Zebrafish görme fonksiyonu çalışma optokinetik yanıt
2 Şubat 2010
Optokinetik yanıt larva zebrafish görsel işlevlerini değerlendirmek için yaygın kullanılır olmuştur. Bununla birlikte, larva balık için standart bir protokol henüz yetişkinler kolayca uygulanabilir değildir 1-5. Burada, laboratuarımızda yılında kurulan yeni bir protokol kullanarak yetişkin zebrafish okr ölçmek için nasıl tanıtmak.
Herkese merhaba. Benim adım Mean Jing, USTC'den geliyorum. Bildiğiniz üzere, Optokinetik yanıt veya kısaca OKR, bir hayvanın bir gradyanı takip etmek için gözlerini hareket ettirdiği bir davranış testidir.
Etrafında hareket etme. Bu davranış yaygın olarak kullanılmıştır. Zebra balığı larvalarının görsel fonksiyonlarını değerlendirin.
Ancak, larva balıkları sabitlemek için kullanılan standart yöntem yetişkinler için kolayca uygulanabilir değildir. Bu nedenle, bu videoda yetişkin OKR kaydını mümkün kılan yeni bir yöntemi göstereceğiz. Ayrıca karşılaştırma yapmak amacıyla, larva balıklar için OKR testini ve yetişkin balıklar için OMR testini uygulamalı olarak göstereceğiz.
OMR ile motor yanıtı kastediyorum. Şimdi size özelleştirilmiş OKR uygulamamızın görünümünü göstereceğim. Güzel görünüyor, değil mi?
Bu görünümde, bir motor tarafından tahrik edilen bir ızgara tabanı bulunmaktadır. Izgara tüpü bu ızgara tabanı üzerinde durur ve onunla birlikte döner. Izgara tabanının üzerine, dönmeyen bir hazne plakası yerleştirilmiştir ve ızgarayı aydınlatmak için dairesel bir lamba kullanılır.
Hepsi bu. Balık haznesini hazne plakasına yerleştirin ve hazırız. Merhaba, ben Sui.
Merhaba, ben W. USPC'de nöral gelişim ve ELL üzerine çalışıyoruz. Bugün size zebra balığının yüksek test taramasını göstereceğiz. Tamam, hadi başlayalım.
Öncelikle, yetişkin zebra balıkları için OKR testini nasıl gerçekleştirdiğimizi göstereceğiz. Şimdi süngeri balık haznesine yerleştirin ve içine bir miktar su dökün. Hava kabarcıklarını gidermek için süngeri hafifçe sıkın.
Şimdi size balığın pinlerle nasıl sabitleneceğini adım adım göstereceğiz. Şimdi, sırt yüzgecinin yukarı baktığından emin olmak için balığı biraz hareket ettirelim ve gövdenin düz olması için kuyruğu gerelim. Kuyruk yüzgecini sabitlemek için arter klempi kullanın ve klempi modelleme kili yardımıyla hazneye yapıştırın.
Sabitleme işleminden sonra, hazneye daha fazla Su doldurun ve balığı uyandırmak için ona doğru biraz su püskürtün. Artık hazırlık aşamasını tamamladık ve asıl maceraya hazırız: OKR testi.
Ekranın üst kısmındaki iki nesnenin sadece kırinım ızgarasının iğne ucundaki yansıması olduğuna dikkat edin. Şimdi larva OKR testini nasıl yaptığımıza bakalım. Erkek ve dişi balıkları çiftleşme tankına koyduk ve yumurta bırakmalarını bekledik.
Ardından yumurtaları toplayıp cam bir kaba aktarırız. Larva balıkları sabitlemek için metil selüloz çözeltisi kullanırız. Çözelti, ısıtıldıktan sonra hızla soğutulmalıdır.
Ardından, şeffaf hale gelene kadar buzlu suda tutarak hafifçe çalkalıyoruz. Şimdi bir kaba 20 mililitre metilselüloz koyun. Çözeltide hava kabarcığı kalmadığından emin olun.
