Içinde Doğuştan gelen ve sirkadiyen Ayarlı Photobehavior Eğitim ışık tercih Testi Drosophila Larva

Aşağıdaki deneyin genel amacı, drosophila lavının doğuştan gelen ve sirkadiyen fotoğraf davranışını açık karanlık tercih testi yoluyla test etmektir. Bu, larvalarda ilk sirkadiyen saati oluşturmak için önce deneysel larvaların tanımlanmış açık karanlık koşullar altında yetiştirilmesiyle elde edilir. Daha sonra, larvalar sabit karanlığa geçirilir ve bu da larva sirkadiyen saatinin serbest çalışmasına izin verir.

L üç besleme aşamasına geldikten sonra, lav, farklı sirkadiyen zaman noktalarında ışık tercihlerini test etmek için gruplara ayrılır. Bir tercih indeksinin hesaplanmasına ve zaman noktaları ile deney grupları arasında karşılaştırmaya dayalı olarak doğuştan gelen ve sirkadiyen ışık tercihini gösteren sonuçlar elde edilir. Bu yöntem, ışık algılamanın doğuştan gelen ve sirkadiyen düzenlenmesi ve fotoğraf davranışının işlenmesi hakkında fikir verebilse de, koku alma, assasyon, kemoterapi, termo taksiler gibi diğer sistemlere de uygulanabilir.

Aynı şekilde, öğrenme ve hafıza testleri için değiştirilebilir. Prosedürü gösteren Alina ve BMA olacak Laboratuvarımdan mezun öğrencilere Yumurta toplamak için, çiftleşen yetişkin sineklerin taze dosyalarda 12 saat boyunca yatmasına izin verin ve bunları yeni şişelere aktarın. Yetişkinleri 12 saatlik aydınlık, 12 saatlik karanlık döngü için her 12 saatte bir aktarmaya devam edin.

12 saatlik yumurta koleksiyonlarını kuluçka makinesinde saklayın. Deney için, hayvanları erken L üç larva aşamasında yetiştirin. Bunlar yumurtadan 84 ila 108 saat sonra mevcut olan besleme şeritleridir.

Döşeme LAE'nin doğru evrelendirilmesi, deneyin başarısı için kritik öneme sahiptir. Üçüncü l'nin sonlarından bu yana, LAE fotoğraf davranışını değiştirdi Görsel davranışın sirkadiyen bileşenlerini test etmek için. Testten 48 saat önce ve larvalar subjektiften hemen önce, şafak, toplanan larvaları bir karton kutuya koyun.

Daha sonra kutuyu deneye kadar 48 saat boyunca sabit bir karanlık inkübatöre aktarın, bu larvaların kendi özel alanlarında rahatsız edilmeden kalması gerekir. Dört çeyreğe bölünmüş 20 santimetrelik bir kare kullanarak dokuz santimetrelik bir Petri kabının kapağını hazırlayın. Bir rehber olarak.

Zıt kadranlara 10 santimetre kare alüminyum folyo yapıştırın ve üzerlerini siyah bantla kaplayın. Kapağın kenarını kapattığınızdan emin olun. Sonraki yapıştırıcı, masanın üzerindeki ışık kaynağının altında dört çeyreğe bölünmüş 20 santimetrelik bir kare.

Tutarlı yer değiştirme için bir kılavuz görevi görmesi için bir test kabının çevresini sayfa üzerinde işaretleyin. Demir destek standı kullanarak Petri kabının üzerine bir LED lamba takın. Yüksekliği, tüm test plakası homojen bir şekilde aydınlatılacak şekilde ayarlayın.

Lamba yüksekliğini daha fazla ayarlayarak veya ayarlanabilir bir güç kaynağı kullanarak bir test alanındaki ışık yoğunluğunu 350 ile 760 luxe arasında ayarlayın. Deney odası kırmızı ışıkla aydınlatılır ve hayvanların yetiştirildiği yerle aynı sıcaklığa sahip olmalıdır. Şişeler sürekli karanlıkta iki gün büyüdü.

Yiyeceklerindeki lavları, yiyeceklerin ilk beş milimetresinden bir spatula ile toplayın. Yiyecekleri bir Petri kabı kapağının dış tarafına yayın. Yemeğe biraz su ekleyin ve spatula ile hafifçe karıştırın.

Bir boya fırçası kullanarak yeni bir yemeğe bir damla musluk suyu ekleyin. Larvaları yıkamak için su damlasına aktarın. Daha sonra ıslak boya fırçasını kullanarak larvaları toplamak için ıslak bir boya fırçası kullanın.

Sadece erken beslenen L üç larvayı seçin ve geç dolaşan L üç larvadan kaçının. Seçilen larvaları bir test plakasının merkezine aktarın. Besleme L üç larva, açık ve dışa doğru çıkıntı yapan ön kürelere sahiptir.

Parmak benzeri bir formda. Posterior kürelerin her birinde üç açıklık ve dört grup büyük dallı saç bulunur. Tükürük bezleri ikinci karın segmentine kadar uzanır.

Test plakasının ortasına 30 larva yerleştirildikten sonra, hazırlanan kapakla örtün. LED lambayı açın. Bir zamanlayıcı başlatın ve larvaların beş dakika boyunca plaka üzerinde serbestçe hareket etmesine izin verin.

Sonra kapağı hızlı bir şekilde çıkarın ve karanlıkta ve aydınlık kadranlarda larva sayısını sayın. Her lavın konumunu işaretlemek sayımı kolaylaştırabilir. Hızlı bir fotoğraf, duvarlarda sürünen veya agar'a ödünç giren larvalar gibi belirsiz ışık tercihi gösteren larvaların nötr tercih olarak sayılmasına ve ışık tercihi indeksi hesaplanırken toplam larva sayısına eklenmesine de yardımcı olabilir.

Larvaları saydıktan sonra, plakayı atın ve bir sonraki deney için yeni bir test plakası kullanın. Genotip başına 10 ila 15 deneme yaptıktan sonra, protokolü takip ederek analize devam edin. Kanton ES lavlarının açık karanlık tercihi iki farklı sirkadiyen zamanda karşılaştırıldı.

CT zero ve CT 12, subjektif olarak, şafak ve alacakaranlık larvaları standart koşullar altında 48 saat boyunca inler veya inler ve daha sonra üç gün boyunca sabit karanlığa geçer. 350 luxe'nin altındaki açık karanlık testi, CT 12'de test edilen larvalara kıyasla CT sıfırda test edilen larvalarda ışık ışığına duyarlılığın daha yüksek olduğunu ortaya koydu. Bu formülü kullanarak, CT sıfır lavın karanlık tercihi 0.36'ya kıyasla 0.52 idi.

Bir wilcoxon testi kullanarak indeksleri karşılaştıran CT 12 larvaları, 0.023'lük anlamlı P değeri üretir. Bu videoyu izledikten sonra, bu hedefe giden farklı devre ve zaman noktalarında kupa larvalarının ışık tercihini nasıl test edeceğinizi iyi anlamış olmalısınız. Evre F üç oph larvasını sürükleyebilmeli, fotofobik davranışlarını test edebilmeli ve istatistiksel karşılaştırma için ışık tercih indeksini hesaplayabilmelisiniz.