Ters Fazlı Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi: Fare Karaciğerinden İzole Edilen Floresan Etiketli ve Türetilmiş Sialik Asitlerin Kantitasyonu İçin Sağlam Bir Yöntem

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biological Techniques

0 görüntüleme • 3:31 dk • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

N-asetilnöraminik asit ve N-glikolilnöraminik asit gibi sialik asitler, memeli hücre yüzeyindeki oligosakkarit zincirlerinin distal uçlarında bulunan negatif yüklü karbonhidrat kısımlarıdır.

Ters fazlı yüksek performanslı sıvı kromatografisi veya RP-HPLC kullanarak fare karaciğer dokusundaki bu sialik asitlerin nispi miktarlarını ölçmek için, önce izole edilmiş sialik asit karışımını türevlendirme maddesi ile muamele edin. Türevlendirme ajanı, sialik asitlerin fonksiyonel grupları ile etkileşime girerek kararlı, floresan sialik asit türevleri üretir.

Bir floresan dedektörüne bağlı bir RP-HPLC sütunu monte edin. Kolon, kromatografik çalışma sırasında sialik asit türevleri ile seçici etkileşimleri kolaylaştırmak için polar olmayan, hidrofobik, alkil zincir ligandlarına bağlanmış gözenekli silika bazlı sabit faz içerir.

Optimum kolon koşullandırma için daha az polar organik çözücü olan düşük konsantrasyonlarda asetonitril içeren sulu polar mobil faz kullanarak kolonu dengeleyin.

Türetilmiş sialik asit karışımını kolona yükleyin.

Hidrofobik bir N-asetil grubu içeren N-asetilnöraminik asit, sabit fazın hidrofobik ligandlarına, hidrofilik bir N-glikolil grubuna sahip N-glikolilnöraminik asitten daha güçlü bir şekilde adsorbe olur.

Çevrimiçi bir floresan dedektörüne bağlı standart bir HPLC sistemi kullanarak numuneleri analiz edin. Analiz için 250 milimetre uzunluğunda ve 4,6 milimetre çapında ters fazlı bir C-18 sütunu kullanın.

Çözücü A ve çözücü B'yi hazırladıktan ve metin protokolünde ayrıntılı olarak açıklandığı gibi HPLC çalışmasını ayarladıktan sonra, 50 mikrolitre numuneyi HPLC sistemine enjekte edin.

373 nanometrelik floresan dedektörü uyarma dalga boyunu ve 448 nanometrelik bir emisyon dalga boyunu kullanarak eluentleri izleyin.

Son olarak, metin protokolünde açıklandığı gibi Neu5Gc'nin nispi miktarını hesaplayın.

06:34

Bir Ismarlama HPLC Arıtma Protokolü That Oligomer Formasyonu Yetenekli Verim Yüksek saflıkta Amiloid Beta 42 ve Amiloid Beta 40 peptidler,

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:06

Sialik asit Nkullanarak metabolik Glycoengineering-asil-Mannosamines modifiye

İlgili videolar

0 Görüntüler

13:35

Ayıklama ve çözümleme katekoiamin nörotransmitter ve onların metabolitleri yüksek basınçlı sıvı Kromatografi ile uygun bir yöntem

İlgili videolar

0 Görüntüler

20:23

Kompleks Biyolojik örnekler seçerek glikozile Peptitler zenginleştirin lektin HPLC Yöntemi

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:26

Hücresel Lipid Ekstraksiyon Hedefli Kararlı İzotop Seyreltme Sıvı Kromatografi-Kütle Spektrometresi Analizi

İlgili videolar

0 Görüntüler

13:09

Glycosphingolipid Antijenler Kütle Spektrometrik Analizi

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:38

Nicel Glycomics ve Proteomik Kombine Arıtma Stratejisi

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:04

Karaciğer ve Süt örneklerinde vahşi tipli ve sialik asitler tayini ve CMAH Knock-out Fare.

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:53

Sphingomyelin türler Sphingomyelin LC-MS iki kararlı Isotopically kullanarak tarafından için nicel ve nitel yöntemi etiketli

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:06

Ters Faz Sıvı Kromatografi-Kütle Spektrometresi Ile Hücresiz Protein Sentezmetabolizmasının Mutlak Niceliği

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 22 Ağustos 2026