Yatak Bug karşı Böcek etkinliğini değerlendirmek için bir yöntem, Cımex lectularius Yumurta ve İlk instars
15 Mart 2017
İnsektisit değerlendirmeler genellikle yetişkin böcekler yerine olgunlaşmamış aşamalarında karşı hedeflenir. Burada, ilk nimf yatak böcek aşamasına bir karşılaştırma ile yatak hata yumurta karşı böcek değerlendirmek için bir protokol mevcut. Bu protokoller, yetişkin olmayan yaşam evrelerinde insektisit etkinliğini değerlendirmek için başka böcekler için ayarlanabilir.
Bu deneyin genel amacı, böcek ilaçlarının tahtakurusu yumurtalarını ve ilk instarları öldürmedeki etkinliğini değerlendirmektir. Bu yöntem, toksikolojik tahlillerin tahtakurusu yumurtaları ve küçük nimfler üzerindeki etkileri gibi entomoloji alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, zor bir böcek yaşam evresini, özellikle yumurta evresini böcek ilaçları ile tedavi etmek için tasarlanmış olmasıdır.
Deneye başlamak için, bir koloniden beş ila 10 çiftleşmiş, iyi beslenmiş yetişkin dişi yatak böceği çekin ve dişileri filtre kağıdı ile bir Petri kabına yerleştirin. Böcek ilacı tahlili için yeterli yumurta olacağından emin olmak için 10 kopya hazırlayın. Dişilerin yumurtlayıp yumurtlamadığını görmek için her gün bulaşıkları kontrol edin.
Dişiler yumurtladıktan sonra, dişileri Petri kabından çıkarın ve her gün yeni bir filtre kağıdı ile yeni Petri kaplarına koyun. Eski ve yeni Petri kaplarındaki verileri kaydedin. Teste başlamadan önce yumurtaların dört ila beş gün yaşlanmasına izin verin.
Yumurtalar uygun şekilde yaşlandıktan sonra, yumuşak uçlu forseps kullanarak tahtakurusu yumurtalarını filtre kağıtlarından nazikçe çıkarın. Filtre kağıdına bağlı yumurtanın altını forseps kullanarak nazikçe kazıyın ve ardından tahtakurusu yumurtalarını fırlatmamak için çok fazla baskı uygulamadan yumurtayı nazikçe tutun. Çıkarılan tahtakurusu yumurtalarını plastik Petri kaplarının içine kendi gruplarına yerleştirin.
Tahtakurusu yumurtalarının fırlatılmasından kaynaklanan statik elektriği sınırlamak için her bir Petri kabının altını bir yumuşatıcı tabaka ile ovalayın. Daha sonra, beş farklı konsantrasyonda bir aralık ve her biri 20 mL'lik bir hacme kadar sadece musluk suyu içeren bir kontrol çözeltisi elde etmek için insektisitlerin seri seyreltmelerini hazırlayın. mL hattında önceden kesilmiş 50 mL'lik santrifüj tüplerini alın ve ardından ince ağı kapağa sığacak kadar büyük kareler halinde kesin.
Santrifüj tüpü kapağını kullanarak santrifüj tüplerine herhangi bir çarpma olmasını ortadan kaldırarak ağı sıkıca vidalayın. Daha sonra, bir boya fırçası kullanarak, bir santrifüj tüpünün içindeki ağa bir grup tahtakurusu yumurtası yerleştirin. Kesilmiş santrifüj tüpünün içindeki tahtakurusu yumurtası grubunu beş saniye boyunca bir böcek ilacı konsantrasyonuna batırın.
Santrifüj tüpünü böcek ilacı çözeltisinden çıkarın. Kafesi içindeki yumurtalarla kurutmak için santrifüj tüpünü doğrudan laboratuvar dokusunun üzerine yerleştirin. Kuruduktan sonra, küçük ince kıllı bir boya fırçası kullanarak yumurta grubunu santrifüj tüpünden çıkarın ve temiz bir filtre kağıdı ile temiz bir Petri kabına yerleştirin.
