Fare Oosit içine Nükleer Transfer

Grubumuz yeniden programlamaya ilgi duyduğu için NU nükleer transfer işlemini gerçekleştiriyoruz. Diferansiye olmuş bir çekirdeğin embriyonik bir duruma yeniden programlanabilmesi, bu süreci büyüleyici kılmaktadır. Bunlar SUM ve HCCV reaktifleridir ve bu da hyaluronidazdır.

Öncelikle, CO2 ile dengelemek için inkübatörlere yerleştirilecek bir kap hazırlıyorum. Bunlar, mineral yağı ile kaplanmış birkaç damladır. Böylece CO2 atmosferini kalibre ederler.

Şimdi bir damla HCZB hazırlayın. Bu, yıkama işlemi için kullanılacaktır. Bu işlem günlerce sürer ve ardından tekrar bu mineral yağ ile kaplanır.

Bu yüksek, hyaluronidaz ile düşer. Buradaki bu kısım sadece HCCP damlalarıdır. Bunlar yıkama içindir.

Bu işlem, O tarafındaki ulu hücrelerin uzaklaştırılması içindir. Bu aşama ısıtılmaktadır, böylece ben geri gelip farelerden yağ işaretlerini alana ve her şeyi mineral yağı ile kaplayana kadar sıcak kalacaktır. Buradakiler, iğneyi temizlemek ve hücreleri içine yerleştirmek için kullanılan PVP damlalarıdır ve şurası ise HCCB artı Cyla B'dir. Manipülasyonları burada gerçekleştireceğim.

Tamam, burada bir iğne rengi var. Şu an yaptığım şey bir iğne çekmek. Tamam, şimdi elimde çok güzel, çok ince bir iğne var.

Ve şimdi bu bir mikro ocaktır. Doğru boyutta bir tutma pipeti elde etmek için iğneyi belirli bir konumdan kesmem gerekiyor. Cam küreyi ısıtıyorum, iğne ile üzerine inip eritiyorum ve şimdi kırıldı.

Bunu uzağa itiyorum. Kırık iğnenin mükemmel olduğunu görüyorsunuz. Şimdi buraya iniyorum, ısıyı yukarı itiyorum.

Şimdi cam küre kırmızıya dönecek ve eriyecektir; cam küreyi ittiğinizde bir kavis oluşturur. Bu kadar yeterli. Onu çıkarıyorum.

Gördüğünüz gibi, ardından iğneyi yerleştiriyorum. Tutucu pipeti az önce bu başlığın içine yerleştirdik. Şimdi onu tekrar mikroskoba takın.

Mikropipet, kılcal boru ve cıvayla doldurulmuş bir uç. Onu bu uca yerleştirdim. Bu kılcal boruyu buradaki cıvayla doldurdum.

İçeri girer. İğneyi buradaki başlığa yerleştirin. Sıkıca vidalayın, geri çekin.

Burayı saat yönünde çevirmek, cıvayı görebilmeniz için ön tarafa itecektir. Ve şimdi ucu yağın içine daldırıyorum. Görüyor musunuz? Şimdi, görüşü sağlamak için iğneyi aşağıya doğru hareket ettiriyorum.

Birkaç cıva damlacığı dışarı atın ve biraz QVP çekin. Bu şekilde uygun. Ardından tekrar yukarı doğru hareket ettirin.

HCCB'ye gidiyorum ve boşluğun aşağısına iniyorum. Baş kısmım için fare pipeti olan P'ye gidiyorum. Buraya yerleştirmek için bir kapiler hazırlamam gerekiyor. Teşekkürler. Tamamdır. Güzel.

Bu nedenle biraz kılcal tüp hazırlayın. Tamam. Ve boruda. Ben ley.

İsviçre'den geldim ve bu çalışmaya bir yıl önce başladım; K'nin laboratuvarına gelerek nükleer transfer öğrenmeye başladım. Burası gerçekten harika bir yer ve burada çalışmak çok güzel. Ve elbette bu çok karmaşık bir deney ve gerçekleştirilirken birçok sorun ortaya çıkabilir.

Başladığınızda, çekirdek oluşturma veya transfer işlemi sırasında birçok hücrenin liz olması gibi sorunlarla karşılaşabilirsiniz. Ya da transferi başarıyla gerçekleştirmenize rağmen hücrelerin gelişmediğini görebilirsiniz. Bunun her zaman çok sayıda nedeni olabilir.

Tüm bölgelerin kültür sisteminden başlayabileceğinizi kastediyorum. Dolayısıyla, kültür sistemini ve inkübatörleri test etmek için genetik kontrol parçaları veya döllenmiş embriyolar gibi kontrollere her zaman ihtiyaç duyulur. Ayrıca mikroskop kullanım becerilerini de geliştirmeniz gerekir.

Bu nedenle, yan tarafı güvenilir bir şekilde aşılayana ve ardından geri aktarana kadar çok fazla pratik yapmanız gerekir. Bu sadece bir pratik meselesidir ve bu konuda ustalaşmanız birkaç hafta veya ay sürebilir. Bunun dışında, işlem uzun süreli deneyler için hazırdır.

Bu nedenle, bunun için tüm bir günü ayırmak iyi olacaktır. Ayrıca, başlangıçta zorlayıcı olan konulardan biri de pipetleme işlemidir. Baloncuk oluşmasını engellemek, işlemi iyi kontrol etmek ve özellikle kontrolü kaybetmemek önemlidir; çünkü dış katman, yani sonolucita açık olduğundan, pipetleme sırasında klona zarar vermeniz ve klonun sonolucita'dan dışarı sızması mümkündür.

Bu nedenle, ağız borusunda yağ bulunmamasına dikkat edilmelidir. Çok fazla vakum yapmamaya ve çok fazla üflememeye özen gösterilmelidir; ancak bu beceri nispeten kolayca edinilebilir.