INTERCEPT Kan Sistemi kullanılarak hazırlanması ve Çift Doz Buffy Coat Trombosit Ürünleri Patojen inaktivasyon

Bu videoda, yedi adet Buffy coat havuzundan çift doz trombosit konsantresi hazırlanacak ve ardından Intercept ile işlemden geçirilecektir. Bu videoyu izledikten sonra, patojenleri inaktive edilmiş çift doz trombosit konsantresinin nasıl üretileceği konusunda kapsamlı bir bilgiye sahip olmalısınız. İlk olarak şematik bir genel bakış sunulacak, ardından uygulama gösterilecektir.

Bağışlanan tam kanın ilk yedi ünitesi, hacim ve hematokrit hedeflerini karşılayan yedi buffy coat ünitesi elde etmek için santrifüjlenir ve ayrıştırılır. Buffy coat'lar birbirine bağlanır, havuzlanır ve santrifüjlenir. Daha sonra, patojenleri ve lökositleri inaktive etmek amacıyla çift doz trombosit konsantresi üretmek için trombosit süspansiyonu, kalıntı eritrositlerden ayrılır.

Çift doz trombosit konsantresi, nükleik asitleri çapraz bağlayan intercept sistemi kullanılarak işlenir. Sonuç olarak bu prosedür; pH, glukoz, laktat, PO₂ ve PCO₂ ile CD62P değerlendirmeleriyle belirlendiği üzere, yedi günlük saklama süresi boyunca kabul edilebilir in vitro kaliteye sahip iki terapötik trombosit dozu sağlar. Kan merkezinden bir teknisyen prosedürü uygulamalı olarak gösterecek, biz ise işlem gereksinimlerini açıklayacağız.

İlk olarak, çift doz trombosit konsantresinin 300 ile 420 mililitre arasındaki intercept işleme spesifikasyonlarını karşıladığından emin olun. Hacim 2,5 ile 7 × 10¹¹ trombosit dozu ve mililitre başına 4 × 10⁶'dan daha az eritrosit olmalıdır. Bu prosedüre, 450 mililitrelik üst-alt toplama setlerinde toplanmış yedi ünite tam kan ile başlayın.

Kan ünitelerini santrifüj kaplarına yerleştirin ve üretici talimatlarına uygun olarak, oda sıcaklığında, B5 fren ayarıyla 11 dakika boyunca 4.880 RCF'de sert santrifüj işlemi gerçekleştirin; santrifüj sonrası kan üç katmana ayrılacaktır: eritrositler, buffy coat ve plazma. Yaklaşık 48 mL'lik buffy coat'u ve %37 hematokriti toplama kabında bırakarak, plazmayı üst uydu torbasına, eritrositleri ise alt uydu torbasına aktarın.

Buffy coat'ları oda sıcaklığında gece boyunca bir trombosit ajitatörüne yerleştirin; yedi adet buffy coat'ı ve 300 milliliters SSP artı trombosit katkı solüsyonunu steril şekilde bağlayın. Katkı solüsyonu en üstte olacak şekilde bir drenaj konfigürasyonunda, katkı solüsyonu ile ilk buffy coat arasındaki hattı burada gösterildiği gibi klempeleyin. Buffy coat üniteleri arasındaki kaynakları açın ve bunların son buffy coat kabına boşalmasını sağlayın.

Ardından, katkı çözeltisi ile ilk buffy coat arasındaki klempi ve kaynağı açın; klempi kapatmadan önce, yaklaşık 100 mililitre katkı çözeltisinin yaklaşık üçte birinin sırasıyla her bir Buffy coat kabından geçerek durulama yapmasını sağlayın; yıkama işlemini, her seferinde yaklaşık 100 mililitre katkı çözeltisi kullanarak iki kez daha tekrarlayın. Havuzlanmış buffy coat kabını boş kaplardan ayırın. Katkı çözeltisi dahil buffy coat havuz hacmi yaklaşık 600 mililitre olmalıdır.

Birleştirilmiş buffy coat'ları oda sıcaklığında bir saat boyunca ajitatöre yerleştirin. Ardından, entegre bir lökosit azaltma filtresine sahip bir trombosit saklama kabını, buffy coat havuzunu içeren torbaya bağlayın. Birleştirilmiş buffy coat'ları ve trombosit saklama kabını bir santrifüje yerleştirin ve 462 RCF'de dokuz dakika 20 saniye boyunca döndürün.

Santrifüj işleminin ardından, trombosit süspansiyonunu Luca redüksiyon filtresinden geçirerek trombosit saklama kabına aktarın. Sonuç, 420 mililitrede yaklaşık 7 × 10¹¹ trombosit içeren ve patojen inaktivasyonu için Intercept ile işleme tabi tutulabilen çift doz trombosit konsantresidir. Çift doz trombosit konsantresi; antoin kabı, aydınlatma kabı ve çift saklama kaplarından oluşan bir Intercept işlem seti kullanılarak işlenir.

Trombosit süspansiyon kabını, intersept işlem setindeki amin kabına bağlayın. Ardından trombositleri asın. Çözeltinin aydınlatma kabına akmasını sağlamak için amin kabındaki alt kanülü kırın.

Ardından, trombositlerin Amin kabından aydınlatma kabına akmasını sağlamak için Amin kabındaki üst kanülü kırın. Trombosit ve am tosin karışımını nazikçe karıştırın. Aydınlatma kabındaki havayı dışarı atmak için kabı hafifçe sıkın.

Aydınlatma kabı ile amato kabı arasındaki hortumu, aydınlatma kabından dört santimetreden fazla hortum çıkmayacak şekilde mühürleyin. Boş kapları çıkarıp atın. İşleme setini, aydınlatma kabı soldaki geniş bölmede ve düzenleyici sağ taraftaki daha küçük bölmede olacak şekilde aydınlatıcıya yerleştirin.