Tüm yumurtaların çatlaması için yeterli zamana sahip olduğundan emin olmak için yumurta ölümünü 14 gün boyunca kaydedin. Abbott formülünü kullanarak kontrol tedavisinde mortalite için düzeltin. LC50 değerlerini hesaplamak için kaydedilen mortaliteyi karşılık gelen konsantrasyonlarla birlikte analiz yazılımına ekleyin.
Önceki gün beslenen beş yetişkin erkek ve beş yetişkin dişi yatak böceğinden oluşan bir grubu ayırın ve bunları filtre kağıdı ile bir Petri kabına yerleştirin. Yetişkin yatak böceklerinin çiftleşmesine ve sekiz gün boyunca yumurta bırakmasına izin verin. Daha sonra yetişkinleri Petri kaplarından çıkarın ve yumurtaların Petri kapları içindeki ilk yıldızlara girmesine izin verin.
Aynı yaştaki beslenmemiş ilk yıldızları bir boya fırçası kullanarak toplayın, ardından böcek ilacı tahlili yapılana kadar yeni temiz Petri kaplarına yerleştirin. Kontrol grubu için önceden hazırlanmış beş insektisit ve su seyreltmesinin her birinden 150 mikrolitrelik alikotları ayrı filtre kağıtlarına pipetleyin. Filtre kağıdının tüm kenarına ve ortasına damlacıklar uygulayarak böcek ilacını eşit olarak dağıtın.
İşlem görmüş filtre kağıtlarını ayrı ayrı sunta panellerin üzerine yerleştirin. Hala böcek ilacı ile ıslakken ilk instar gruplarını tek tek filtre kağıtlarına bırakın ve ilk instarları bir Petri kabının dibi ters çevrilmiş olarak örtün ve ilk instar yatak böceklerinin kaçmasını önlemek için Petri kabının üzerine bir ağırlık koyun. Tüm insektisit konsantrasyonlarına 24 saat maruz kaldıktan sonra ilk instar yatak böceklerinin ölüm oranını kaydedin.
Abbott formülünü kullanarak kontrol tedavisinde mortalite için düzeltin. LC50 değerlerini hesaplamak için kaydedilen mortalite ve konsantrasyonları analiz yazılımına girin. Harlin suşu yatak böcek yumurtalarının beş farklı metokloprid beta-siflutrin konsantrasyonuna yüzde tepkisi veya mortalitesi, doz arttıkça artmıştır.
Test edilen en yüksek konsantrasyonda mortalite %100'e ulaştı. Bu videoyu izledikten sonra, tahtakurusu yumurtalarına ve ilk instars'a karşı insektisit etkinliğini nasıl değerlendireceğinizi daha iyi anlamış olmalısınız.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu çalışma, insektisitlerin tahtakurusu yumurtaları ve birinci dönem nimfleri üzerindeki etkinliğinin değerlendirilmesi için bir protokol sunmaktadır. Yöntem, geleneksel değerlendirmelerde sıklıkla göz ardı edilen erişkin olmayan yaşam evrelerinde insektisit etkinliğinin belirlenmesindeki zorlukları gidermeyi amaçlamaktadır.
Temel Çalışma Bileşenleri
Bilim Alanı
- Entomoloji
- İnsektisit etkinliği
- Böcek yaşam evreleri
Arka Plan
- İnsektisit değerlendirmeleri tipik olarak ergin böceklere odaklanır.
- Yumurta ve nimf gibi olgunlaşmamış evreler, haşere kontrolü için kritik öneme sahiptir.
- İnsektisitlerin bu evreler üzerindeki etkilerinin anlaşılması, haşere yönetim stratejilerini geliştirebilir.
- Bu çalışma, tahtakurusu yumurtaları üzerinde insektisitleri değerlendirmek için özelleştirilmiş bir yöntem sunmaktadır.
