Otomatik Tel kasılmaların kâğıda çizilmesi Yüklü daralma ve Rahatlama Çalışmaları

Bu prosedür, fenilefrin gerilimi altındaki mezenterik direnç arterlerinin hücre dışı kalsiyuma karşı reaktivitesini karşılaştırmak için tuz hassas ve tuza dayanıklı sıçanlar kullanır. Bu işlem, öncelikle hayvanlardan mezenterik arkadın izole edilmesi ve direnç arteri dallarının diseke edilmesiyle gerçekleştirilir. Ardından, iki paslanmaz çelik telden birincisi diseke edilen arterin kısa bir segmentinden geçirilir ve damar graf kamerasına monte edilir.

Ardından, ikinci paslanmaz çelik tel, birinci tele paralel olacak şekilde damar lümeninden geçirilir. Sonrasında, monte edilmiş damar normalize edilmiş bir iç çevreye kadar gerilir. Prosedürün son adımı, damarı tekrarlanan fenilefrin uygulamalarıyla uyararak ve kümülatif kalsiyum uygulamalarıyla gevşeterek yeniden aktive etmektir.

Sonuç olarak, veriler damardaki gerilim değişikliklerini göstermektedir; bu veriler bir kalsiyum yanıt eğrisine dönüştürülebilir ve EC 50 değerlerini belirlemek için kullanılabilir. Karşılaştırma amacıyla; bu yöntemi kullanma fikri ilk olarak, sıçan Masonary bataryalarının sinir ağının bir gpro bakır kalsiyum duyarlı reseptörü eksprese ettiğini keşfettiğimizde ortaya çıkmıştır.

Bu durum, agonist tarafından aktive edilen acı AIC reseptörleri ile aynı şekilde çalışılabilir. Genel olarak, bu yöntemde yeni olan kişiler, endotel ve düz kas tabakalarının küçük olması nedeniyle zorluk yaşayabilirler. Damarlar kolayca hasar görür.

Bu durum gerçekleşirse, bu damarların mekanik özellikleri bozulabilir. Başlamak için, çalışma alanını ve cerrahi aletleri hazırlayın. Anestezili bir hayvanı sırt üstü yerleştirin ve karnını alkolle silin.

Midline laparotomi gerçekleştirdikten sonra, süperior mezenterik arter dahil olmak üzere bağırsaktan yaklaşık 85 santimetreyi makasla çıkarın. Proksimal ucu pilorusa yakın yerden, distal ucu ise ileoçekal bileşkeye yakın yerden kesin. Eksize edilen bölümü, oda sıcaklığında fizyolojik tuz çözeltisi veya PSS içeren kaplamalı bir Petri kabına yerleştirin.

Bağırsağın proksimal ucunu sağa doğru iğneleyin ve ardından bağırsağın geri kalanını saat yönünün tersine iğneleyerek sabitleyin. Sonra, ikinci ve üçüncü dalları içeren mezenterik arter segmentini ve bağırsağın proksimal ucundan bir parçayı diseke ederek ayırın. Mezenterik arterin V şeklindeki dallanma noktasını belirleyin ve bu noktayı venden diseke ederek ayırın.

Arterle doğrudan teması önlemek için adipoz ve bağ dokusunu pensle nazikçe çekerek uzaklaştırın. Damarı monte etmeye başlamak için yaklaşık iki milimetre uzunluğunda iki arter segmenti kesin. Arter lümenini açmak için dört santimetre uzunluğunda 40 mikrometre tungsten içermeyen paslanmaz çelik bir telin ucu kullanılabilir.

Ardından, teli her bir arterin lümenine yerleştirmek için ince pensler kullanın. Endoteleme zarar vermemeye dikkat ederek, miyogreft odasını 37 °C'de PSS ile doldurun. Tel geçirilmiş damar segmentini odaya aktarmak için pens kullanın.

Ardından, eksize edilen proksimal damar segmentini miyograf haznesine aktarın ve damarı içeri beslemek için uç kısmını tel boyunca çekin. Damarın gerilmesinden kaçının. Telin yakın ucunu, mikrometreye bağlı sağ çenedeki yakın sabitleme vidasının altına saat yönünün tersine gelecek şekilde sabitleyin.