Bağış kimliğini tarayın. Ürün kodu ve işlem. Lot numarasını aydınlatıcıya girin.

Metal kapağı ve çekmeceyi kapatın. Aydınlatmayı başlatmak için başlat düğmesine basın. Aydınlatıcı, aydınlatma kabındaki trombosit amin karışımına kontrollü bir UVA ışığı dozu sağlar.

Amin, trombosit ünitesinde bulunabilecek patojenlerin nükleik asit baz çiftleri arasına yerleşir. Işığa maruz kalındığında, DNA veya RNA'yı birbirine bağlayan kalıcı çapraz bağlar oluşur; böylece patojenler artık çoğalamaz ve kan ürününe maruz kalan alıcıda hastalığa neden olamaz. Işınlama işleminden sonra, işlem setini çıkarın.

Ardından, kapları düzenleyiciden çıkarın, trombositleri ve işlem setini asın. Aydınlatma kabının çıkışındaki kanülü kırın ve trombositlerin CAD kabına akmasını sağlayın. CAD kabının içinde, kan ürünündeki kalıntı amin seviyelerini düşüren, immobilize makrogözenekli polistiren boncukların bulunduğu bir wafer yer almaktadır.

CAD wafer'ı bükmemeye dikkat edin. CAD konteynerindeki havayı aydınlatma konteynerine aktarın. CAD konteynerinin giriş portunun yakınındaki boruyu mühürleyin.

Boş aydınlatma kabını çıkarın ve atın. Ekli saklama kaplarıyla birlikte CAD kabını altı ila 16 saat boyunca bir trombosit ajitatörüne yerleştirin. Bu işlem, artık amlin konsantrasyonunun iki mikromolar veya daha düşük bir seviyeye indirilmesini sağlayacaktır.

CAD işleminden sonra, trombosit ünitelerini ajitatörden çıkarın, trombositleri asın, CAD konteynerinin çıkışındaki kanülü kırın ve trombositlerin iki depolama konteynerine akmasını sağlayın. Ardından, depolama konteynerlerindeki havayı tahliye edin. Y bağlantı aparatının üzerindeki tüpleri mühürleyin ve CAD konteynerini çıkarın.

Sonuç olarak, in vitro trombosit fonksiyonunu değerlendirmek için patojenleri inaktive edilmiş iki trombosit konsantresi elde edilmiştir. Trombosit dozu, pH, PO₂, iki PC O₂, laktat üretimi ve glukoz tüketimi belirlenmiştir. Trombosit konsantreleri, saklamanın yedinci gününe kadar takip edilmiştir.

Bu şekil, intersept tedavisi öncesindeki çift doz trombosit konsantresinin ortalama başlangıç trombosit dozunu ve saklama süresinin yedinci gününe kadar tedavi edilen her bir bölünmüş üründeki ortalama trombosit dozunu göstermektedir. Burada görülebileceği üzere, saklama sırasındaki trombosit kaybı yaklaşık %9 olmuştur. Bu azalma, konvansiyonel trombositlerin saklanması sırasında beklenen trombosit kaybından farklı değildir. Avrupa gereklilikleri uyarınca, trombositlerin pH değeri raf ömrünün sonuna kadar 6.4'ün üzerinde kalmalıdır.

İşleme sırasında, trombosit konsantrelerinin pH değeri, trombosit konsantrasyon hacmine ve trombosit saklama kabının gaz geçirgenliğine bağlı olarak hafifçe düşer. Bu şekil, ayrıştırılmış trombosit ürünlerinin yedi günlük saklama süresi boyunca pH değerlerini göstermektedir; saklama süresince pH stabil kalmakta ve işleme gereklilikleri dahilinde iyi korunmaktadır. Saklanan trombositlerde aerobik metabolizmanın devam etmesi beklenir ve bu durum, trombositlerin bir hastaya transfüzyon yapıldıktan sonra in vivo işlev görme yeteneğinin bir göstergesidir.

Trombositlerin O2 tüketimi ve CO2 üretimi, PL 24 10 kabındaki intersept trombositlerin yedi günlük saklama süresi boyunca solunumun devam ettiğini göstermektedir. Benzer şekilde, saklanan trombositlerde anaerobik metabolizma da devam etmelidir. Bu nedenle, glukoz tüketimi ve laktat üretimi de trombositlerin transfüzyon sonrası fonksiyon görme yeteneklerinin göstergeleridir.

Bu iki şekil, yedi günlük saklama süresi boyunca laktat ve glikoz seviyelerini göstermektedir. Trombosit glikoz tüketimi ve laktat üretimi birbiriyle tutarlıdır. Yedi günlük saklama süresi boyunca, beş ünitenin glikoz seviyeleri, glikoz analizinin alt sınırı olan 1.11 millimoles per liter değerinden daha düşük çıkmıştır.

Buffy coat hazırlama ve havuzlama doğrulaması; hacim, trombosit sayısı, plazma oranı ve eritrosit kontaminasyonu gibi intersept tedavisi giriş kriterlerini karşılayan trombosit konsantreleri üretmiştir. Nihai üniteler, trombosit dozu ve pH dahil olmak üzere yedi günlük saklama süresi boyunca doğrulama kriterlerini karşılamaktadır. Tek dozluk trombosit konsantresi üreten geleneksel buffy coat hazırlama yöntemine kıyasla bu tekniğin temel avantajı; kan alımlarından bileşen verimini maksimize etmesi, çift doz tekniği kullanarak işletme giderlerini azaltması ve transfüzyonla bulaşan patojenleri inaktive ederek hasta güvenliğini artırmasıdır.