Çalışmanın Amacı
- İnsektisitlerin tahta biti yumurtaları ve birinci instarlar üzerindeki etkinliğini değerlendirmek.
- Diğer böcek türlerine uyarlanabilecek bir protokol geliştirmek.
- Entomoloji alanında, insektisitlerin ergin olmayan evreler üzerindeki etkilerine ilişkin bilgileri artırmak.
Kullanılan Yöntemler
- Çiftleşmiş ve iyi beslenmiş 5 ila 10 adet yetişkin dişi tahtakurusu toplayın.
- Dişileri, içinde filtre kağıdı bulunan bir Petri kabına yerleştirin.
- Yeterli yumurta üretimini sağlamak için 10 tekrar hazırlayın.
- Yumurta bırakma durumunu gözlemlemek için kapları günlük olarak takip edin.
Ana Sonuçlar
- Protokol, insektisitin tahtakurusu yumurtaları üzerindeki etkinliğini başarıyla değerlendirmektedir.
- Duyarlılığı karşılaştırmak amacıyla birinci instarlar da değerlendirilmiştir.
- Sonuçlar, haşere kontrolünde olgunlaşmamış evreleri hedeflemenin önemini göstermektedir.
- Bu yöntem, diğer böcek türleri için de uyarlanabilir.
Sonuçlar
- İnsektisitlerin ergin olmayan evreler üzerindeki etkilerini değerlendirmek, etkili zararlı yönetimi için kritik öneme sahiptir.
- Bu çalışma, gelecek araştırmalar için değerli bir protokol sunmaktadır.
- Diğer böcek zararlıları üzerindeki etkileri araştırmak için daha fazla çalışmaya ihtiyaç vardır.
Sıkça Sorulan Sorular
Endüstriyel Uygulama ve Önem
Yumurtalar ve erken instarlar da dahil olmak üzere tüm yaşam evrelerinde insektisit etkinliğinin değerlendirilmesi, biyofarma ve halk sağlığı Ar-Ge'sindeki kapsamlı haşere kontrol stratejileri için kritiktir. Bu yöntem, tahtakurusunun olgunlaşmamış evreleri üzerindeki toksikolojik etkinin nicel olarak değerlendirilmesini sağlayarak vektör kontrol programlarında hedef doğrulamasını ve mekanistik risk azaltmayı destekler. Yetişkin olmayan yaşam evreleri için konsantrasyon-yanıt verileri ve LC50 değerleri üreterek bu yaklaşım, yeni insektisit bileşiklerin erken aşama keşfinde ve portföy önceliklendirmesinde öngörü güvenilirliğini artırır.
Biyofarma Ar-Ge'sinde Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Bilimsel Değer: Hassas yaşam evreleri boyunca insektisid mekanizmalarının sorgulanmasına olanak tanıyarak, yumurtalardaki ve birinci instarlardaki hedef etkileşimini netleştirir.
- Operasyonel Değer: Geleneksel yetişkin odaklı deneylerin yetersiz kalabileceği durumlarda aktiviteyi doğrulayarak biyolojik risk azaltımını destekler.
- Öngörücü Değer: Evreye özgü etkinlik profillemesi yoluyla hedef güvenini artırır ve öncü bileşik tanımlama sürecindeki devam/durdur kararlarına bilgi sağlar.
Tarama ve Analiz Geliştirme
- Bilimsel Değer: Tahta biti yumurtaları ve birinci dönem larvalarda LC50 değerini belirlemek için standartlaştırılmış, tekrarlanabilir konsantrasyon-yanıt eğrileri oluşturur.
- Operasyonel Değer: Daldırma ve temas deneyleri kullanarak insektisit dilüsyonlarının ve maruziyet protokollerinin ölçeklenebilir, yüksek kapasiteli hazırlıklarına olanak tanır.