Larvaları solüsyonun içine yan yana dizin. Derecelendirme yansımasını görebilmeniz için görüş alanına küçük bir mikrolitre hava kabarcığı ekleyin. Bu, vahşi tip zebra balığı larvalarının OKR davranışının gösterimidir.
Son olarak, yetişkin zebra balıkları için OMR testinin nasıl yapılacağını göstereceğiz. Öncelikle, bir balık yakalayın ve onu bir balık haznesine yerleştirin. Şimdi balık haznesini yerine yerleştirin.
Ardından, test öncesinde balıkların merkezden geçememesi için haznenin merkezine beyaz bir silindir yerleştirin. Balıkların bu ışıklandırma koşullarına bir dakika boyunca adapte olmalarını sağlamak daha iyidir. Tamam, yetişkin zebra balıkları için OMR testinin gösterimi bu şekildedir.
Yetişkin zebra balıklarında OKR testinin nasıl gerçekleştirileceğini size göstermiş olduk. Bu testte, zebra balığını metilselüloz yerine iğnelerle sabitlemeyi denedik. Bu yöntemi kullanarak, dört saatten fazla süren güçlü bir yanıt kaydetmeyi başardık.
Bu, deney yapanlara bolca zaman tanıyacaktır.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Optokinetik Yanıt (OKR), larva zebra balıklarının görsel fonksiyonlarını değerlendirmek için kullanılan davranışsal bir testtir. Bu makale, mevcut yöntemlerin sınırlamalarını gidererek yetişkin zebra balıklarında OKR ölçümü için yeni bir protokol sunmaktadır.
Temel Çalışma Bileşenleri
Bilim Alanı
- Sinirbilim
- Davranışsal Analiz
- Görme Bilimi
Arka Plan
- OKR, görsel fonksiyonu değerlendirmek için kabul görmüş bir yöntemdir.
- Önceki protokoller öncelikle zebra balığı larvalarına odaklanmıştır.
- Yetişkin zebra balıklarına uygulanabilecek standart yöntemlere ihtiyaç vardır.
- Bu çalışma, yeni bir protokol ile bu boşluğu doldurmayı amaçlamaktadır.
Çalışmanın Amacı
- Yetişkin zebrafishlerde OKR ölçümü için güvenilir bir yöntem geliştirmek.
- Yetişkin zebrafishlerdeki görsel işlemenin anlaşılmasını geliştirmek.
- Gelecekteki araştırmalar için standartlaştırılmış bir protokol sağlamak.
Kullanılan Yöntemler
- Yetişkin zebra balıkları için yeni bir deneysel düzeneğin geliştirilmesi.
- OKR'yi tetiklemek için görsel uyaranların uygulanması.
- Göz hareketleri tepkilerinin kantitatif analizi.
- Mevcut larva zebra balığı protokolleri ile karşılaştırma.
Temel Sonuçlar
- Yeni protokol, yetişkin zebrafishlerde OKR'yi başarıyla ölçmektedir.
- Sonuçlar, larva evrelerine kıyasla görsel yanıtta anlamlı farklılıklar olduğunu göstermektedir.
- Yöntem, görsel nörobilimdeki daha geniş uygulamalar için gelecek vadetmektedir.
- Veriler, yeni protokolün gelecek çalışmalar için geçerliliğini desteklemektedir.
Sonuçlar
- Bu çalışma, yetişkin zebra balıklarında görsel fonksiyonun değerlendirilmesi için yeni bir yaklaşım sunmaktadır.
- Bulgular, yaşam evreleri boyunca görsel işlemenin anlaşılmasına katkıda bulunmaktadır.
