Amyotrofik Lateral Skleroz için Fare Modeli (ALS) Klinik Test ve Omurilik Kaldırma

Merhaba, benim adım Lar Turner. Almanya'daki Ingham Üniversitesi Nöroloji Bölümü'nde doktora sonrası araştırmacıyım. Merhaba, benim adım Lin Gunda.

Tıp fakültesi öğrencisiyim ve tez çalışmamı bu laboratuvarda yürütüyorum. Bugün size atrofik lateral sklerozun bir fare modeli olan SODG 93'ün klinik testlerini göstereceğiz. Ayrıca, motor fonksiyon testini sözde rotor testiyle ve ek olarak, immünolojik analiz gerçekleştirmek amacıyla asılı tel kavrama ile bir başka motor fonksiyon testini göstereceğiz.

a s farelerin fonksiyonel testleri tamamlandıktan sonra, gerekli bir prosedür spinal kordun, STIC sinirinin ve gastroc kasının çıkarılmasını içerir. Bu cerrahi prosedürleri ayrıntılı olarak göstermek ve sonunda bazı örnek immünolojik bulguları sunmak istiyoruz. Tamam, ancak şimdi önce klinik testlerle başlayalım.

Bu, klinik sınıflandırma sistemimizde kas titremesi veya parezi gibi herhangi bir klinik belirti göstermeyen, serbestçe hareket eden vahşi tip bir MOE'dir. Bu, skor dört olurdu. Bu ise transgenik bir ALS moe'dir.

Hastalığın erken evresinde, hayvanın sağ arka ekstremitesinde SCORE üç E olarak sınıflandırılan şiddetli bir tremor görülür. Şiddetli yürüyüş anomalileri, bu hayvanın skor iki olarak sınıflandırılmasına neden olur. En az bir arka ekstremitenin sürüklenmesi, klinik skor bir olarak sınıflandırılır. Asılı tel testinde, kaba kas gücü değerlendirilir. Her fare özel yapım bir tel üzerine yerleştirilir ve saman kaplı butonun üzerinde dikkatlice ters çevrilir.

En az 180 saniyelik üç ardışık eğitimden sonra, düşme süresi ölçülür. Her fareye, ters çevrilmiş kapağa maksimum 180 saniye boyunca tutunması için üç denemeye kadar hak verilir ve en uzun süre kaydedilir. Sağ taraftaki beyaz tel tipi fare ile karşılaştırıldığında, soldaki plak transgenik fare oldukça zayıftır ve maksimum süreye ulaşmadan kapaktan düşer.

Rotor rod düzeneği; motor koordinasyon, denge ve motor öğrenme yeteneğini ölçmek için kullanılır. İyi bir performans, yüksek düzeyde duyusal motor koordinasyon gerektirir. Düzenek, bilgisayar kontrollü, motor tahrikli dönen bir milden ve beş fare için beş kulvardan oluşur.

Farelerin hataları, alt plastik plaka üzerindeki basınca göre otomatik olarak tespit edilir. Dakikada 15 tur sabit hızda, en az 180 saniye boyunca üç kez üst üste eğitim yapıldıktan sonra, hayvanın dönen rot üzerinde kalabildiği süre ölçülür. Her hayvan üç denemeye tabi tutulur ve düşmeden geçirilen en uzun süre kaydedilir.

Sol taraftaki sağlıklı vahşi tip fare, rotor rod üzerinde zorluk çekmeden koşmaktadır. Buna karşılık, sağ taraftaki transgenik a s fare, rotor rod üzerinde kalmakta dahi ciddi sorunlar yaşamaktadır ve arkadan izlendiğinde bir süre sonra üzerinden kaymaktadır. Sol retre farenin ciddi koşma güçlüklerini görüyorsunuz.

Sağlıklı wire tap faresine kıyasla, rotor rod hızına ayak uyduramamakta ve HIN ekstremiteleriyle yukarı doğru itiş yapamamaktadır. Omuriliğin immünokimyasal analizini gerçekleştirmek için hayvanların sakrifiye edilmesi gerekmektedir. Hayvan deneylerinin uygun şekilde yürütülmesine yönelik yerel kılavuzlara her zaman kesinlikle uyulması çok önemlidir.

Bu bağlamda, omurganın ve onu çevreleyen dokuların bu oldukça basitleştirilmiş genel görünümünde, ana anatomik yapılar tasvir edilmiştir. Hayvanı ventral tarafı üzerine yerleştireceğiz ve dorsal bölgedeki kasların hazırlığına başlayacağız. Kas dokusu uzaklaştırıldıktan sonra, omuriliği çevreleyen omurgaya erişeceğiz.

Hayvan sakrifiye edilip paraformaldehit içeren bir çözeltiyle perfüze edildikten sonra omurilik çıkarılabilir. Hayvan bir operasyon masasına yerleştirilir ve farenin sırt kısmını açığa çıkarmak için tüm ekstremiteler yanlardan sabitlenir. Tüy tabakasını düzleştirmek ve ardından gelecek cilt insizyonunu kolaylaştırmak için hayvan ıslatılır.

