Elektronik von Frey aparatı kullanarak farelerin arka pençesindeki dokunsal hassasiyetteki değişikliklerin ölçülmesi

Bu prosedürün genel amacı, farelerin arka pençesindeki mekanik basınca karşı hiçbir duyarlı tepkiyi ölçmektir. Bu, önce hayvanları bir tel örgü zemine yerleştirerek ve hazır olduklarında alışmalarına izin vererek gerçekleştirilir. Arka pençenin alt tarafına bir polipropilen uç uygulanır ve basınç kademeli olarak artırılır.

Uygun davranışsal tepki not edildiğinde, uyaran geri çekilir. Temel değerler toplandıktan sonra, hayvanlar daha fazla testten önce deneysel bir müdahale alır. Sonuç olarak, arka pençe çekilme eşiklerindeki değişiklikler, belirli bir tedavinin basınca karşı dokunsal duyarlılıktaki değişiklikler üzerindeki etkisini belirlemek için tedavi grupları arasında karşılaştırılır.

Ağrı, inflamasyonun önemli bir bileşenidir. Ağrıyı farklı bağlamlarda ölçmek ve karakterize etmek önemlidir. Bu nispeten basit ağrı değerlendirme yöntemi, birçok farklı inflamasyon modeline uygulanabilir.

Prosedürü göstermek, laboratuvarımda bir araştırma teknisyeni olan Tiana ov, bu çalışmada lisans öğrencisi olarak yer alan Madison Mack ve Akila Sykes olacak. Şu anda laboratuvarımda lisans öğrencisiyim. Arka pençelere kolay erişim için test aparatını kurarak başlayın.

Tek tek odaları bir ağ zeminin üzerine yerleştirin. Ağ zemini rahat bir yükseklikte ve sağlam bir yüzeyde olmalıdır. Daha sonra elektronik Von Frey cihazını tezgah üzerine yerleştirin.

Prob ve kablonun ekran ünitesine uygun şekilde bağlandığından emin olun ve cihazı kurulum modunda açın. Okumayı sıfıra ayarlayın ve sağlanan test ağırlığını yavaşça Von Frey probunun konisine yerleştirin. Okumayı kaydedin ve testin sonunda bu prosedürü tekrarlayın, iki değer arasında bir tutarsızlık varsa, cihazın yeniden kalibre edilmesi gerekebilir.

Test edilecek doku için uygun boyutta bir polipropilen uç seçin. Sert uçlar, daha az hassas, daha sert arka pençe dokusu için iyi çalışır. Ucu yavaşça probun konisine monte edin.

Daha sonra kurulum modundan çalışma moduna geçin. Bu, prob geri çekildiğinde uygulanan maksimum basıncı gösterecektir. Arka pençe çekme eşiklerini ölçmek için iki araştırmacıya ihtiyaç vardır.

Biri, cihazı çalıştırmak ve ölçümleri yapmak, diğeri ise önyargıyı azaltmak için bu ölçümleri kaydetmek. Anestezi TER'i çalıştıran araştırmacı, tedavilere ve kaydedilen geri çekilme eşik değerlerine karşı kör olmalıdır. Ayrıca, ölçümler arasında tutarlılığı sağlamak için, aynı kişi tüm temel ve geri çekilme eşiği değerlerini kaydetmelidir.

Tedaviden 48 saat önce, ilk başlangıç ölçümleri kaydedilir. Atılan atıkları toplamak için standın altına emici malzeme yerleştirin. Ucu monte ettikten ve probu sıfırladıktan sonra, ölçümleri kaydeden deneyci fareleri ayrı odalara yerleştirmelidir.

Hazneleri delikli kapaklarla örtün ve üstüne ağır bir nesne yerleştirin. Farelerin kaçmasını önlemek için, devam etmeden önce farelerin 15 dakika boyunca odaya alışmasına izin verin. Genel olarak, bu tekniğe yeni olan bireyler, artan basıncın kademeli olarak uygulanmasıyla mücadele edeceklerdir ve kendi ölçümleriyle iç tutarlılık sağlamakla, tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için pratik yapmak esastır.

Hazır olduğunuzda, probu yavaşça kaldırmak için iki elinizi kullanın ve sol veya sağ arka pençenin ayak tabanını uyarın. Nosiseptif bir davranış gözlenene kadar basıncı kademeli olarak artırın. Bunlar, arka pençe geri çekme, arka pençe yalama veya pençe atlama ile tanımlanır.

Diğer araştırmacıya, gözlemlenen davranışı ortaya çıkaran baskıyı kaydetmesi talimatını verin. Ölçüm yaparken, haznenin hemen dışına bir yemek damağı yerleştirerek veya ölçüm yapılmadan önce hafif bir dokunuş gibi hafif bir ses çıkararak fareyi hareketsiz durmaya teşvik etmek faydalı olacaktır. Her biri bir kez test edilene kadar bir sonraki fareye devam edin ve bu işlemi dört kez daha tekrarlayın.

Beş temel değer topladıktan sonra, her fare için bir ortalama elde edin. Temel ölçümleri 24 saat sonra tekrarlayın ve başka bir ortalama hesaplamak için bu değerleri kullanın. Tüm farelerin tutarlı başlangıç tepkilerine sahip olduğundan emin olmak için, ortalama temel çekilme eşiği 3.5 gramın altında olan veya temel eşikleri iki gram veya daha fazla farklılık gösteren hayvanları hariç tutun.

Son olarak, fareleri ayrı tedavi gruplarına atayın, böylece her birinin ortalama geri çekilme taban çizgisi mümkün olduğunca benzer olur Burada, arka pençe, zehir uygulaması, ROS raca'dan sonra çekilme eşikleri ölçüldü. Tuzlu su ile muamele edilmiş kontrol. Fareler, tüm zamanların taban çizgisine kıyasla çok az değişiklik gösterdi.

Tedavi edilen farelerde test edilen nosiseptif yanıtlar, altı saate kadar açıkça korunmuştur. Ek olarak, iltihabın karakteristiği olan doku ödemi zehirde belirgindi, ancak tuzlu su ile tedavi edilmiş arka pençelerde yoktu. Dokunsal duyarlılıkta zehir kaynaklı değişikliklere neredeyse 1000 kat nötrofil akışı eşlik etti.

Tuzlu su ile tedavi edilmiş pençelerdeki tuzlu su ile tedavi edilmiş arka pençelerle karşılaştırıldığında, arka pençe dokusundaki plantar mast hücreleri büyük ölçüde sağlamdı veya hafif degranülasyon gösterdi. Buna karşılık, çiftleşmiş hindada, mast hücrelerinin% 15 ila 20 oranında orta ve geniş degranülasyonu gösterdi. Bu teknik, arka pençe dışındaki çok çeşitli dokularda mekanik veya dokunsal hassasiyeti değerlendirmek için uyarlanabilir.

Bu nedenle, bu teknik birçok farklı kemirgen iltihaplanma ve ağrı modeline dahil edilebilir.