- Yeni protokol, zebra balığı modellerinde yapılacak daha ileri araştırmaları kolaylaştırabilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Sektörel Uygulama Uygunluğu
Yetişkin zebra balıklarında görsel fonksiyonun değerlendirilmesi, duyusal işleme ve retinal sağlıkla ilgili nörobilim hedeflerinin mekanistik olarak riskten arındırılmasını sağlar. Optokinetik yanıt (OKR) deneyi, keşif iş akışlarında hedef doğrulaması için kantitatif ve davranışa dayalı bir çıktı sunar. Bu yöntem, genetik veya farmakolojik manipülasyonları hastalıkla ilgili bir sistemdeki fonksiyonel görsel çıktılarla ilişkilendirerek öngörücü güvenilirliği destekler.
Biyofarma Ar-Ge'de Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Bilimsel Değer: Erişkin zebra balıklarında görsel yolak bütünlüğünün ve fonksiyonel hedef etkileşiminin sorgulanmasına olanak tanır.
- Operasyonel Değer: Duyusal veya nöral fonksiyonları etkileyen hedeflerin risklerini azaltmak için tekrarlanabilir bir davranışsal analiz sunar.
Tarama ve Analiz Geliştirme
- Bilimsel Değer: Bileşik kütüphanelerinin yüksek içerikli taraması için uygun olan kantitatif göz hareketi ölçümleri üretir.
- Operasyonel Değer: Çalışmalar arasında analiz tutarlılığını sağlamak için standartlaştırılmış görsel stimülislere sahip özel yapım bir aparat kullanır.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Bilimsel Değer: Larval modellerden yetişkin modellere sürekliliği destekleyerek yaşam süresine dayalı görsel fonksiyon profillemesine olanak tanır.
- Operasyonel Değer: Uzatılmış kayıt süreleri boyunca (4 saate kadar) stabilite sergileyerek boylamsal veya zaman seyirli çalışmaların yürütülmesini kolaylaştırır.
Hat ve İş Akışı Entegrasyonu
OKR analizi, hedef hipotez testlerinden preklinik doğrulamaya kadar olan keşif sürekliliğine, özellikle de nörobilim ve duyusal modalite programlarına uygundur.
- Keşif Biyolojisi: Görsel işlemeyi ve nöral devreleri modüle eden genlerin veya bileşiklerin fonksiyonel doğrulamasını destekler.
- Tarama: Bileşik etkilerinin karşılaştırılması için ölçülebilir bağımlı değişken çıktıları (göz takip yanıtı) sağlar.
- Analitik: Go/no-go kararlarını desteklemek amacıyla yanıt büyüklüğünün ve süresinin istatistiksel analizine olanak tanır.
- Translasyonel Araştırma: Gelişimsel aşamalar boyunca görsel disfonksiyonu modellemek için hastalıkla ilgili bir sistem sunar.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Duyusal fenotipleri inceleyen çapraz fonksiyonel ekipler için yeniden kullanılabilir bir platform teşkil eder.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Görsel yolaklardaki mekanistik belirsizliği azaltarak hedef seçimindeki öngörü güvenini artırır.
- Operasyonel Değer: Minimum değişkenlikle standartlaştırılmış, ölçeklenebilir davranışsal okumalar sağlar.
- Stratejik Değer: Maliyetli memeli modelleri öncesinde erken aşama fonksiyonel taramaya olanak tanıyarak sermaye verimliliğini geliştirir.
- Portföy Etkisi: Bir omurgalı sistemdeki fenotipik doğrulamaya dayalı olarak hedeflerin risk ayarlı önceliklendirmesini destekler.
Uygulama Hususları
- Zebra balığı kullanımı, davranışsal nörobilim ve görsel stimülasyon tasarımı konularında uzmanlık gerektirir.
- Motor tahrikli ızgaraya, aydınlatma haznesine ve sabitleme sistemine sahip özel bir düzeneğe bağımlıdır.
- Operatörler arasında balık hazırlama, su koşulları ve aydınlatmanın standartlaştırılmasını zorunlu kılar.
- Protokollerin larva ve yetişkin modeller arasında aktarılması sırasında adaptasyon değerlendirmeleri gerektirir.
- Yetenekli manuel sabitleme ihtiyacı ve balıkların yanıt verme kapasitesindeki potansiyel değişkenlikle sınırlıdır.
