Deri Cerrahi denervasyon: Cilt Hastalıkları Fare modelleri Sinirler için Gereği Test Bir Yöntem

Bu prosedürün genel amacı, sinirlerin normal ve patolojik cilt üzerindeki etkisini incelemektir. Bu yöntem, kutanöz sinirlerin homeostaz ve hastalıkları etkileyip etkilemediği gibi normal cilt biyolojisindeki temel soruları yanıtlamak için kullanılabilir. Bu tekniğin temel avantajı, aynı hayvandan alınan sağlam ve denerve edilmiş cilt örneklerini karşılaştırabilmenizdir.

Sinirlerin tanınması ve çevre dokulara minimum zarar verilerek çıkarılması zor olabildiğinden, bu tekniğin görsel demonstrasyonu kritik öneme sahiptir. İlk olarak, fareyi anestezi altına alın ve ayak parmağı sıkıştırma testi ile uygun sedasyon düzeyine ulaştığından emin olun. Ayrıca, farenin normal nefes alışverişi ve kalp atışının olduğunu doğrulayın.

Şimdi hayvanı aseptik bir cerrahi alanındaki ısıtma pedinin üzerine yerleştirin. Elektrikli bir tıraş makinesi kullanarak, biyopsinin alınacağı dorsal bölgedeki tüyleri dikkatlice temizleyin. Ardından, tıraş edilen alanı Betadyne ve alkollü mendillerle silin.

Tüm saç kırpıntılarının bölgeden temizlendiğinden emin olun. Şimdi biyopsi bölgesini siyah bir markörle çevreleyin. Kıl foliküllerinin boylamsal kesitlerini elde etmek için, biyopsinin uzun kenarı dorsal orta hattın parasetidal bölgesinde, anteriordan posteriöre doğru uzanmalıdır.

Bir skalpel kullanarak, alttaki kas fasyasına zarar vermeden tam kat bir eksizyon yapın. Kanama genellikle minimaldir. Biyopsi örneği epidermis, dermis, subkutan yağ ve panniculus carnosus'u içermelidir.

Kese edilen deri örneğini, dermis tarafı aşağı gelecek şekilde kuru bir kağıt havlu üzerine yayın. Fazla kağıt havluyu kesin ve eğer başka örneklerin toplanması gerekiyorsa, örneği bir saate kadar soğuk TBS içerisinde saklayın. Fareye geri dönerek, biyopsi bölgesini yaklaşık üç milimetre aralıklarla 60 naylon sütürler kullanarak dikin.

Ardından fareyi, bilinci yerine gelene kadar bir iyileşme kafesinde gözlemleyin. Belirlenmiş kurumsal hayvan bakım standartlarına uygun olarak analjezikler kullanın ve farenin stres altında olduğu görülürse bu kılavuzları takip edin. Ameliyattan sonraki yedi ila 10 gün içinde sütürleri alın.

Biyopsilerin histoloji veya tüm mount boyama işlemleri için hazırlanmasına geçin. Hayvanı anesteziye alın, tüm dorsal deriyi tıraş edin ve bölgeyi biyopsi prosedürüne benzer şekilde temizleyin. Şimdi, steril bir skalpel kullanarak, boynun tabanından kuyruğun yaklaşık yarım santimetre yukarısına kadar dorsal orta hat boyunca bir insizyon yapın.

Steril küt uçlu pensler kullanarak, boyun yakınındaki skapular yağ yastıkçıklarından arka ekstremitenin hemen üstüne kadar olan alttaki dokuyu görüntülemek için sol taraftaki deriyi flanktan nazikçe geri çekin. Şimdi diseksiyon ışıklı mikroskobu altında dorsal kütanöz siniri belirleyin. Bunlar, gövde duvarının şeffaf fasyası boyunca kaudal yönde ilerleyen, ardından keskin dönüşler yaparak derinin altındaki gevşek bağ dokusuna giren beyaz lifler şeklinde görünür.

Ardından, ultraince pensler kullanarak, hayvanın sadece sol tarafında, T3 ile T12 arasındaki anatomik bölgelerde bulunan sinirleri, gövde duvarındaki kıvrım noktalarından deriye giriş yaptıkları noktalara kadar çekerek çıkarın. Pensleri dikey olarak konumlandırın ve sinirleri kıvrım noktalarının yaklaşık yarım santimetre altından kavrayın. Kavradıktan sonra, sinirlerin gerilmesini ve çevre dokulardan ayrılarak çıkmasını sağlamak için yukarı doğru çekin.

