Fare Daimi Orta Serebral Arter ligasyon Of Uygulama

Bu prosedürün genel amacı, hayvan modellerinde fokal serebral iskemiyi incelemektir. Bu işlem, öncelikle sol göz ile kulak tabanı arasındaki deriye küçük bir insizyon yapılarak gerçekleştirilir. Ardından, orta serebral arteri açığa çıkarmak için zigomatik ark ile skuama kemiğinin birleştiği noktada bir kraniyotomi uygulanır ve ardından orta serebral arter küçük bir damar koterizatörü kullanılarak ligat edilir.

Son olarak, yara kapatılmak üzere deri sütüre edilir. Nihayetinde, fare beyninin sol hemisferinde yer alan bir enfarktı gösteren sonuçlar elde edilebilir. İnvüzülasyonun (inmenin) görselleştirilmesi için beyin TTC ile boyanabilir veya MRI kullanılarak taranabilir.

İnme geçirmiş beyin, protein veya mRNA ekspresyonunun belirlenmesi için de kullanılabilir. Merhaba, ben Garza Chola. Rochester Üniversitesi'ndeki Gale Johnson laboratuvarında lisansüstü öğrencisiyim.

Bu yöntem, iskemik beyinde hücre ölümüne yol açan mekanizmaların gösterilmesi gibi, inme alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Cerrahiye hazırlanmak için tüm cerrahi aletleri, gazlı bezleri ve bilişsel aplikatörleri otoklav ile sterilize edin. Cerrahi aletleri operasyon sırasında %70 etanol içinde tutun ve kullanmadan hemen önce steril gazlı bez üzerinde hava ile kurutun.

Çalışma alanını cerrahiden iki saat önce %70 etanol ile püskürterek temizleyin. Fareye kilogram başına 0,05 miligram buprenorfin enjekte edin. İlaç, cerrahi işlemden hemen sonra tekrar uygulanacak ve ardından ameliyat sonrası ilk 24 saat boyunca her üç ila beş saatte bir verilmeye devam edilecektir.

Fareyi %3 izofluran ve %20 oksijen gaz karışımı ile anestezi yapmak için bir anestezik vaporizer kullanın. Oksijen miktarını bir debimetre ile ayarlayın. Anestezi seviyesini ayak parmağı veya kuyruk sıkıştırma testi ile kontrol edin.

Anestezi seviyesini %2 izofluran ile koruyun. Farelerin gözlerine yapay gözyaşı damlatın ve cerrahi prosedür sırasında göze zarar vermemeye özen gösterin.

Hayvan tıraş makinesi kullanarak fareyi sağ tarafı üzerine yan pozisyonda yerleştirin. Sol göz ile sol kulak tabanı arasında kalan sol taraftaki bölgeyi tıraş edin. Pamuklu aplikatörler kullanarak bölgeyi hafifçe ovalayarak Betadine solüsyonu ve %70 etanolü dönüşümlü olarak uygulayarak temizleyin.

Tekrar gereklidir. Fareyi, rektal bir proba bağlı olan ısıtma pedinin üzerine yerleştirin. Vücut sıcaklığını 37 °C'de tutmak için rektal probu mineral yağ kullanarak yerleştirin. Fareyi mikroskop altında sağ yanına gelecek şekilde konumlandırın ve bantla sabitleyin.

Bir gazlı bez sponja üzerinde pencere şeklinde bir kesik açın ve cerrahi alanı ince düz makasla örtün. Sol göz ile sol kulak tabanı arasında dikey bir insizyon yapın. Cerrahi işlem sırasında dokuda aşırı kuruma meydana gelirse, cerrahi alanı açık tutmak için kavisli hemostatlar kullanın.

Steril PBS uygulamak için pamuklu aplikatörler kullanın. Temporal kas üzerinde yatay bir insizyon yapmak için yaylı makas kullanın ve temporal kası kafatasından hafifçe ayırmak için pensetle yavaşça çekin. Çene kemiğini kavisli pensetle tutun ve zigomatik ark ile skuam sole kemiğinin birleştiği noktada küçük bir subtemporal kraniyotomi yapmak için 18 gauge iğne kullanın.