Bunun için keskin bir skalpel kullanılır. Deriyi her iki yöne doğru germeye dikkat edin. Kesme işlemini kolaylaştırmak için bacak kası hazırlanmalıdır.

Derilerinin de insize edilmesi gerekir. Deri insizyonu tamamlandıktan sonra, deri nazikçe kenara çekilir. Bir cımbız yardımıyla bacak kasları ve siyatik sinir uzaklaştırıldıktan sonra, spinal korda yaklaşmaya devam edilir ve hayvan yeni bir operasyon masasına yerleştirilir.

Artık kranium boyun, kaslar ve omurga kolayca tanımlanabilir. Tüm bu yapılar tanımlandıktan sonra, bir sonraki adıma geçmek kolaydır. Boyun kaslarının ve nu ligamanının uzaklaştırılması gerekir.

Omurga sütununa zarar vermemek için çok derin kesik atmamaya dikkat edin. Bir sonraki adımda, omurga sütununu açığa çıkarmak için paravertebral kaslar tamamen temizlenir. Omurga sütununa erişebilmek için birkaç eksizyon yapılması gerekir.

Atlanto-oksipital eklem dahil olmak üzere omurganın servikal bölgesinden başlıyoruz. Laminektomi gerçekleştirmek için, tüm vertebral çıkıntıları vertebral gövdeden çıkarabilmek amacıyla vertebral arkı kesmemiz gerekir. Daha önce açıklandığı üzere laminektomi, vertebral arkların kesilmesiyle başlar.

Ardından lamina çekilip uzaklaştırılabilir. Birçok daha fazla lamina çıkarılması gerektiği için omuriliğe zarar vermemeye tekrar dikkat edin. Açılı makaslar kullanmak ve her iki taraftaki birkaç vertebral arkı aynı anda kesmek oldukça faydalıdır.

Ardından, vertebral laminaları tamamen çıkarmak için dorsal çıkıntılardan çekin ve yakın çekime bakın. Makasın, spinal kanalın yan tarafında en lateral bölgeden dikkatlice yerleştirilmesi gerektiğini göreceksiniz. Spinal kordun daha sonra tamamen çıkarılmasını kolaylaştırmak için omurganın geri kalan lateral kısımları çıkarılmalıdır.

Omuriliğin anatomik nirengi noktaları, servikal ve lumbar genişlemeler olarak adlandırılan bölgelerdir. Tüm omurilik eksizyonlarını tamamladıktan sonra, omuriliğin tüm ventral köklerini kestiğinizden ve onu meningeslerin dura materinden ayırdığınızdan emin olun. Ardından, servikal omurilik kesilir.

Kranyal bölgeden başlanarak çıkarma işlemi yeniden gerçekleştirilir. Bu dokuya zarar vermemek için omuriliğe çok dikkatli dokunun, çünkü bu durum sonraki immünokimyasal analizler için ciddi kısıtlamalara yol açabilir. Omuriliğin çıkarılmasına torasik seviyede devam edilir ve lomber bölgeye doğru ilerlenir.

Bu kez korda equina'nın yan tarafı boyunca tekrar kesilir. Artık onu tamamen serbest bırakabiliyoruz. Burada, spinal kordun RAL kolonundaki orijinal konumunun hemen yanına yerleştirildiğini görüyorsunuz.

Son aşamada, örnek bir Paraform Hyde tespit çözeltisine yerleştirilir. Omurilik immünohistokimyasal analizleri için klasik bir örnek olarak, omurilik anterior boynuzundaki motor nöronları tanımlamak amacıyla kolin asetil transferazı tanıyan bir antikor uygulayabilirsiniz. Burada, sağlıklı bir yabani tip hayvandaki çok sayıda motor nöronu görüyorsunuz.

Buna karşılık, son evredeki transgenik a LS hayvanının ön boynuzda çok daha az sayıda motor nöronu olduğu görülmektedir. Bu video makaleyi izleyerek, atrofik lateral sklerozun bir fare modeli olan SODG 93'ün temel klinik muayenesini öğrenmiş olmalısınız.

Rotor testi ve asılı tel testi olmak üzere iki motor davranış testi gösterilmiştir. Bu testler, temel motor fonksiyonları değerlendirmek için iyi bir imkan sunar. Uygulanmaları kolaydır, motor defisitlerin tespitinde hassastırlar ve zaman açısından verimlidirler.

Bu videonun ana bölümü, spinal kord hazırlama tekniğinin gösteriminden oluşmaktadır. Bu yöntem elbette diğer tüm fare hastalık modellerine uygulanabilir ve spinal korddaki hastalık patolojisinin daha sonra yapılacak immünokimyasal analizleri için temel bir adımdır. İzlediğiniz için teşekkürler.

Bu video makalesinin gelecekteki deneyleriniz için yardımcı olacağını umuyoruz.