Telin boşta kalan ucunu pensle tutun ve sağ çenedeki uzak sabitleme vidasının altına saat yönünde sabitleyin; tel boyunca uzanan damar segmentinin, çeneye temas etmeden iki çene arasındaki boşlukta yer aldığından emin olun. Çeneleri birbirinden vidalayarak açın. İkinci teli damara paralel olarak hizalayın ve lümenin uzak ucundan içeri yerleştirin.

Halihazırda monte edilmiş teli kılavuz olarak kullanarak, teli tek bir hareketle damar segmentinin lümeninden nazikçe ilerletin. Manevra sırasında telin gerilmesini önlemek ve endotelyuma temas etmekten kaçınmak için teli damardan yaklaşık bir santimetre uzaklıkta tutun. Çeneleri birbirine vidalayın ve sağ elde sabitlenen birinci telin altından ikinci montaj telinin hareket ettiğinden emin olun.

İkinci telin yakın ucunu, transdüserle bağlantılı sol çenenin yakın sabitleme vidasının altına saat yönünde sabitleyin. Telin uzak ucunu sol çenedeki sabitleme vidasının altına sabitleyin ve teli germek için sıkın. Montaj tamamlandığında, 37 °C'de dengeye gelmesi için 30 dakika bekleyin.

Dengeleme işleminden sonra, montaj menüsünden motor sıfırlanır ve damarı normalize edilmiş bir iç çevreye kadar genişleten normalizasyon prosedürü başlatılır. Başlamak için normalizasyon menüsünü açın ve hedef transmural basıncı 13,3 kilopascal olarak ayarlayın. Ardından, her bir normalizasyon adımının süresini 60 saniye olarak belirleyin.

IC one ile IC 100 oranı 0,9'a eşit olmalı ve IP kalibrasyonu iki yıldız delta şeklinde ayarlanmalıdır. Kıl çizgileri damar segmentinin uzak ve yakın uçlarının üzerindeyken, mikroskop oküler okumalarını kullanarak monte edilmiş mezenterik arterin uzunluğunu ölçün. Normalizasyon sonrası damarlar, bir dizi stimülasyon ve yıkama döneminden oluşan standart bir başlangıç işlemi gerçekleştirilerek yeniden aktive edilir.

İlk olarak, myo hazne kapağını yerine yerleştirin ve %95 hava ve %5 karbondioksit ile aerasyona başlayın. Hazneyi, 100 µM askorbik asit içeren taze PSS ile doldurun. Damarı beş µM fenilefrin (PE) ile beş dakika boyunca kasın ve PSS tamponu ile dört kez yıkayın. Son yıkamadan sonra hazneyi PSS ile yeniden doldurun; hazne tekrar PSS ile doldurulup PE ile kasılma işlemi uygulanmadan önce üç dakika bekleyin. Daha önce gösterildiği gibi, arter artık deney için hazırdır.

Kontrakte olmuş damarların relaksasyonunu, artan konsantrasyonlarda kalsiyum klorür kümülatif olarak ekleyerek ölçün. Bu tablo, fenilefrin uygulamasının ardından bazal tansiyonların Wistar DS veya doll tuz duyarlı ve DR veya doll tuz dirençli sıçanlar arasında farklılık gösterdiğini ortaya koymaktadır. Bir Wistar sıçanından alınan bu iz, PE ile kontrakte olmuş arterlerin kümülatif kalsiyum eklemeleriyle relaksasyonunu göstermektedir; relaksasyon, DS sıçanlarından alınan dokularda Wistar ve DR sıçanlarla karşılaştırıldığında ciddi şekilde bozulmuştur. Burada görüldüğü üzere, kalsiyum duyarlılığındaki farklılıklar kalsiyum yanıt eğrilerinde ve EC 50 değerleri hesaplandığında tekrar görülebilir.

Son olarak, DS sıçanları, Dr. Rats ile karşılaştırıldığında arterlerde kalsiyum algılayıcı reseptör ekspresyonunda bir azalma gösterir. Uzmanlaşıldığında, bu teknik uygun şekilde uygulandığında iki saat içinde tamamlanabilir. Bu videoyu izledikten sonra, izometrik koşullar altında küçük mezenterik arterlerin eksojen bileşiklere karşı vasküler reaktivitesinin nasıl karşılaştırılacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.