Antikor Bazlı Enzime Bağlı İmmünosorbent Testi Kullanılarak Bakteriyel Aljinatın Miktarının Belirlenmesi

JoVE Encyclopedia of Experiments

Microbiology

0 görüntüleme • 3:20 dk • September 26th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pseudomonas aeruginosa bakterisi tarafından üretilen koruyucu bir ekzopolisakkarit olan aljinat içeren bir numune içeren bir mikroplaka alın.

Numune aljinat konsantrasyonunu ölçmek için aljinattan türetilmiş bir standardın seri seyreltmesini hazırlayın.

Moleküllerin kuyu yüzeyine yapışmasını kolaylaştırmak için bir kaplama tamponu ekleyin ve inkübe edin.

Bağlanmamış molekülleri çıkarmak için yıkayın.

Spesifik olmayan bağlanma bölgelerini maskelemek için bloke edici bir ajan ile inkübe edin.

Yıkayın, ardından aljinata özgü birincil antikorlarla inkübe edin.

Tekrar yıkayın, ardından birincil antikorları hedef alan enzim konjuge ikincil antikorlarla inkübe edin.

Yıkayın ve ardından enzimin renkli bir ürün üretmek için oksitlediği kromojenik bir substrat ile inkübe edin.

Kolorimetrik algılamayı etkinleştirmek için reaksiyonu durduran ve rengi artıran asidik bir çözelti ekleyin.

Bir mikroplaka okuyucu kullanarak renk yoğunluğunu ölçün.

Standart seyreltmelerin yoğunluklarından standart bir eğri oluşturun ve aljinat konsantrasyonunu belirlemek için numune yoğunluğunu çizin.

Bir mikropipet kullanarak, toplanan numunenin 50 mikrolitresini işlenmemiş 96 oyuklu bir plakaya ekleyin.

Daha sonra kuyucuklara 50 mikrolitre ELISA kaplama tamponu ekleyin. Plakayı 37 santigrat derecede iki saat inkübe edin. Bir fışkırtma şişesi kullanarak, plaka kuyucuklarını PBS-T ile iki kez yıkayın, kuyucukları doldurun ve ardından plakayı ters çevirerek boşaltın.

Bir mikropipetle kuyucuklara 200 mikrolitre bloke edici tampon ekleyin ve gece boyunca dört santigrat derecede inkübe edin. Ertesi gün, plakayı daha önce olduğu gibi PBS-T ile iki kez yıkayın. Daha sonra kuyucuklara 100 mikrolitre seyreltilmiş birincil antikor ekleyin ve 37 santigrat derecede bir ila iki saat inkübe edin.

İnkübasyonun ardından, plaka kuyularını daha önce olduğu gibi PBS-T ile üç kez yıkayın. Daha sonra, kuyucuklara 100 mikrolitre seyreltilmiş ikincil antikor ekleyin ve bir ila iki saat boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Plakayı tekrar üç kez yıkadıktan sonra, 100 mikrolitre TMB ELISA solüsyonu eklemek için bir mikropipet kullanın.

Plakayı bir çekmeceye yerleştirerek veya folyoya sararak plakayı karanlıkta oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin. Ardından 100 mikrolitre durdurma solüsyonu ekleyin. OD'yi 450 nanometrede ölçmek için bir plaka okuyucu kullanın.

Bilinen d-mannuronik asit konsantrasyonlarının seri seyreltmelerinin OD450'sini ölçerek standart bir eğri oluşturun. Ölçümleri iki kez tekrarlayın ve doğrusal bir denklem çıkarın. Standart eğriyi kullanarak her numunedeki aljinat konsantrasyonunu hesaplayın ve OD600 başına toplam aljinat miktarını elde etmek için doğrusal denklemdeki aljinat konsantrasyonunu OD600'e bölün.

07:27

Yöntemleri için algılama sitotoksik Amyloids aşağıdaki enfeksiyon pulmoner endotel hücre Pseudomonas aeruginosa tarafından

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:59

Renkölçer analiz, alkalin fosfataz etkinliğinde S. aureus biyofilm

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:37

Pseudomonas aeruginosa Tarafından Üretilen Mono-Ramnolipidlerin ve Di-Ramnolipidlerin Tespiti ve Miktarının Belirlenmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:17

Üronik Asit Karbazol Testi Kullanılarak Bakteriyel Aljinatın Miktar Tayini

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:38

Patojenik Bakterilerde Enzim Kaynaklı Biyofilm Bastırmanın Nicelendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:50

EPS Matris Tespiti ile Safra Tuzu ile İndüklenen Biyofilm Oluşumunu İncelemek İçin Bir Test

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:48

İmmünoglobulin G'nin Tespiti için Kağıt Tabanlı Bir İmmünoassay

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:54

Boya Etiketli Manyetik Mikroküreler Kullanılarak Çoklanmış Kantitatif Bakteri Tespiti

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:22

Bakteri-konak Etkileşimleri karakterize etmek Biyomimetik Malzemeler

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:04

Selüloz Kağıt Diskler ve Çıplak göz Kolorimetrik İmmüno Onların Uygulamaları antikorların bağlama Kovalent

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 22 Ağustos 2026