом исследовании с использованием иммуногистохимии на больших глазах.
Наши исследования сосредоточены на новых подходах к регенерации пигментного эпителия сетчатки. Считается, что дисфункция пигментного эпителия сетчатки играет центральную роль в патофизиологии многих глазных заболеваний, таких как дегенерация желтого пятна, поэтому регенерация этого слоя клеток привлекательна с терапевтической точки зрения. Визуализация структурной анатомии сетчатки с помощью иммуногистохимии имеет широкое применение в исследованиях сетчатки.
В нашей лаборатории мы обнаружили, что получение полезных результатов из глаз кроликов затруднено из-за тканевых артефактов, таких как прикрепление сетчатки и складки сетчатки. Несмотря на эти проблемы, существует очень мало протоколов, описывающих успешную обработку тканей сетчатки кролика. Этот протокол вносит несколько важных изменений в стандартные методы обработки тканей, которые приводят к превосходным тканевым срезам сетчатки кролика.
Это исследование может позволить ученым получить лучшие результаты от своих исследований, которые включают использование иммуногистохимии на моделях кроликов.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Обзор
В данном исследовании представлен усовершенствованный протокол получения высококачественных криосрезов целых глаз кролика, что имеет решающее значение для исследований с применением иммуногистохимического анализа сетчатки. Метод позволяет решить распространенные проблемы, связанные с возникновением артефактов ткани, и улучшает визуализацию структур сетчатки.
Основные компоненты исследования
Область исследований
- Регенерация ретинального пигментного эпителия
- Иммуногистохимия в исследованиях сетчатки
- Методы обработки тканей и криосекционирования
Теоретическая часть
- Дисфункция ретинального пигментного эпителия связана с заболеваниями глаз, такими как макулярная дегенерация.
- Существующие протоколы обработки сетчатки кролика малочисленны и часто неэффективны.
- Усовершенствованные методики могут способствовать получению более качественных результатов исследований с использованием моделей кроликов.
Используемые методы
- Трансконьюнктивальная энуклеация и фиксация тканей
- Глаз кролика как биологическая система
- Методы криопротекции, заливки и изготовления срезов
Основные результаты
- Применение улучшенных методов подготовки тканей позволило получить качественные срезы.
- Визуализированные структуры сетчатки характеризовались сохранностью слоев и морфологии.
- Модификации протокола успешно позволили минимизировать артефакты ткани.
Выводы
- Данное исследование подтверждает надежность метода подготовки тканей глаза кролика для иммуногистохимического анализа.
- Полученные результаты расширяют возможности исследований сетчатки и разработки терапевтических методов.
Часто задаваемые вопросы
Значимость для промышленности
Высококачественное криосеционирование целых глаз кролика позволяет проводить надежный иммуногистохимический анализ архитектуры сетчатки, что напрямую способствует раннему поиску и валидации мишеней в исследованиях заболеваний глаз. Данный протокол решает проблему возникновения артефактов в тканях, повышая прогностическую значимость доклинических моделей сетчатки и обеспечивая трансляционную преемственность терапевтических программ, направленных на борьбу с дегенерацией сетчатки. Повышенная целостность тканей и воспроизводимость результатов укрепляют процесс принятия решений по портфелю разработок на стыке биологического поиска и доклинической валидации.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Первичный поиск и валидация мишени
- Обеспечивает точную визуализацию слоев сетчатки для механистического снижения рисков в моделях заболеваний.
- Повышает биологическую достоверность для функциональной валидации мишеней в офтальмологических исследованиях.
- Повышает прогностическую уверенность при оценке регенеративных стратегий для пигментного эпителия сетчатки.
Скрининг и разработка анализа
- Обеспечивает получение стандартизированных срезов тканей с минимальным количеством артефактов для последующих этапов иммуногистохимического анализа.
- Способствует воспроизводимому количественному анализу локализации антигенов в тканях сетчатки.
- Позволяет подготовить валидированные биологические образцы для масштабируемого скрининга потенциальных терапевтических средств.
Трансляционные и доклинические исследования
- Приводит модели сетчатки кролика в соответствие со структурой сетчатки человека при соответствующих заболеваниях для проведения трансляционных исследований биомаркеров.
- Обеспечивает преемственность от этапа открытия до доклинической валидации за счет сохранения морфологии тканей.
- Снижает риск получения ложноотрицательных результатов из-за артефактов тканей в исследованиях доклинической эффективности.
Интеграция конвейеров и рабочих процессов
Данный протокол применяется на стыке этапов раннего поиска и доклинических исследований, поддерживая рабочие процессы от проверки гипотез до идентификации перспективных соединений-лидеров в программах изучения заболеваний глаз.
- Открывающая биология: обеспечивает надежную проверку гипотез и уточнение сигнальных путей за счет сохранения архитектуры сетчатки для иммуногистохимического анализа.
- Скрининг: позволяет получать воспроизводимые высококачественные срезы, подходящие для разработки количественных методов анализа и оценки соединений.
- Аналитика: поддерживает количественное измерение локализации антигенов и целостности тканей при различных экспериментальных условиях.
- Трансляционные исследования: сохраняет структуру тканей, имеющую значение для патологии, что способствует согласованию биомаркеров и обеспечению трансляционной преемственности.
- Корпоративное повторное использование: устанавливает стандартизированный протокол, который может быть адаптирован для различных моделей органов зрения и исследовательских групп.
Операционное и корпоративное воздействие
- Научная ценность: повышает точность прогнозов и снижает механистическую неопределенность в исследованиях сетчатки.
- Операционная ценность: улучшает стандартизацию, воспроизводимость и масштабируемость процессов обработки тканей.
- Стратегическая ценность: оптимизирует принятие решений о продолжении или прекращении разработки (go/no-go) и повышает эффективность использования капитала за счет минимизации технических артефактов.
- Влияние на портфель: способствует приоритизации с учетом рисков и продвижению кандидатов в препараты для терапии заболеваний глаз.
Особенности реализации
- Требуется опыт в области диссекции глаза и методов криосекционирования.
- Необходим доступ к криопротекторам, средам для заливки и криостату.
- Требуется стандартизация между исследовательскими группами для обеспечения воспроизводимого качества тканей.
- Метод может быть адаптирован для других моделей глаз крупных животных путем оптимизации протокола.
- Результат зависит от осторожного обращения для предотвращения появления артефактов в тканях и обеспечения целостности срезов.
