FITC-Dekstran Besleme: C. elegans'ta Bağırsak Geçirgenliğini Ölçmek İçin Bir Yöntem

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biology

0 görüntüleme • 2:56 dk • April 30th, 2023

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- C. elegans, kısmen bağırsak bariyerini bozarak geçirgenliğini artırarak hastalığa neden olan bağırsak patojenlerinin neden olduğu deneysel bir enfeksiyon modeli olarak kullanılır. İlgilenilen bir bakteri veya kimyasal bileşiğe maruz kaldıktan sonra bariyer bütünlüğünü ölçmek için, solucanları plakalarından yıkayarak toplayın.

Daha sonra, bu solucanları, floresan etiketli yüksek moleküler ağırlıklı bir polisakkarit olan FITC-dekstran ile karıştırılmış ısıyla öldürülmüş E. coli'den oluşan etiketli yiyeceklerle agar plakalarına yerleştirin.

Solucanların etiketli bakterileri yemesine izin verin. Sağlam bağırsak bariyerlerine sahip olanlar yiyecekleri hızla temizlerken, daha geçirgen bağırsaklara sahip solucanlarda floresan işaretleyici organın lümeninin ötesine nüfuz edecektir.

Hayvanları sabitlemek için solucanları bir formaldehit çözeltisine aktarın. 1 ila 2 dakika sonra formaldehiti montaj ortamıyla değiştirin.

Son olarak, solucanları floresan mikroskobu ile görüntüleyin. C. elegans bağırsak granüllerinin otofloresan olduğunu unutmayın, bu nedenle arka plan sinyali olacaktır. Ancak genel olarak, daha fazla bağırsak floresansı daha yüksek geçirgenliği gösterir.

Örnek protokolde, DIM biyomolekülü ile yapılan tedavinin patojenik Pseudomonas aeruginosa bakterileri ile enfekte olmuş solucanların bağırsak geçirgenliği üzerindeki etkisini test edeceğiz.

- 2 mililitre ısıyla inaktive edilmiş E. coli'yi 4 miligram FITC-dekstran ile karıştırarak FITC-dekstran takviyeli plakaları hazırlayın. 20 taze NGM agar plakasının her birine 100 mikrolitre karışım ekleyin ve plakaların temiz bir laboratuvar tezgahında bir saat kurumasını bekleyin. 48 saatlik tedaviden sonra solucanları S Buffer ile yıkayın. Bunları FITC-dekstran takviyeli plakalara ve FITC-dekstran içermeyen NGM plakalarına aktarın ve plakaları gece boyunca inkübe edin.

Ertesi gün, solucanları S Buffer ile yıkayın ve taze NGM agar plakasında bir saat boyunca sürünmelerine izin verin. Siyah 96 oyuklu düz tabanlı bir plakanın her bir oyuğuna 50 mikrolitre %4 formaldehit ekleyin ve her oyuğa yaklaşık 50 solucan aktarın. 1 ila 2 dakika sonra, tüm formaldehiti çıkarın ve her bir oyuğa 100 mikrolitre montaj ortamı ekleyin.

- Formaldehit toksik bir kimyasaldır ve dikkatli kullanılmalıdır.

12:15

C. elegans bağırsak olarak bir Model hücreler arası Lumen morfogenez ve In Vivo polarize membran Biyogenez tek hücre düzeyinde için: etiketleme antikor boyama, işlev RNAi kaybı çözümleme ve görüntüleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:04

Gerçek zamanlı insan bağırsak Organoids epitel bariyer geçirgenliği ölçümü

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:22

Vitro ve In Vivo yaklaşımlar Bağırsak epitel hücre geçirgenliği belirlemek için

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:45

Bakteriyel Maruziyetten Sonra C. elegans'ta Bağırsak Geçirgenliğinin Değerlendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:04

Ex Vivo Bağırsak Sacs Gastrointestinal Hastalık Modelleri mukozal geçirgenliği Değerlendirmek için

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:58

Deneysel Kolit sırasında Bağırsak epitel Bariyer Fonksiyonları Üzerine Ek Beslenme Faydalı Etkileri Analizi

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:23

Bakteri ve Kimyasalların Caenorhabditis elegans'ın Bağırsak Geçirgenliği Üzerine Etkilerinin Ölçülmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:24

Standartlaştırılmış Bağırsak Döngüsü Modeli Kullanılarak Farelerde Bağırsak Geçirgenliği ve Nötrofil Transepithelial Göçün Fonksiyonel Değerlendirmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:51

Fetal Doku Kaynaklı Enteroidlerde Epitel Geçirgenliğinin Test Edilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:48

Apikal-Out Enteroid Modelde Lucifer Sarı Kullanarak Bağırsak Geçirgenliğinin Belirlenmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 22 Ağustos 2026