Kemik pensi ile, MCA'yı açığa çıkarmak için kafatasından küçük parçalar çıkarılır. Bu işlem sırasında zigomatik ark ve orbital içerikler zarar görmemelidir. Küçük bir damar koterleyici kullanarak MCA'nın distal kısmını bağlayın, temporal kası orijinal konumuna geri yerleştirin ve beş sıfır naylon sütürler kullanın.

İnsizyon bölgesini kapatmak için anesteziyi kesin ve rektal probu çıkarın. Fareye deri altına ikinci doz buprenorphine enjekte edin. Fareyi 37 °C'de tutulan kafesine geri yerleştirin.

Isıtma paneli ile. Fareyi, iştah veya su tüketiminde azalma, kambur duruş, solunum artışı veya tüylerin dikleşmesi dahil olmak üzere herhangi bir rahatsızlık belirtisi için sonraki 24 saat boyunca yakından izleyin. Ameliyattan hemen sonra fareye recovery gel sağlayın.

Ameliyattan sonra iki ila üç saat bekleyin. Ardından, fareye 24 saate kadar her üç ila beş saatte bir deri altına buprenorphine enjekte edin. Ameliyattan 24 saat sonra, fareyi derin anesteziye alın ve fareyi %4 TTC ile perfüze edin.

Beyni çıkarın ve gece boyunca %4'lük paraformaldehit çözeltisi içinde bekletin. Ertesi gün, beyni kesim bloğuna yerleştirin. Beyni bir milimetre kalınlığında dilimler halinde kesmek için jilet kullanın.

Kesitleri milimetrik bir cetvelin yanına yerleştirin. Bir diseksiyon mikroskobuna bağlı dijital kamera kullanarak, kesitlerin fotoğraflarını Image J yazılımı ile çekin.

Dosya menüsüne tıklayın ve istediğiniz fotoğrafı açın. Programdaki düz çizgi sekmesine tıklayın. Cetvel üzerindeki iki kenar arasında düz bir çizgi çizin.

Analiz menüsüne tıklayın ve ölçek belirle seçeneğini seçin. Bilinen mesafeyi bir olarak ve uzunluk birimini milimetre olarak ayarlayın. Serbest el daire sekmesine tıklayın.

Kontralateral hemisferi çevrelemek için daire çizin. Analiz menüsüne tıklayın ve ölçümü seçin. Çizilen dairenin alanını gösteren hesaplama penceresi açılacaktır.

Beyaz çizgi alanı hariç tutularak, ipsilateral hemisferin etrafına başka bir daire çizin. Alanı daha önce gösterildiği gibi ölçün. Yeni değer hesaplama penceresine eklenecektir.

Birinci ve ikinci değerler arasındaki fark, enfarkt alanını temsil eder. Bir milimetrelik kesit kalınlıkları için yukarıdaki adımları tekrarlayarak her kesitteki inme alanını hesaplayın. Her kesitte hesaplanan inme alanlarını toplayarak toplam inme hacmini hesaplayın.

Bu şekil, vahşi tip C 57 BL six faresinde kalıcı MCA ligasyonundan 24 saat sonraki TTC boyamalı beyni göstermektedir. İnme bölgesi beyaz görünümlüdür ve farklı büyütme oranları ile açılardan görülebilir. Burada, TTC ile boyanmış inme geçiren beynin anteriordan posteriyor infarkta doğru bir milimetre kalınlığındaki kesitleri gösterilmektedir.

Hacim, cerrahiden 24 saat sonra hesaplanmıştır. Enfarkt hacmi yaklaşık 23 kübik milimetredir. Bu teknik, uygun şekilde uygulandığında 30 dakika içinde tamamlanabilir.

İzlediğiniz için teşekkürler.