Yakın Kızılötesi (NIR) Işık Fare Vestibüler Duyu Epitelinin Mitokondriyal Fonksiyonun bir Marker Anlatım artırır

Aşağıdaki deneyin genel amacı, yakın kızılötesi ışığın fare vestibüler duyusal epiteli üzerindeki potansiyel nöroprotektif etkisini araştırmaktır. Bu, çeşitli gelişim aşamalarında farelere yakın kızılötesi ışığın basit, kısa süreli bir transkraniyal uygulamasıyla elde edilir. İkinci adım olarak, tedavi edilen hayvanların kemikli labirentleri diseke edilir ve vestibüler duyusal epitelin izolasyonuna izin verilir.

Daha sonra, ilgilenilen antioksidan genin ekspresyonu, tedavinin mitokondriyal performans üzerindeki etkisini değerlendirmek için R-T-P-C-R ile ölçülür. Son olarak, kısa yakın kızılötesi ışık tedavisinin farelerde spesifik antioksidan genlerin ekspresyonu üzerindeki etkisini değerlendirmek için dansitometri yapılır. Bu yakın kızılötesi tedavi tekniğinin ana avantajı, basit ve non-invaziv olması ve tedavi sonrası daha fazla aşağı akış fizyolojik, moleküler ve davranışsal analize izin vermesidir.

Bu tekniğin etkileri, normal yaşlanma sırasında periferik vestibüler sistemin potansiyel nöroproteksiyonuna veya vestibüler hastalık veya eksikliği takiben dengeli performansın iyileştirilmesine kadar uzanır. Deneye başlamadan iki ila üç gün önce, tedavi rejiminin tamamlanmasından önce hayvanın tüylerinin yeniden büyümesini önlemek için her farenin baş ve boyun bölgelerindeki kürkü mümkün olduğunca yakın bir şekilde tıraş edin. Hayvanların patojenden arınmış durumunu korumak için, aletleri her tıraş arasında %70 etanol ile temizleyin.

Daha sonra, her bir hayvan stajyeri için tedavi gününde, fareyi kuyruğun proksimal ucundan alın ve yakın kızılötesi tedavi edilen hayvanlar için stresi en aza indirmek için bir elin avucunda gevşemesine izin verin. Her hayvan için, traş edilen alandan bir ila iki santimetre uzakta 670 nanometrelik bir LED cihazı tutun ve cihazı 90 saniye boyunca açın. Sahte grup için, tedavi prosedürünü aynı şekilde tekrarlayın, ancak yakın kızılötesi tıkalı grup için cihaz kapalıyken, hayvanlara yakın kızılötesi tedavi edilen grupla aynı şekilde davranın, ancak cihaz alüminyum folyo ile kaplı.

Her grup için tedavileri art arda beş gün boyunca 24 saatlik aralıklarla tekrarladıktan sonra, taze hazırlanmış, gliserol bazlı yapay beyin omurilik sıvısını veya A BOS'u eksi 80 santigrat derece dondurucuda 45 dakika boyunca bir buz bulamacı oluşana kadar dondurun. Önümüzdeki. Her fare için, kafatasının sagital derisi boyunca bir kesi yapmak için yuvarlak bir 22 numaralı tıraş bıçağı kullanın, kranial tonoz beynini ve alttaki vestibüler aparatı, doku üzerinde düzenli buz gibi soğuk A BOS uygulamalarıyla mümkün olduğunca serin tutun. Daha sonra Lambda'da kafatasında küçük bir kesi yapmak için bir çift standart model makasın sivri kolunu kullanın ve sagital sütür boyunca kesin.

Daha sonra sığ bir URS'nin bir kolunu parietal kemiğin altına nazikçe kaydırın ve ardından beyin açığa çıkana kadar parietal kemiği yanal olarak ve oksipital kemiği arkaya doğru sabitleyin ve çekin. Daha sonra beyni ön ve orta kraniyal fossadan uzaklaştırmak için küçük bir paslanmaz çelik spatula kullanın. Vestibüler koklear siniri açığa çıkarmak için, vestibüler saç hücrelerini doğrudan innerve eden primer afferent aksonlar üzerinde gereksiz gerginliği önlemek için siniri kesin.

Daha sonra beyni toto'da çıkarın ve orta kraniyal fossadaki koklea ve periferik vestibüler organları içeren kemikli labirenti gözlemleyin. Şimdi her kemikli labirentin yanında iki küçük kesi yapın ve tüm yapıyı çıkarmak için ön yarım daire kanalını yanal olarak tutun ve çekin. Daha sonra, eksize edilmiş labirenti hemen buz gibi soğuk A BOS solüsyonu içeren bir diseksiyon kabına daldırın ve sürekli olarak karbojen ile perfüze edin.

Bu prosedürün en zor kısmı, önerdiğimiz her hayvan için tutarlı miktarlarda canlı doku elde etmektir: dikkatli gözlem ve dokunun özel olarak aydınlatılması. Daha sonra, bir stereo mikroskop altında, labirenti koklea tarafından tutun ve düz ince forseps kullanarak dokuyu tabağın dibine sabitlemek için forseps kullanın. Ön yarım dairesel kanal ulasının üzerindeki kemikte küçük bir açıklık çizin.

Ardından kemiğin hemen altına ulaşın ve açıklığı nazikçe genişletmek için ULA'dan dışarı doğru itin. Utrikül ve ön ve lateral pulun tümü açığa çıkana kadar bu şekilde devam edin. Ardından, utrikülü nazikçe kaldırmak için ince forseps kullanın ve pule'yi tamamen ayrılana kadar kemikli labirentten uzaklaştırın.

Son olarak, vestibüler organları forsepsin ucu arasında güvenli bir şekilde kavrayın ve taze hazırlanmış lizise yerleştirin. Vidalı bir mikro tüpte tamponlayın, vestibüler organları ayırmak için forsepsleri tamponda hafifçe döndürün. Daha sonra, forsepslerin stereo mikroskop altında dokudan arınmış olduğunu doğruladıktan sonra, mikro tübül kapağını vidalayın ve genç ve yaşlı fareler arasındaki yakın kızılötesi tedavinin etkisini karşılaştırmak için numuneyi hemen sıvı nitrojen içinde dondurun.

Haberci, RNA tersine çevrildi, tamamlayıcı DNA'ya kopyalandı, daha sonra antioksidan süperoksit dismutaz bir veya SOD bir ekspresyonu, dansitometri ile ölçüldüğü gibi analiz edildi, beta aktin normalize edilmiş SOD'da önemli bir artış, genç, yakın kızılötesi tedavi edilen hayvanlarda, genç sahte muamele edilen hayvanlara ve genç yakın kızılötesi bloke hayvanlara kıyasla iki kattan fazla bir ekspresyonu gözlendi. Daha yaşlı yakın kızılötesi tedavi edilen hayvanlar, daha yaşlı yakın kızılötesi bloklu hayvanlarla karşılaştırıldığında, çim olanın iki katından fazla yukarı regülasyonu sergiledi. Bu prosedürü takiben, yakın kızılötesi ışık, vestibüler duyusal epitelde diğer gen veya protein ekspresyonunu arttırır mı? gibi ek soruları yanıtlamak için davranışsal, moleküler veya fizyolojik deneyler yapılabilir.

Yoksa yakın kızılötesi ışık, tedavi edilen farelerin genel denge performansını iyileştirir mi?