- Analiz Hazırlığı: Bileşik taraması ve yapı-aktivite ilişkisi analizi için uygun olan kantitatif mortalite çıktıları üretir.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Bilimsel Değer: Popülasyon dayanıklılığına katkıda bulunan erken yaşam evrelerinde etkinliği değerlendirerek hastalıkla ilgili sistem modellemesini destekler.
- Operasyonel Değer: Yaşam döngüsü boyunca gelişen duyarlılığı kapsayarak, keşif aşamasından preklinik doğrulamaya kadar translasyonel sürekliliği sağlar.
- Riskten Arındırılmış İlerleme: Evreye özgü direnç veya tolerans modellerini ortaya çıkararak preklinik devam/durdurma kararlarına temel oluşturur.
Boru Hattı ve İş Akışı Entegrasyonu
Yöntem, özellikle vektör kontrolü ve halk sağlığı insektisit geliştirme çalışmaları için, erken hedef doğrulamadan öncü bileşik tanımlama ve preklinik değerlendirmeye kadar olan keşif sürekliliğine entegre edilmektedir.
- Keşif Biyolojisi: Standart taramalarda sıklıkla gözden kaçan yetişkin olmayan yaşam evrelerinde etkinlik değerlendirmesine olanak tanıyarak, insektisidal mekanizmaların hipotez testlerini destekler.
- Tarama: Tekrarlanabilir, kantitatif mortalite verileri sağlayan standart daldırma ve temas protokolleri aracılığıyla analiz hazır bulunuşluğu sunar.
- Analitik: Bileşikler arası karşılaştırmaya ve potens sıralamasına izin veren LC50 hesaplamaları ve konsantrasyon-yanıt modellemesi sağlar.
- Translasyonel Araştırma: Direnç yönetiminde temel bir faktör olan tahtakurusu yaşam döngüsü boyunca etkinliği ele alarak, erken evre bulguları preklinik sürekliliğe bağlar.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Tedavisi zor yaşam evrelerine karşı yeni insektisidal bileşiklerin değerlendirilmesi için yeniden kullanılabilir bir platform oluşturarak, tekrarlayan analiz geliştirmelerini azaltır.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Evreye özgü duyarlılığı ortaya çıkararak ve insektisit etkisindeki mekanistik belirsizliği azaltarak öngörü güvenilirliğini artırır.
- Operasyonel Değer: Yumurta ve birinci instar analizleri için standartlaştırılmış, tekrarlanabilir protokoller sunarak laboratuvarlar arası değişkenliği minimize eder.
- Stratejik Değer: Olgunlaşmamış evrelere karşı başarısız olan bileşiklerin erken aşamada riskten arındırılmasını sağlayarak geç aşama başarısızlıklarını önler ve sermaye verimliliğini artırır.
- Portföy Etkisi: Geniş yaşam döngüsü aktivitesine sahip bileşikleri tanımlayarak risk ayarlı önceliklendirmeyi destekler ve ilerleme kararlarını iyileştirir.
Uygulama Hususları
- Entomolojik uygulama, böcek yetiştiriciliği ile yumurtaların ve erken instarların mikro-manipülasyonu konusunda uzmanlık gerektirir.
- Analiz geçerliliğini sağlamak için hassas dilüsyon hazırlığına, maruziyet zamanlamasına ve çevresel kontrollere bağlıdır.
- Kontrol grubuyla düzeltilmiş analizler için Abbott formülü kullanılarak standardize edilmiş mortalite skorlaması ve düzeltme gerektirir.
- Protokolün, farklı yumurta morfolojisine veya instar davranışına sahip diğer böcek türlerine genişletilmesi durumunda adaptasyon değerlendirmeleri içerir.
- Pratik sınırlamalar arasında; otomasyon olmadan kapasiteyi kısıtlayabilecek yumurta toplama, yaşlandırma ve bireysel işlem süreçlerinin emek-yoğun doğası yer alır.