Komşu kan damarlarının zarar görmesinden kaçının. Periyodik olarak 0.9% steril salin solüsyonu damlatarak prosedür boyunca dokunun nemli kaldığından emin olun. Gövde duvarından deriye uzanan tüm sinirleri çıkarmaya devam edin, ancak gövde duvarının yoğun fasyası içindeki sinirlere zarar vermeyin.

Ardından, açığa çıkarılan deri flebindeki tüm sinirleri temizleyin. Bu lifler, dorsal kutanöz sinirin distal dallarından oluşur ve deri flebinin dermal tarafındaki bağ dokusu içinde yer yer görülen beyaz, dallanan iplikçikler şeklinde görünürler. Bu ince dalları temizlemek için, penseti dermal yüzeye kabaca paralel olarak konumlandırın, siniri kavrayın ve yukarı doğru çekerek çıkarın.

Görünen tüm sinirleri bu şekilde çıkarın. Kan damarlarını ve cildi delmeyin. Bu adım sırasında, komşu kan damarlarının yırtılmasından kaçınmak önemlidir.

Yanında bir kan damarı bulunan bir sinir bulursanız, onu yanında damar bulunmayan bir bölgeye kadar takip edin ve çekerek çıkarın. Şimdi, dorsal orta hat insizyonunun sağ tarafındaki deriyi gevşetin ancak herhangi bir siniri çıkarmayın. Bu işlem, kontralateral şam operatif kontrol olarak hizmet edecektir.

Son olarak, hayvanı dikin ve ameliyat sonrası takibini daha önce olduğu gibi yapın. Daha sonra, sinir kaybının kalıcı olduğunu doğrulamak için, cerrahiden haftalar sonra, denerve edilen bölgeyi steril bir hipodermik iğne kullanarak hafifçe dürtün. Hayvanın, tipik olarak titreyerek veya başını çevirerek tepki verip vermediğini not edin.

Cilt bölgesi stabil bir şekilde denerve edilmişse, hayvan az tepki verecek veya hiç tepki vermeyecektir. Eşleştirilmiş deneysel ve kontrol örnekleri elde etmek için, tepki vermeyen bölgeden ve karşı taraftaki şam (kontrol) taraftan cilt biyopsileri alın. Biyopsilerde, şam ve denerve örnekler arasındaki dokunma kubuğu (touch dome) bolluğu veya morfolojisindeki potansiyel farkları belirlemek için birden fazla histolojik kesit örneği almak önemlidir.

Glebe one cree ERT2 fare hattı, tamoksifenle indüklenen genetik rekombinasyonun, dokunma kubbesi epitelleri gibi yüksek hedgehog yolu aktivitesi gösteren deri bölgelerine hedeflenmesine olanak tanır. Dokunma kubbesi epitellerini görselleştirmek için bu fareler, induce abolaxi reporter farelerle çaprazlanmıştır. Nodlar, hem normal dokunma kubbelerinin hem de bunlarla ilişkili Merkel hücrelerinin korunması için kritik öneme sahiptir.

Bu durum, denervasyon sonrası normal dokunma kubbesi morfolojisinin kademeli kaybı ve keratin sekiz birikmiş hücrelerin kaybı ile deneysel olarak gösterilmiştir. Sinirler ayrıca, sham ve denerve deri örneklerinden alınan Glebe one cree ERE2 ekspresyonları ve home-mount beta kolektif sided boyamaları ile izlendiği üzere, dokunma kubbesinde hedgehog sinyalizasyonunun teşvik edilmesi için kritik öneme sahiptir. Bu videoyu izledikten sonra, bu sinirlerin normal cilt fonksiyonunda rol oynayıp oynamadığını veya hastalığı modüle edip etmediklerini test etmek amacıyla dorsal kutanöz sinirlerin cerrahi olarak nasıl ablate edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

Bu teknik bir kez kavrandığında, hayvana minimum düzeyde stres vererek rutin ve güvenilir bir şekilde uygulanabilir. Bu prosedürün ardından, sinirlerin deriden tamamen yok edilip edilmediğini ve gen ekspresyonunun etkilenip etkilenmediğini doğrulamak için amino floresan boyama gibi yöntemler kullanılabilir.